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薄层层析法测定氯霉素酰基转移酶含量实验

试剂、试剂盒 CAT 反应混合物 1乙基乙酸裂解缓冲液不含钙盐和镁盐的磷酸盐缓冲液薄层层析(TLC) 溶剂Tris-Cl放射性墨水仪器、耗材 干冰 乙醇浴不溶于乙醇的墨水的记号笔旋转真空蒸发器橡胶棒 薄层层析板薄层层析槽预设为 65°C 的水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的组分请见附录 1。贮存液稀释到适当浓度。CAT 反应混合物 11mol/LTris-Cl(pH7.8)50ul[14C] 氯霉素 (60mCi/mmol, 用水稀释到 0.1mCi/ml)10ul乙酰辅酶 A(新鲜配制,水溶液浓度 3.5 mg/ml)20ul每测定 50ul 细胞裂解物需要准备 80ulCAT 反应混合物。反应混合物在临用前配制。乙酰酶 A 是辅酶 A 的 S-乙酰基化形式。两个碘单位以这种形式从脂肪和碳水化合物进入柠檬酸循环。乙酰辅酶 A 在很多生物反应中作为乙酰基化的辅助因子,如在本方案中,通过 CAT 使氯霉素酰基化就......阅读全文

细菌细胞壁糖的薄层层析(thin layer chromatography,TLC)(1)

一、实验目的1.熟悉薄层层析的操作步骤。2.掌握薄层层析法分析细菌细胞壁糖的原理和方法。二、实验原理簿层层析是一种微量而快速的层析方法。该方法是把吸附剂或支持剂(例如硅胶或硅藻土)涂在玻璃板上成为一簿层,将要分析的样品滴加到薄层上,然后用合适的溶剂进行展开,使样品中各个成分分离,最后进行定性鉴定和定

层析技术及离心技术

(一)层析技术层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。可分为吸附层析法、分配层析法、离子交换层析法、凝胶层析法、亲和层析法、高效液相层析法等。在层析法中,根据层析峰的位置及峰高或峰面积,可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用,可检测出层析后各组分的浓度或质量,同时绘出层析图。

食用合成色素的测定(一)

  天然食品及食品原料多数本身具有特有的色泽和香味,人们在长期的生活习惯中也认识了各种食品应有的色泽,食品的色泽已经成为食品的一个重要感官指标。然而,食品在保存及加工过程中,其色泽往往会有不同程度的变化,为了改善食品的色泽,使食品尽可能恢复原来的颜色,除采取一定护色措施外,往往还得添加一定

层析技术的应用(一)

(一)层析技术的原理层析法是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由

黄曲霉毒素一般检测方法概述

  【薄层色谱法】    1.薄层层析(TLC)法    TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法,在薄层板展开后,在365 nm紫外灯下,黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2分别显示紫色、蓝紫色、绿色和绿色荧光。TLC法的特异性较差,灵敏度相对较差,且测定黄曲霉毒

千金二萜醇的薄层分析条件是什么?

有些新物质是没有固定的分析条件的,你自己要实验合适的展开剂,读读下面的帖子!有机合成中展开剂的选择选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂,往往不能

有机合成中展开剂的选择

选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2

常用溶剂物理常数和精制方法3

三. 薄层板上原位化学反应   本法使直接在薄层板上进行的化学反应,又称原位反应薄层。先将样品滴加在薄层板上,然后滴上适当的溶剂展开反应物。有时先在试官内进行反应,而后在薄层板上进行层析检识。根据原化合物的Rf值再联系产物的层析行为,Rf值,可供鉴别一个化合物或者提供鉴定一个化合

合成色素测定的几大步骤

  样品前处理→提纯→分离→鉴别(何种色素)→定量(此色素含量是否超标)  ⑴ 前处理方法有:前处理不外乎是将样品打浆或者将着色部分用刀刮下,定容、吸附、解吸等方法处理;  ⑵ 提纯的方法  (1) 羊毛染色法:此法应用较广泛,主要是简单,材料容易弄到,操作也方便。缺点为:要在热的酸性条件下吸附色素

层析法简介

层析法又称色谱法。是一种现代的物理化学分离、分析法。在成品纯度检验和混合物分离方面应用广泛。中药化学有效成分分析中,一些基本母核相同而结构略有不同的化合物的分离、分析中,色谱法优势明显。色谱法:用于成品纯度检验及混合物分离。适于分离结构近似物质。层析法的分类:(1)根据原理分为吸附层析、分配层析、凝

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析-2

(二)乳过氧化物酶法(LPO)  本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。  1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。  2.方法

几张表搞懂样品前处理

  常规样品预处理方法消解湿式消解法1.硝酸消解法(对于较清的水溶液样品)2.硝酸-高氯酸消解法(消解含难氧化有机物的样品)3.硝酸-硫酸消解法(硝酸:硫酸=5:2,常加入少量过氧化氢)4.硫酸-磷酸消解法(有利于测定时消除Fe3+等离子的干扰)5.硫酸-高锰酸钾消解法(常用于测定汞的水溶液样品)6

消解、固相萃取等20种仪器分析样品前处理方法大汇总

  样品的种类繁多,其组成、浓度、物理形态均是仪器分析测定的影响因素,样品处理技术就成为提高分析测定效率和改善、优化仪器分析的重要环节。  样品前处理的重要性  样品前处理在仪器分析(尤其是色谱分析)过程中是一个既耗时又极易引进误差的步骤,样品处理的好坏直接影响色谱分析的最终结果,因此,为了提高分析

样品前处理方法汇总

样品前处理方法汇总消解湿式消解法 1.硝酸消解法(对于较清的水溶液样品)2.硝酸-高氯酸消解法(消解含难氧化有机物的样品)3.硝酸-硫酸消解法(硝酸:硫酸=5:2,常加入少量过氧化氢)4.硫酸-磷酸消解法(有利于测定时消除Fe3+等离子的干扰)5.硫酸-高锰酸钾消解法(常用于测定汞的水溶液样品)6.

食用合成色素的测定

天然食品及食品原料多数本身具有特有的色泽和香味,人们在长期的生活习惯中也认识了各种食品应有的色泽,食品的色泽已经成为食品的一个重要感官指标。然而,食品在保存及加工过程中,其色泽往往会有不同程度的变化,为了改善食品的色泽,使食品尽可能恢复原来的颜色,除采取一定护色措施外,往往还得添加一定量的食用色素,

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(四)

5. 正相色谱与反相色谱  正相色谱是指固定相的极性高于流动相的极性,因此,在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快,先从柱中流出来。  反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性,在这种层析过程中,极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。&

食品中甜蜜素检测方法研究进展

  摘要:指出了甜蜜素的使用,一方面摄入过量会对人体健康造成危害,另一方面也限制了我国食品的出口。为了进一步提高我国产品质量以及克服食品出口所遭遇的种种绿色壁垒,加强对甜蜜素检测研究势在必行。对国内外甜蜜素的检测方法进行了综述,并对其研究方法进行了展望。   1 引言   甜蜜素

可溶性糖的硅胶G薄层层析(thin layer chromatography,TLC)

一、实验目的1.了解薄层层析测定可溶性糖的原理。2.掌握硅胶G 薄层层析的操作方法。二、实验原理薄层层析(简称TLC)是一种微量而快速的层析方法,是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的,故称薄层层析。为了使所要分析的样品各组分得到分离,必须选择合适的吸附剂。硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂,

乳品中黄曲霉毒素检测(一)

核心提示:国家质检总局24日公布了近期对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。其中,蒙牛乳业(眉山)有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。对此,蒙牛在其官网承认这一检测结果并解释造成产品不合格的原因,是当地奶牛

菠菜色素的提取与分离

实验概要通过绿色植物色素的提取和分离,了解天然物质分离提纯方法;了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理,掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术。通过柱色谱和薄层色谱分离操作,加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。实验原理层析法是一种物理分离方法。柱层析法是层析方法中的一个类型,分为吸附柱层析法和分配柱层析法

史上最全的样品前处理方法总结贴

样品前处理是一项极其耗时、繁琐且容易引入分析测定误差之过程。常见样品前处理方法汇总样品前处理对样品的分析起着至关重要的左右,某种程度上来说,前处理决定了分析测试的结果,本文为大家呈现常见样品前处理方法。。。常见的消解方法(一)湿式消解法1.硝酸消解法(对于较清的水溶液样品)2.硝酸-高氯酸消解法(消

实验室样品前处理方法有哪些?

一、湿式消解法和干灰化法  湿式消解法     1.硝酸消解法(对于较清的水溶液样品)2.硝酸-高氯酸消解法(消解含难氧化有机物的样品)3.硝酸-硫酸消解法(硝酸:硫酸=5:2,常加入少量过氧化氢)4.硫酸-磷酸消解法(有利于测定时消除Fe3+等离子的干扰)5.硫酸-高锰酸钾消解法(常用于

实验室样品前处理方法有哪些?

一、湿式消解法和干灰化法  湿式消解法     1.硝酸消解法(对于较清的水溶液样品)2.硝酸-高氯酸消解法(消解含难氧化有机物的样品)3.硝酸-硫酸消解法(硝酸:硫酸=5:2,常加入少量过氧化氢)4.硫酸-磷酸消解法(有利于测定时消除Fe3+等离子的干扰)5.硫酸-高锰酸钾消解法(常用于

常见样品前处理方法汇总

样品前处理对样品的分析起着至关重要的作用,某种程度上来说,前处理决定了分析测试的结果,本文为大家呈现常见样品前处理方法。  一、消解 (一)湿式消解法1.硝酸消解法(对于较清的水溶液样品)2.硝酸-高氯酸消解法(消解含难氧化有机物的样品)3.硝酸-硫酸消解法(硝酸:硫酸

液相色谱法测定香精香料中的甜蜜素

 甜蜜素,学名为环已氨基磺酸钠,是重要的人工合成甜味剂之一。自1950年生产应用以来,作为蔗糖的替代品在食品中被广泛的使用。但从20世纪70年代初开始,因为怀疑甜蜜素可能会产生致癌、致畸作用。美国、英国等国家开始禁止在食品中使用甜蜜素,中国、欧盟等四十多个国家和地区对此也分别做出了限制。目

饮料中苯甲酸钠的检测技术

2007年3月,杭州两名消费者因得知可乐和雪碧饮料中的苯甲酸钠为防腐剂,便以侵害消费者的知情权为由,将生产商可口可乐(中国)公司告上了法庭。他们认为,饮料虽然标注了苯甲酸钠成分,但普通消费者根本无法知道这是防腐剂,更不知道长期大量食用可能有损健康。他们以此为由把其生产商告上了法庭。这就是曾风靡一时的

常用的层析分析(chromatographic analysis)方法

    在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。   一、 吸附层析   1、 吸附柱层析   吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构

常用的层析分析方法

在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。 一、吸附层析 1、吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。 2、薄层层析 薄层

层析技术概述(二)

分辨率: 由上式可见,Rs值越大,两种组分分离的越好。当Rs = 1时,两组分具有教好的分离,互相沾染约2%,即每种组分的纯度约为98%。当Rs=1.5时,两组分基本完全分开,每种组分的纯度可达到99.8%。如果两种组分的浓度相差较大时,尤其要求较高的分辨率。 为了提高分辨率Rs 的值,可采用以下方

常用的食品防腐剂及其测定方法介绍

一、防腐剂防腐剂是一种能够抑制食品中微生物生长和繁殖的化学物质。如果按照国家规定的数量使用,不仅可以防止食品生霉,而且可以防止食品变质或腐败,并能延长保存时间,同时对食用者也不会引起什么危害。对防腐剂的使用必须控制一定的使用量,而且应具备以下特点:⑴ 凡加入食品中的防腐剂,首先是对人体无毒、无害、无