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乳腺上皮细胞分离培养操作步骤和注意事项

乳腺主要由腺上皮组成,早期乳汁或断奶后的乳汁含有上皮细胞团块,可用离心法收集上皮细胞(混杂有巨噬细胞),培养时常用人胚小肠纤维细胞作饲养层,可抑制间质细胞生长。使用优化培养基可使用上皮细胞传代,并形成克隆,在胶原底物上要形成三维立体的复层结构。胰岛素,氢化可的松,霍乱肠毒素,EGF可促进上皮细胞生长。体外培养中,乳腺上皮细胞具有乳腺细胞的功能,可用于确定免疫标记物类型,这些细胞可被SV40病毒转化,可用于研究正常乳腺细胞与乳腺癌细胞的区别,还是研究癌基因引起细胞转化的重要材料。 1、操作步骤 ①取材。于产后2~7天在病房收集乳汁,用无菌水擦洗乳头,用手压乳房使乳汁流入无菌容器,每人可收集10~20ml乳汁,以1:1的比例与培养基混合,以利离心。 ②以1000~1500r/min 离心20min,仔细去除上清。 ③用培养基将细胞清洗2~4次,直至上清液不浑浊为止。 ④将离心洗涤的细胞沉淀,用培养基3~5ml制成......阅读全文

原代细胞的培养与建系-1

                      原代细胞的培养与建系   细胞的来源多样,培养方法也各不相同,凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离

乳腺上皮细胞分离培养操作步骤和注意事项

乳腺主要由腺上皮组成,早期乳汁或断奶后的乳汁含有上皮细胞团块,可用离心法收集上皮细胞(混杂有巨噬细胞),培养时常用人胚小肠纤维细胞作饲养层,可抑制间质细胞生长。使用优化培养基可使用上皮细胞传代,并形成克隆,在胶原底物上要形成三维立体的复层结构。胰岛素,氢化可的松,霍乱肠毒素,EGF可促进上皮细胞生长