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CO2恒温摇床解决人胚肾293(HEK293)细胞结团问题(一)

人胚肾 293 (HEK293) 细胞在重组蛋白表达中是最常见的宿主细胞。 这类细胞能够表达大量的膜蛋白,如 G 蛋白偶联受体 (GPCR) ,是无法在最常见的生物制药生产宿主,如:中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中作表达。 HEK293 虽然是蛋白表达的极好宿主,然而 HEK293 细胞在大规模悬浮培养细胞其结团的问题限制了其在生物过程中的使用。近来许多公司都开发了特殊的培养基配方和抗结团剂,以协助解决这个问题。本文为一成功案例利用 New Brunswick S41i CO2 恒温摇床进行人类重组蛋白表达的HEK293细胞系从血清贴壁培养驯化至无血清单细胞悬浮培养。驯化过的HEK293细胞系如同典型不结团的悬浮细胞系。我们预期这类细胞系能在生物过程中进行标准的批次或流加培养,如同传统的CHO细胞在搅拌式生物反应器进行扩增培养。Solving the Aggregation Problem......阅读全文

使用CO2恒温摇床解决人胚肾 293 (HEK293) 细胞结团问题

人胚肾 293 (HEK293)  细胞在重组蛋白表达中是最常见的宿主细胞。 这类细胞能够表达大量的膜蛋白,如 G 蛋白偶联受体  (GPCR) ,是无法在最常见的生物制药生产宿主,如:中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中作表达。 HEK293 虽然是蛋白表达的极好宿主,然而 H

控制融合蛋白生产中的糖基化生成有潜力的biobetter

  制药公司的管线充满了生物药物。许多是创新的治疗蛋白质,但越来越多的代表生物仿制药和biobetters(图1)(1)。biobetters通常被定义为“基于创新生物制品,但具有改进的性质”(2)。 他们的发展受益于已知的治疗方法和作用机制,从而导致低风险,快速通向临床,从而降低成本。优势是通过延

选择重组蛋白表达的合适方法

实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或

选择重组蛋白表达的合适方法

重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及

免疫细胞化学与图像分析

在细胞生物学中,一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多,只要有一个环节 失误就会影响实验结果,除了需要精制的药品外,还需要熟练的技术。那么,做成了理想的标本后,如何进行观察,才能获得尽量多的的各种定量信息,而且使这些

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翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验             实验步骤

2012国家自然科学基金评审结果名单之复旦大学(生物类)

  来自国家自然科学基金委员会的消息,国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录

核酸抽提经验及原理

1、核酸抽提原理 简单地讲,核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程,纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等

实验室HIV检测技术概述及进展

艾滋病(AIDS)又称获得性免疫缺陷综合征,是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。HIV感染的诊断是艾滋病预防控制 工作的重要组成部分,建立敏感实用的检测方法对于监测、诊断或血液筛查,控制艾滋病的流行显得尤为重要。以下本文就HIV的检测技术现状及进展做一综述。1 

293A(人胚肾细胞)复苏、传代和冻存方案【通过STR鉴定】

293A(人胚肾细胞)【通过STR鉴定】规格:1×10⁶cells/T25培养瓶细胞名称293A (人胚肾细胞)种属人年龄(性别)胎儿 组织来源肾生长特性贴壁细胞形态上皮细胞样生长培养基DMEM高糖+10% FBS+1% P/S培养条件气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃一、复苏&

2017年5月CRISPR/Cas亮点盘点

  基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一,受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称,Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的,是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。  

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验2

二、用 于 鉴 定 P T M 的富 集 技 术2.1 磷酸化丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的可逆磷酸化也许是研究最为深人的 PT M 。蛋白质磷酸化信号网络介导细胞对与不同的应激因子、生长因子、细胞因子以及细胞间相互作用作出响应。憐酸化还影响多种细胞进程,如增殖、凋亡 、迁移 、转录和蛋白质翻译(W

PCR反应实验操作注意事项

SSR分子标记实验:   PCR反应实验操作注意事项:PCR 反应过程中应特别注意不要使样品相互污染, 以免造成试验结果不准确, 同时也要注意所加试剂或样品必须是经过混匀后的液体, 这样才能保证反应液各成分的浓度和体积的均一性 所用试剂需从正规商家购进, 以保证试剂的质量。BEAS-2B细

Cell Stem Cell十大热点文章(12月)

  《Cell Stem Cell》杂志是2007年Cell出版社新增两名新成员之一(另外一个杂志是Cell Host & Microbe),这一杂志内容涵盖了从最基本的细胞和发育机制到医疗软件临床应用等整个干细胞生物学研究内容。这一杂志特别关注胚胎干细胞、组织特异性和癌症干细胞的最新成

包涵体蛋白溶解后的重折叠实验

实验步骤一、常规操作方案下面这个典型流程对许多蛋白质都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 据 N g u y e n 等(1993)首先开发的方案改编而成,并用于冷泉港蛋白质纯化与鉴定课程的不溶性重组蛋白纯化部分(Burgess and K n u t h , 1996)。其他类似的流程也可能

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实验步骤 一、常规操作方案 下面这个典型流程对许多蛋白质都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 据 N g u y e n 等(1993)首先开发的方案改编而成,并用于冷泉港蛋白质纯化与鉴定课程的不溶性重组蛋白纯化部分(Bu

细胞不贴壁、生长缓慢怎么解决?

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题,这些问题从细胞生长角度来说,针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好,甚至死亡的原因,我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞不贴壁可能原因: •胰蛋白酶消化过度;•支原体污染;•培养基pH值过碱(NaHCO3分解);•细胞老化;•接种细胞起始浓

那些想买实验室摇床的那些人,都在关注什么?(二)

不仅如此,奥豪斯的每一款摇床都有其独特之处,以适应不同实验的需求。为此,专为适应实验室极端环境的分体式摇床诞生了!能实现精准温度控制的冷冻式恒温摇床也出现了!可以在大负载振荡实验下保证准确的速度控制和振荡一致性的大负载圆周式摇床也应运而生!      极端环境

慢病毒大规模生产面临的挑战

  慢病毒作为基因载体在治疗各类遗传性和后天性的人类疾病中倍受欢迎。从基础研究发展到临床阶段,高浓度纯化的载体需求量越来越大,相应的方法也层出不穷。目前大多数慢病毒的生产是在方瓶、平皿等体系中加入胎牛血清贴壁培养HEK293细胞系(293T和293E),通过多质粒瞬时转染包装得到病毒,但是该方法难以

一波新的CRISPR工具浮出水面

  当你读到这篇文章时,又一波CRISPR工具将会浮出水面。它们将需要接受测试和优化。不过,如果你询问开发者你在开展概念验证研究时是否应当试用它们时,你将仅获得鼓励。毕竟,迄今为止它们还不能从Addgene公司获得,但是将会很快上市了。  最新发布的一系列CRISPR工具包括新的谱系追踪方法,该方法

北京基因组研究所最新文章比较高通量筛选方法

  P2X7受体是嘌呤-配体门控离子通道受体家族 P2X的一员,是神经退行性疾病、类风湿关节炎、神经性疼痛药物筛选的重要靶标, 已成为大型制药公司新的研究热点。近期中国科学院北京基因组研究所的研究人员针对3 种用于检测 P2X7受体高表达细胞系药理学特征的高通量荧光检测方法,进行了比对,指出

如何成为细胞培养大神?

  问世间谁人无忧,唯神仙逍遥自在。  作为一名终日泡在实验室的实验君,  如何在细胞实验中无所不能,超脱轮回  做到一个人人羡慕的细胞大神呢?  且看向这里,成为细胞大神的六个细节。  1. 过滤体系   自从出现瓶装培养基之后,培养基过滤的需求就减少了。有些时候,一些特定细胞培养支持物的添加可能

如何成为细胞培养大神?

问世间谁人无忧,唯神仙逍遥自在。作为一名终日泡在实验室的实验君,如何在细胞实验中无所不能,超脱轮回做到一个人人羡慕的细胞大神呢?且看向这里,成为细胞大神的六个细节。 1. 过滤体系  自从出现瓶装培养基之后,培养基过滤的需求就减少了。有些时候,一些特定细胞培养

2017年度盘点之三项癌症免疫疗法重大突破

  释放免疫系统,从癌症死神手中抢夺生命,这种被称为“最成功的癌症治疗方法之一”的新疗法带给了我们许多的希望,但是经过几年的临床检验,癌症免疫疗法出现了各种各样的状况,或者产生区别应答,或者引发免疫系统对自身组织的攻击等。  2017年癌症免疫疗法稳步前行,在三个方面取得了重要突破:新型组合癌症免疫

最新|“973计划”2018年结题项目验收结果公布

科技部关于发布国家重点基础研究发展计划(含重大科学研究计划)2018年结题项目验收结果的通知国科发基〔2019〕308号  各有关项目依托部门:  按照《国家重点基础研究发展计划管理办法》和《国家重点基础研究发展计划专项经费管理办法》有关规定,科技部组织完成了国家重点基础研究发展计划(973计划)2

170项2018年973计划(含重大科学研究计划)项目结题验收

  近日,科技部发布了2018年973计划(含重大科学研究计划)项目结题验收工作安排的通知。通知规定了项目结题验收的时间、验收重点等,详情如下:  科技部基础研究司关于2018年973计划(含重大科学研究计划)项目结题验收工作安排的通知  国科基函〔2018〕38号各项目依托部门:  国家重点基础研

973计划173个项目后三年经费预算安排 总经费达17亿

  分析测试百科网讯 2016年1月4日,科技部公示了国家重点基础研究计划(973计划)2014年立项173个项目后三年预算安排初步方案,总经费达人民币1,708,013,700元,专项经费达人民币1,676,450,000元。  公示如下:  经过中介机构评估、预算管理部门的综合审查,国

总体趋势稳步上升 保健食品监管条例亟需出台

活动组一行在广东省食品药品监督管理局会议室座谈   2012年8月6日,由国家食品药品监督管理局支持,中国保健协会组织的“保健食品质量安全万里行”活动正式走进广东,由政府、协会、企业、媒体等成员组成的本次活动的集体根据活动的宗旨、目的、意义等进行了深入一线的考察、交流

蛋白质凝胶染色法实验

实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群,使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度,那么银