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二、目的基因和载体的连接获得目的基因后必须将其放在一定的载体内才能在宿主细胞内扩增或表达。目的基因与载体的连接及其后续的转化过程习惯上称为克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技术获得，因此这里先介绍PCR产物的克隆策略，然后再介绍其他的克隆方式。（一）PCR产物的克隆策略获得PCR产物通常只是克隆的第一步。无论研究的起始材料是RNA还是DNA，最重要的是要有一种有效的方法对PCR产物进行克隆。目前已建立了多种对PCR产物进行克隆的方法，具体选择哪种方法取决于以下几个因素：PCR产物序列是否已知；载体上有哪些单一的限制性酶切位点可以利用；克隆PCR产物的用途等。1. 限制性内切酶酶切位点添加法 对PCR产物进行克隆的一个基本方法是利用目的片段所特有的限制性内切酶识别位点对产物进行酶切消化。一般是在设计PCR引物时就要考虑到连接方式，直接在引物末端包含与载体相匹配的限制性内切酶位点。设计PCR引物时必须考虑以下......阅读全文
摘 要： RACE是一种快速克隆cDNA末端的方法，目前, 该方法被广泛应用于未知碱基序列基因的克隆，尤其是SMART RACE技术更为人们所青睐。本文总结了我们实验室用SMART RACE技术克隆基因的一些心得体会，希望对用RACE方法克隆基因的同行有些帮助。关键词： RACE; RN
5月29日下午，上海交大生命学院召开推进学院文化建设动员会。学院院长邓子新院士在讲话中，就如何开展实验室文化建设和学院教师分享了他多年的心得。邓院士认为，学校开展校园精神文化建设，生命学院应趁势而上，积极推进学院精神文化建设，无论把这个活动纳入全国的大框架，还是小到一个研究组，一个办公室，都是一个及
常用生物软件（windows)全面介绍一、基因芯片1、基因芯片综合分析软件。 ArrayVision 7.0 一种功能强大的商业版基因芯片分析软件，不仅可以进行图像分析，还可以进行数据处理，方便protocol的管理功能强大，商业版正式版：6900美元。 Arraypro 4.0
摘要：基因芯片技术是90年代中期以来快速发展起来的分子生物学高新技术，是各学科交叉综合的崭新科学。其原理是采用光导原位合成或显微印刷等方法，将大量DNA探针片段有序地固化予支持物的表面，然后与已标记的生物样品中DNA分子杂交，再对杂交信号进行检测分析，就可得出该样品的遗传信息。基因芯片技术目前国内
随着人类基因组计划（human genome project ）在2003年顺利完成，基因组测序技术取得了长足的进步，这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊，这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以
人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中，发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3～5％。基因组中绝大部
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038Institute of Orthopedi
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthop
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038 Insti
真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得化、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达
刘晓燕 (公安县人民医院检验科，湖北公安434300)王 红 (湖北中医药大学医学检验与技术学院，湖北武汉430065)[关键词] 临床检验技术；耐药基因；分子生物学技术一份准确全面的医学检验报告是医生做出准确诊断与制定正确治疗方案必不可少的依据。因此，临床医学检验是一门极其重要的医学学科
2．第二代分子标记2.1 SSR标记技术 在真核生物基因组中存在许多非编码的重复序列，如重复单位长度在15～65个核苷酸的小卫星DNA(Minisatellite DNA)，重复单位长度在2～6个核苷酸的微卫星DNA(Microsatellite DN
第一节 概述 聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式，不通过活细胞，操作
基因芯片技术及其研究现状和应用前景生物芯片技术是随着“人类基因组计划”（human genome project，HGP）的进展而发展起来的，它是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一，它融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术，具有重大的基础研究价值，又具
基因定位和基因图对遗传学、医学和人类及生物进化的研究都有十分重要的意义。它可提供遗传病和其他疾病的诊断的遗传信息，可以指导对这些疾病的致病基因的克隆和对病症病因的分析与认识，这些又取决于遗传图和物理图的相互依赖关系。通过多态位点标记进行连锁分析获得物理图的位置有助于遗传作图，同时通过连
生物芯片技术是随着"人类基因组计划"(human genome project, HGP)的进展而发展起来的，它是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一，它融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术，具有重大的基础研究价值，又具有
来自山东农业大学生命科学学院发现了连接植物miRNA和环境胁迫之间的调控新机制，指出选择性剪接在其中扮演的关键角色。相关成果公布在Molecular Cell杂志在线版上。 文章的通讯作者是山东农业大学生命科学学院院长郑成超教授，其研究组主要研究方向包括：植物重要功能基因的克隆、鉴定与
基因敲除可以说是基因组 学、细胞分离培养以及转基因技术的组合。那么基因敲除的原理是什么呢？ 基因敲除的方法有哪些呢？在此，做个小结，以供大家学习。一.概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子 生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用D
刘光清 刘在新 谢庆阁(中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州730046)摘 要: 反向遗传技术是一种新兴的分子生物学技术, 已广泛应用于生命科学研究的各个领域。综述反向遗传技术研究进展,并讨论该技术在口蹄疫病毒研究中的应用。关键词: 反向遗传学 反向遗传技术 全长c
摘要：本文论述了转基因农产品、食品的安全性问题以及对转基因食品从基因、基因转录、基因翻译表达三个层面的检测技术做了概述。 关键词：转基因食品 转基因农产品 食品安全 生物技术 检测技术 Abstract: discuss on the question Gen
第二军医大学细胞生物学教研室；上海200433 何志颖；姚玉成（综述）；胡以平（审校）关键词：EST技术；“电子”基因克隆；生物信息学；基因摘要： 随着人类基因组计划的顺利进行，EST技术被广泛应用于基因识别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域。利用人类基因组研究不断产生的数据，从ES
基因改造（包括敲除和敲进）小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。今天呢，就给大家介绍最传统最稳定的基因改造技术：基于胚胎干细胞的同源重组技术。Capecchi和Smithies早在在1989年根据同源重组（homo
实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或
重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及
基因融合或易位可能产生功能改变的嵌合蛋白，也可能重新排列基因启动子，通过激活原癌基因或抑制抑癌基因导致细胞信号通路紊乱，它们在肿瘤的发生过程中扮演着重要的角色。[1,3] 例如，BCR–ABL1融合会导致酪氨酸激酶活性以及下游PI3K和MAPK信号通路的组成型激活，使细胞逃避凋亡，实现无限增殖。
基因的克隆就是利用体外重组 技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们
基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物 发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，N
当前，人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移，一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”(post-genomics)，也即功能基因组(functional genomics)时代，即将到来。如何获取基因的功能信息，即与人类重大疾病和重要生理功能相关的基因信息，就摆在了我们面前。
多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类，即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性