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血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定1

血液及组织样品的制备分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律,经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织,也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品,有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法是保证生化实验顺利进行的关键。一、血液样品(一)采血测定用的血液,多由静脉采集。一般在饲喂前空腹采取,因此时血液中化学成分含量比较稳定,采血时所用的针头、注射器,盛血容器要清洁干净;接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入,以防溶血和产生泡沫。(二)血清、全血及血浆的制备1.血清的制备血清是全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄清亮液体。制备方法是:将刚采集的血液直接注入试管或离心管中。将试管放成斜面,让其自然凝固,一般经3h 血块自然收缩而析出血清;也可将血样放入37 ℃ 恒温箱内,促使血块收缩,能较快约析出血清。为了缩短时间,也可用离心机分离(未凝或凝固的均可离心),分离出的血青,用吸管......阅读全文

IgG的分离与提纯:硫酸铵沉淀法

实验概要实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱,比较简便可获较纯的抗体。下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。实验原理以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必

IgG的分离与提纯:硫酸铵沉淀法

以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性,不应含有非抗体的血清蛋白。因此,为了浓缩和提高抗体的效价,或为制备免疫球蛋白特异性抗体时,通常也需要分

IgG的分离与提纯:硫酸铵沉淀法

实验概要实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱,比较简便可获较纯的抗体。下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。实验原理以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必

IgG的分离与提纯:硫酸铵沉淀法

以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性,不应含有非抗体的血清蛋白。因此,为了浓缩和提高抗体的效价,或为制备免疫球蛋白特异性抗体时,通常也需要分

免疫球蛋白提取技术(Immunoglobulin isolation technique)

免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平,并进一步代表着B细胞的功能,因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。 随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很

免疫球蛋白提取技术

免疫球蛋白提取技术             实验方法原理 随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可

免疫球蛋白提取技术

免疫球蛋白提取技术可应用于:(1)推知机体的体液免疫功能;(2)诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。实验方法原理随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多,有单一法,但大多数采用二步法以上相结合的方法,特别是以硫酸铵提纯为基础,再经过层析柱的方法来提高免

免疫球蛋白提取技术(一)

免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平,并进一步代表着B细胞的功能,因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多,有单一法,但大多数

免疫球蛋白提取技术:IgG的分离与提纯-1

免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平,并进一步代表着B细胞的功能,因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多,有单一法,但大多数

免疫球蛋白提取技术(一)

免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平,并进一步代表着B细胞的功能,因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多,有单一法,但大多数

免疫球蛋白提取技术:IgG的分离与提纯-2

⑴ 区带电泳:玻片琼脂或醋酸纤维膜电泳均可。加样电泳后,只在γ—球蛋白的迁移部位出现一条带。操作时,同时可用全血清样品,不同浓度 (NH4)2SO4盐析样品进行电泳,以资比较。⑵ 琼脂双相双扩散鉴定:预先准备该IgG免疫异种动物所获的抗IgG血清。将IgG与抗 IgG血清进行双相双扩散,如IgG提纯

IgG的分离与提纯实验

实验方法原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液

IgG的分离与提纯实验_硫酸铵沉淀法

IgG的分离与提纯实验可以用于:制备酶标抗体或荧光抗体。实验方法原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出

免疫球蛋白提取技术(二)

(12)IgG的纯度鉴定,可采用下列方法之一鉴定。①玻片琼脂或醋酸纤维膜电泳均可加样电泳后,只在γ—球蛋白的迁移部位出现一条带。操作时,同时可用全血清样品,不同浓度(NH4)2SO4盐析样品进行电泳,以资比较。②琼脂双相双扩散鉴定预先准备该IgG免疫异种动物所获的抗IgG血清。将IgG与抗IgG血清

多项仪器研发项目列入863计划和2014备选项目

  一、前沿生物技术主题  1.蛋白质测序新技术新装备及配套试剂国产化  (1)阵列毛细管柱蛋白质分离-阵列点样装置  研制二维阵列毛细管分离新装置,第一维分离柱可分离48个馏分,第二维维阵列毛细管分离柱可同时分离48个流份;开发阵列紫外检测器; 研制多柱点样头并行点样器和流份收集器;开发

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

免疫球蛋白提取技术(二)

4、禽血清IgG的分离与提纯(Na2SO4法)(1)试剂①5%葡聚糖硫酸盐②0.02Mol/L MnCl2溶液③无水硫酸钠④pH8.2硼酸盐缓冲液⑤0.06Mol/L pH7.4PB液(2)操作方法①取禽血清10ml加5%葡聚糖硫酸盐液,0.40ml和0.025Mol/L MnCl21.00ml充分

食品安全快速检测技术你知多少?

快速检测技术广泛用于食品安全快速检测,临床检验、检验检疫、毒品检验等公共领域。食品安全快速检测是指对食品利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。    1、食品安全问题主要有害污染物    (1)农药,化肥:有机磷,有机氯,硝酸盐 

猪瘟病毒诊断

为了消灭猪瘟,需要快速而确实的诊断技术。流行病学、症状学和病理解剖学等方 面的资料,具有重要的参考价值,但确诊必须采取病料,进行病毒的分离鉴定或作抗体 测定。  疫情调查时,除需注意流行情况,还应了解是否已经进行免疫接种, 所用疫苗有无 残余毒力?非典型猪瘟在成年猪中大多表现为轻症疾病

食品安全快速检测技术大汇总(三)

47、水溶性非食用色素的快速检测原理: 水溶性非食用色素与脱脂羊毛染色后不易去除的原理对部分水溶性非食用色素进行检测。 48、味精谷氨酸钠的快速检测原理: 利用谷氨酸钠的两性作用,加入甲醛一固定谷氨酸钠的碱性,使羟基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定,以指示剂显示为终点,得出样品中谷氨酸

放射免疫分析法的建立

 一、放射免疫分析的基本试剂  (一)标准品  标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。  按实

流式细胞术常见问题问答

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免

偶然找到流式细胞术常见问题问答,经典!

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫

蛋白质组学样品处理方法

  蛋白质组学研究已经成为后基因组时代的研究热点,是生命科学研究领域又一个新的突破口。本文从对疏水性强的蛋白质、极性蛋白质、高丰度蛋白的处理、低丰度蛋白的富集和对样品溶液中干扰性物质的去除以及对不同染色后质谱前处理等方面综述了蛋白质样品的一般处理方法。  1. 不溶性蛋白质的处理  天然状态的蛋白质

酶联免疫吸附法在食品检验中的应用

  摘要:酶联免疫吸附技术(ELISA)是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合的一种免疫分析方法,具有操作简便、快速、有效、特异性强等特点,能批量检测食品中的药物残留、病原微生物以及转基因食品等。本文主要阐述了酶联免疫吸附法在食品安全检测中的应用。   食品安全问题是全球关注