免疫荧光三标实验如何做?如何选择二抗?

免疫荧光三标?——蓝色荧光的AMCA与Dylight 405标记二抗做免疫荧光实验中,经常要进行免疫荧光的双标记实验,也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时,可以选择不同来源的一抗,然后再选择分别针对一抗的二抗,同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里,都会选择一个绿色的(如FITC、Cy2、Dylight 488等)荧光标记,一个红色的(如Rhodamin、Cy3、TRITC、Texas Rad、Dylight 539等)的荧光标记。红绿二色的区分度很大,效果也比较理想。那么,如果是三标呢?请看看下面的一个图。 左侧的一个免疫荧光图片就包括了3种颜色,绿色FITC(FITC最大吸收光波长为490495nm,最大发射光波长520530nm,呈现明亮的黄绿色荧光)和红色罗丹明Rhodamin(最大吸收光波长为570nm,最大发射光波长为595~600nm,呈橘红......阅读全文

免疫荧光三标实验如何做?如何选择二抗?

免疫荧光三标?——蓝色荧光的AMCA与Dylight 405标记二抗做免疫荧光实验中,经常要进行免疫荧光的双标记实验,也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时,可以选择不同来源的一抗,然后再选择分别针对一抗的二抗,同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里,都会选择一个

如何进行免疫荧光三标?

  做免疫荧光实验中,经常要进行免疫荧光的双标记实验,也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时,可以选择不同来源的一抗,然后再选择分别针对一抗的二抗,同时二抗上标记有不同的荧光团。  一般的双标记实验里,都会选择一个绿色的(如FITC、Cy2、Dylight 488等)荧光标

如何选择二抗

二抗选择(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、

如何选择适合实验的一抗和二抗?

小编今天给大家分享一些抗体选择的经验~检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:分析或应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗体说明书没有提及的

如何做好免疫荧光

免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种,它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术,通过将抗体与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括,细胞固定和通透,封闭,孵育一抗,二抗等。除了这些基本步骤,以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。1、细胞

如何选择合适的二抗?

二抗的选择原则:针对一抗来源的二抗(比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的)针对一抗Ig亚型的(比如一抗是IgM,二抗就要是抗IgM的抗体)为了增加特异性、降低背景:可以选择Fab段的抗体(去除Fc段的)、经过标本来源种属血清吸附的的二抗查看二抗的说明书,选择经过验证可以用于相应实验方法的二抗Ab

如何做好荧光定量PCR实验?(三)

3.3 引物、探针的纯度和稳定性定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。部分应用需要纯化,以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100%。这是个循环过程,在每个碱基加入时使用重复化学反应,使DNA从3'到5'合成。在任何一个循环都

如何做好实验室抽样?(二)

4.要关注抽样现场的环境条件,必要时进行监控抽样现场的环境条件应能满足样品在送达实验室检测前符合相关规范要求。样品的运输和储存应控制在一定的条件下(如合适的冷藏或冰冻),以保持样品的完整。需要时,监测环境条件并保存记录。如果条件合适,应有从抽样到送达检测实验室的运输和储存的详细的责任档案。 5.抽样

如何做好荧光定量PCR实验?(二)

2.4 实时多重PCR探针的选择:多重实时PCR的多种含意有两种:一为选择保守的探针和引物,利用不同的染料标记探针,在检测时可根据荧光的颜色来判定不同的产物。另一种为选择保守的引物,扩增不同长度的目的片段,反应中加入SYBRN染料,最后根据不同目的片段的Tm值来判定不同的物品。多重实时PCR的荧光探

二抗如何选择论一抗与二抗种属及类型区别

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同的检测方案,因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求,一般

免疫荧光如何做定量分析

和免疫组化一样,只能通过软件分析得出一个“数值”,可以当一个“半定量”的指标,但我认为准确性差,如果是要分析蛋白的表达情况,建议用western比较好些。统计荧光强度的软件没有用过,以前只用过免疫组化的光密度分析软件,影响结果的因素太多了

免疫荧光如何做定量分析

和免疫组化一样,只能通过软件分析得出一个“数值”,可以当一个“半定量”的指标,但我认为准确性差,如果是要分析蛋白的表达情况,建议用western比较好些。统计荧光强度的软件没有用过,以前只用过免疫组化的光密度分析软件,影响结果的因素太多了

免疫荧光如何做定量分析

和免疫组化一样,只能通过软件分析得出一个“数值”,可以当一个“半定量”的指标,但我认为准确性差,如果是要分析蛋白的表达情况,建议用western比较好些。统计荧光强度的软件没有用过,以前只用过免疫组化的光密度分析软件,影响结果的因素太多了

免疫荧光如何做定量分析

和免疫组化一样,只能通过软件分析得出一个“数值”,可以当一个“半定量”的指标,但我认为准确性差,如果是要分析蛋白的表达情况,建议用western比较好些。统计荧光强度的软件没有用过,以前只用过免疫组化的光密度分析软件,影响结果的因素太多了

如何选择合适的二抗分子类型?

二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上面通常连有酶、荧光素或生物素等耦联标记。二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体(如IgG、IgM或IgA等)均具有反应性,因而使用标记的二抗可以免去对每个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使

二抗的选择

二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用, 二抗一般连接荧光素FITC或发光团。

如何选择实验抗体(一抗的选择原理及方法)?

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,在同一个抗体公司,可能会有好几种,甚至好几十种;在不同的抗体公司,那就更多了。那怎样在琳琅满目的抗体中,选择自己实验需要的抗体呢?主要考虑如下几种因素:分析自己实验应用的实验方法是哪种?分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?分析样本中的蛋白质的结构性质

荧光二抗如何选择更好根据一抗种属及类型

荧光二抗如何选择更好-根据一抗种属及类型二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同的检测方案,因此在选择二抗的时候要综合

一抗、二抗如何保存

工作液根据需要稀释在5%奶粉里,再加入少量叠氮化钠(大约0.01% w/v),4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装,-20度保存。不要反复冻融,没有用过粉末的二抗,按说明书呗石头2011(站内联系TA)液体的一抗没加甘油的话尽量不要放在负二十,因为用的时候反复冻融不好。粉末状的二抗负二十

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光的一抗核二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

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免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

二抗的选择和定位

第一步:选择抗体。三种二抗抗体:Whole IgG,F(ab&;rsquo;)2片段,Fab片段。 Whole IgG抗体适用于多数情况,是性价比最高的。Whole IgG是完整的抗体分子,有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分 (Figure 1, Jackson ImmunoResearch

教您如何做好elisa实验

做elisa实验需要注意哪些问题?实验室需要做elisa实验,在做的时候需要特别注意些什么问题呢?这是新手朋友都有疑惑的地方。上海劲马告诉您Elisa实验中应该注意的问题,包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题。elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点,深受广

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南 一、基本步骤: 1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对; 2、引物、探针的设计; 3、引物探针的合成; 4、反应体系的配制; 5、反应条件的设定; 6、反应体系和条件的优化; 7、荧光曲线和数据分析;

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南一、基本步骤:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;从