高亲和力高纯度零污染的细胞培养级抗体制备指南
单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),是针对专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年,主要原理是利用产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。目前大量制备单抗的方法主要有两种方法:一种是动物体内生产法(腹水制备),在小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞,杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体,约1-2周,可见小鼠腹部膨大,用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体;另一种是细胞体外培养法,将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养,在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。单克隆抗体的制备流程腹水制备法操作简单、制备成本低,是目前国内生产抗体的主要方式,但是,得到的腹水常混有小鼠的各种杂蛋白(包括Ig),而且还有污染动物病毒的危险。而体外培养法通过转瓶培养制备的细胞培养级抗体,不但不含小鼠杂蛋白和动物病......阅读全文
抗体的制备
为了研究抗体的理化性质、分子结构与功能,以及应用抗体于临床疾病的诊断、治疗及预防都需要人工制备抗体。目前,根据制备的原理和方法可分为多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体三类。 一、多克隆抗体 大多数抗原是由大分子蛋白质组成,但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合,称此部位为抗原
怎样制备荧光抗体?
(一)抗体要求将荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成。一般需经纯化提取IgG后再作标记。(二)荧光素要求 异硫氰酸荧光素最常用要求:①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除;②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率;③
荧光抗体的制备
1 荧光素与抗体结合(标记) 2 荧光抗体的纯化 3 荧光抗体的鉴定 1.荧光素与抗体结合方法: ⑴ 透析法:①适用于蛋白质含量低、样品体 积小的抗体溶液的标记 ②标记较均匀,非特异荧光较低 ⑵ 搅
抗肽抗体的制备
实验材料 抗体 试剂、试剂盒 磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS 仪器、耗材 分光光度计离心机 实验步骤 1. 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中,置于一个2 ml 的玻璃试管,加50 μl MBS/D
多克隆抗体的制备
多克隆抗体的制备 1. 器材: 剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把,手术刀架,手术刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附针头,兔子固定架,灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径 18cm)、弯头止血钳四把,直头止血钳两把,手术缝合线,塑
多克隆抗体制备
1. 免疫动物:两只新西兰兔 2. 佐剂:首先用完全弗氏佐剂(CFA),后用不完全弗氏佐剂(IFA)。 3. 免疫原:蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。 4. 免疫:用生理盐水稀释免疫原,然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂,将该乳剂在兔子双肩周围
单克隆抗体上清制备实验——大量制备
实验材料目的杂交瘤试剂、试剂盒完全 DMEM-10 培养液(含 5~10 mmol/L HEPES pH 7.2~7.4)仪器、耗材250 ml 无菌锥形离心管转瓶培养装置850 cm2 旋转培养瓶175 cm2 组织培养瓶实验步骤1. 重复基本方案 1 步骤 1,并按 1:10 分传到终体积为 1
关于多克隆抗体的抗体制备介绍
多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤: 1、制备抗原。 2、选择实验动物。 3、动物免疫。 4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。 5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。 6、纯化出抗体。 7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。 具体操作与制备原理参见中国免疫学实验网。 (
单克隆抗体的制备
实验方法原理使用聚二乙醇(PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株(杂交瘤细胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査(ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握),然后对理想的杂交瘤细胞加以扩增、冷冻和
多克隆抗体的制备步骤
实验概要本实验通过兔免疫制备了多克隆抗体。主要试剂生理盐水(或PBS)弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,FCA)弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant, FIA)二甲苯,酒精棉,脱脂棉,2% NaN3主要设备剪刀(剪兔毛用)一把、弯