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抗体的制备

为了研究抗体的理化性质、分子结构与功能,以及应用抗体于临床疾病的诊断、治疗及预防都需要人工制备抗体。目前,根据制备的原理和方法可分为多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体三类。 一、多克隆抗体 大多数抗原是由大分子蛋白质组成,但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合,称此部位为抗原决定簇(antigenic determinant)或表位(epitope)。 一种天然抗原性物质(如细菌或其分泌的外毒素以及各种组织成分等)往往具有多种不同的抗原决定簇,而每一决定簇都可刺激机体一种抗体形成细胞产生一种特异性抗体。 在机体淋巴组织内可存在千百种抗体形成细胞(即B细胞),每种抗体形成细胞只识别其相应的抗原决定簇,当受抗原刺激后可增殖分化为一种细胞群,这种由单一细胞增殖形成的细胞群体可称之为细胞克隆(clone)。同一克隆的细胞可合成和分泌在理化性质、分子结构、遗传标记以及生物学特性等方面都是完全相同的均一......阅读全文

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

聚焦单克隆抗体药物技术瓶颈

  抗体是由B细胞转化而来的浆细胞分泌的,每个B细胞株只能产生一种它专有的、针对一种特异性抗原决定簇的抗体。这种从一株单一细胞系产生的抗体就叫单克隆抗体(McAb),简称单抗。第一代单抗来自于Koehler和Milstein于1975年开发出的杂交瘤(hybridoma)抗体技术:在细胞融合技术的基

如何选择合适的单、多克隆抗体及抗原

   多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb):用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆,产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,即多克隆抗体。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体

如何选择合适的单、多克隆抗体及抗原?

多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb):用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆,产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,即多克隆抗体。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗

抗独特型抗体及其在医学研究中的应用(一)

  针对外来抗原的抗体分子(Ab1)可变区上Id可刺激机体产生相应的抗Id抗体(Ab2)。Ab2β具有与外来抗原相似的氨基酸排列顺序或空间构型,它能够在体内模拟始动抗原的作用。应用Ab2β的这一特性,可有目的地制备Ab2β,将其作为抗原的替代物用于基础和临床医学研究。  一、抗独特抗体的制

技术强则药物强-单个B细胞抗体制备技术

  如今,单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性,在肿瘤和自身免疫疾病的治疗中发挥了不可估量的作用,成为全球的研发热点,目前已有2400个单克隆抗体药物处于研发及商业化阶段。   1975年杂交瘤技术问世[1]。1986年鼠源单克隆抗体药物Muromonab的上市拉开了单克隆抗体发展的序幕。

基因工程重组抗体技术的研究

在抗体研究的漫长过程中,相继发展了三代不同水平的抗体制备技术。其中以抗原免疫高等脊椎动物制备的多克隆抗体,称为第一代抗体;通过杂交瘤技术生产的只针对某一种特定抗原决定簇的单克隆抗体,称为第二代抗体;应用重组DNA技术或是基因突变的方法改造某种抗体基因的编码序列,使之产生出自然界中原本存在的抗体蛋白质

单克隆抗体的制备(一)

材料1. 免疫原一旦作出制备单克隆抗体的决定后,首先要考虑的问题是使用何种免疫原(第2章)。免疫原(或抗原)可以有多种:全细胞、细胞提取物、纯化蛋白、融合蛋白、多肽、糖 类 、脂类或 D N A 等 。此外,制备单克隆抗体时不需要很纯或单一特异性的抗原,因为在单克隆抗体筛选的过程时,每个克隆

蛋白质磷酸化研究的相关方法节选

对于信号转导科研来说,抗酪氨酸磷酸化抗体的出现是一个意义重大的事件。在没有抗酪氨酸磷酸化抗体之前,蛋白质和酶的酪氨酸磷酸化只能通过非常危险的并且很费时的放射性实验来检测。而利用抗酪氨酸磷酸化抗体,则可以通过Western Blot或其它免疫学方法轻松地检测到磷酸化信号。常规的检测方法包括:用抗酪

免疫PCR技术(Immuno-PCR)

免疫PCR技术(Immuno-PCR) 免疫PCR方法(Immuno-PCR)是Takeshi等1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术,具有抗原、抗体反应的特异性和PCR技术的高效性。它运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性,使实验中只需数百个抗原分子即

单克隆抗体制备过程与原理

单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年,由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤,下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠

单抗和多抗怎么选了解一下

抗体是生物学科研工作中有力的工具,没有之一。这些“制导武器”,会在研究中主动寻找并结合研究者感兴趣的目标,并可通过各种示踪技术将目标展现出来。正是由于抗体的专一特性,研究者可能会依赖于示踪实验所显示的结果对所研靶标给出定性或定量的判断。也正因此,毫无疑问的,专一性或特异性是抗体最受科研工作者关注的特

国内外食品贵金属标准对比以及检测方法综述

  一般来说,重金属是指密度大于4.5g/cm3的金属,比如金、银、铜、铁、铅、锌、镍、钴、铬、汞、镉等,其中砷是非金属元素,但是其性质类似金属元素,根据它的毒性,在食品行业中也充斥着各种各样的贵金属的限制。  国际食品法典委员会的新标准  镉的含量精白米:< 0.4毫克/千克;贝壳类以及鱿鱼

单克隆抗体的制备实验

单克隆抗体的制备实验可以用于:(1)将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交, 获得既能产生抗体, 又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体;(2)该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo

抗体制备中你最关心的问题

  抗体制备是免疫学研究的基础。制备一个合适的抗体将会决定着免疫实验的成败。抗体制备过程涉及到很多个方面,比如免疫原如何设计、免疫过程的优化、目的抗体筛选、抗体纯化、应用鉴定等。接下来我们将会对一些关键的技术难点进行解答。   1. 免疫原是如何设计的?有什么原则?   解答:免疫原可以是天然蛋

未来几年生物制药产品研发走势分析

    制药业中发展最快、活力最强和技术含量最高的领域,当属生物制药。从1982年第一个新生物技术药物基因重组人胰岛素上市至今,生物制药只有20余年历史,但其却给世人带来了两个惊奇:一是促进医疗水平的突飞猛进;二是使“生物经济”在国民经济中占据了举足轻重的地位。   

抗体筛选技术汇总

  近年来,生物药的市场需求逐年扩容,其中抗体药物因其靶向性好,治疗效果显著,在生物药中占据着举足轻重的地位,目前已经进入了抗体药物发展的黄金时代。随着抗体药的需求越来越大,抗体筛选技术的发展也是日新月异,目前应用较普遍的有杂交瘤技术、抗体文库筛选技术、纳米抗体技术和转基因小鼠抗体筛选技术。其中抗体

基因敲除小鼠在抗体药物研发平台的应用

  “千鼠万抗”计划 (Project Integrum) 是百奥赛图抗体药物研发平台的重要组成部分。目标是利用3-5年时间,在全人抗体小鼠RenMab上,逐一对上千个潜在抗体药物靶点进行基因敲除,并利用这些基因敲除小鼠制备抗体的计划。其主要内容包括:   在RenMab上完成1000多个Ta

胶体金免疫层析法快速检测腹泻性贝毒软海绵酸的研究

胶体金免疫层析法快速检测腹泻性贝毒软海绵酸的研究   刘仁沿1 , 梁玉波3 1 , 陈 媛2 , 许道艳1 , 陈冰君1 , 刘永健1   (1. 国家海洋环境监测中心,辽宁大连116023 ;   2. 江西中德生物工程有限公司,江西南昌330029)   摘 要:腹泻性贝毒是一类分布较

Western Blot内参的选择不容忽视

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――

β-内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备

  β-内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备   目前,在我国奶牛养殖业中,青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素对奶牛乳房炎等疾病的控制起着十分重要的作用。由于一些奶牛养殖商户滥用抗生素以及未严格遵守休药期,致使牛奶中抗生素残留超标,乳中残留的抗生素严重危害食品安全和人体健康。我国政府对超过一定限

抗体纯化方法介绍

抗体制备制备出效价高,特异性强,稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础,抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败,不同的免疫学实验方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE, WB等)对抗体的效价,浓度和纯度有不同的要求。我们知道,一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体

光镜下双/多重免疫标记实验——免疫荧光双重标记TRITC-FITC

双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理,在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物,或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物,达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分(定性、定位、定撤),分析不同抗原成分相互间功能的增消关系,操作遵循的原则与要求同单

抗体的概念动物产生抗体的机理及单克隆抗体的制备方法

  抗体的概念    动物机体受到抗原物质的刺激后, 由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的, 能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白, 这类免疫球蛋白称为抗体(Antibody,简称 Ab)。   免疫球蛋白   免疫球蛋白(Immunogolobulin, 简称Ig) 是指存在于人和动物血液(

初步探讨ELISA的分类和发展

引言 1971年瑞典的Engvall等人分别以纤维素和聚苯乙烯试管作为固相载体吸附抗原/抗体,建立了酶联免疫吸附测(Enzyme Linked Immunosrbent Assay,简称ELISA),后来人们改用板式反应孔进行ELISA,大大地提高了实验通量。ELISA实验具有极高的灵活性

让青春的灵感闪耀在世界科技创新前沿

  ——广东省自然科学杰出青年研究课题自述选粹武创蔡瑞初吴宝剑徐振林周小平   编者按 2014年是广东省自然科学杰出青年基金实施的第三年,至今共资助97名杰出青年。资助经费为100万元/人。   广东省杰青从实施开始,培养方向就定在贴近服务广东发展的战略目标、以不拘一格的方式,在全国首创培养35周

胶体金免疫层析法快速检测腹泻性贝毒软海绵酸的研究 1

摘 要:腹泻性贝毒是一类分布较广的赤潮毒素,严重威胁到人类的健康和安全。本文用胶体金标记利用细胞融合技术制备的抗软海绵酸单克隆抗体,使用卵清蛋白合成高偶联比的包被抗原,以硝酸纤维素膜为载体,利用免疫层析技术原理,建立了快速检测软海绵酸的免疫层析试纸条方法。方法检出限12 ng/ mL (0

双特异性抗体,1+1>2的肿瘤治疗新贵

  近期生物药领域风起云涌,Venclexta、Atezolizumab等多个新型靶向药物取得突破性进展。这让我们再一次意识到,技术创新对于生物药开发的重要性。笔者在近期参加一些抗体/精准医疗峰会时发现产业界和市场都在关注着靶向药物、特别是抗体药方向的新型药物种类。因此我们撰写了《抗体药物•遇见未来

免疫印迹western实验中内参蛋白的选择和注意事项

  免疫印迹western实验中内参基因的选择和注意事项   Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。   虽然,顺利的时候Western blot做

免疫印迹western实验中内参蛋白的选择和注意事项

Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然,顺利的时候Western blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、