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为什么辣根过氧化酶(HRP)可以作为ELISA实验中常见的酶

ELISA实验中的每一个试剂都是试剂盒的重要组成部分,特别是对酶的要求更高,ELISA中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定,光吸收高。ELISA中*常用的酶为辣根过氧化酶(HRP)和从牛肠粘膜或大肠杆菌提取的碱性磷酸酶(AP)。HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,纯化方法也不复杂。它是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白,在275nm波长处有吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有吸收峰,所以辣根过氧化酶(HRP)才能作为ELISA实验中常见的酶。 ......阅读全文

为什么辣根过氧化酶(HRP)可以作为ELISA实验中常见的酶

ELISA实验中的每一个试剂都是试剂盒的重要组成部分,特别是对酶的要求更高,ELISA中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保

人的血浆为什么可以作为ELISA试剂盒的样本?

人的常见样本是人的血清和血浆,血浆为什么可以作为研究对象呢,这是由血浆的主要成分决定的。血浆的主要作用是运载血细胞,运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等。血浆相当于结缔组织的细胞间质。血浆是血液的重要组成部分,呈淡黄色液体(因含有胆红素)。血浆的化学成分中,水分占90~92%,其他10%

辣根过氧化物酶实验的HRP的活力测定

  1、活力测定:测定k4值的方法操作如下:  取2个比色池(带盖,光程1厘米),按下表加入反应物  *酶液:将1毫克蛋白/毫升的酶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍后应用。  加好反应物,摇匀,在470nm 读出OD值,为t=0 的读数。立即加0.01毫升40mM过氧化氢溶液于2个比色池中,即刻摇匀并记时

辣根过氧化物酶实验的HRP的制备的简介

  ⒈水提取:  称取 10斤用水冲刷干净的鲜辣根(辣根皮中亦含有丰富的HRP),用菜刀切成小碎块,在搅肉机中搅碎1~2次。碎渣浆用1倍体积的水在低温下搅拌提取过夜(亦可采用高速抽提法)。次日用甩干机(或离心机)甩干,收集滤液,碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取一次,合并两次滤液,量总体积和度,0。  

血清作为ELISA实验的常见样本应该注意什么?

人血清是ELISA 实验中常见的样本,如何保证收集到的血清是符合ELISA实验的要求呢,下面让上海劲马与您一起来分析一下。用人血清做ELISA实验的样本,从血样收集、离心、保存直到用试剂盒检测指标,每一步都至关重要,马虎大意便会使得到的结果差之毫厘谬以千里。血清作为待检样本需要考虑的首先是溶血,这对

HRP标记抗体-简易过碘酸钠法

实验概要本实验用简易过碘酸钠法进行HRP标记抗体。本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再与Ig上的氨基相结合,所获酶标记抗体的产率高,将近70%的HRP和Ig结合,99%的Ig与酶结合,酶与Ig的活性无重大损失,是目前最常用的方法。实验原理经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭H

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辣根过氧化物酶的简介和用途

  辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP),是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目,也广泛运用于免疫类(ELISA)试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。  辣根过氧化物酶(Horseradish Per

分析影响ELISA中非特异性显色的原因

影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。1、试剂盒特异性因素1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相

免疫酶测定法简介

免疫酶测定法是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。本法将抗原抗体反应的高度特异性与酶对底物高效催化作用结合起来,根据酶作用底物后显色,以颜色变化判断实验结果。目前常用的方法有酶免疫组化技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)。前者测定细胞表面抗原和组织内的抗原,后者主要测定可溶性抗原或抗体