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WesternBlot操作步骤

背景: 蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个对蛋白质,人们分别把这两种技术的称为Northern和Western,与这两个技术的发明人没有关系了。 一、蛋白质的样品制备: 由于这一步方法各异,具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是Western Blotting的第一步,样品制备是关键步骤,要求尽可能的获得所有蛋白质,应注意以下问题: > 在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。 > 选择合适的表面活性剂和还原剂......阅读全文

Western Blot操作步骤

背景:   蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术

Western Blot操作步骤

  背景:   蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southe

Western Blot操作步骤(一)

背景:蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern

Western Blot操作步骤(二)

四、转膜以下以使用半干转膜为例。对于转印90kd以下的蛋白,转膜液都不用加SDS,如果是蛋白分子量大的话可以加入0.037%的SDS。在电泳结束前20min开始准备转膜所需的东西。转一张膜需准备6张的滤纸(长一般为8.1~8.3cm,宽度根据裁的胶大小实际测量,但胶一般会缩水,所以裁8cm就行)和1

Western Blot操作步骤(二)

四、转膜 以下以使用半干转膜为例。对于转印90kd以下的蛋白,转膜液都不用加SDS,如果是蛋白分子量大的话可以加入0.037%的SDS。 在电泳结束前20min开始准备转膜所需的东西。转一张膜需准备6张的滤纸(长一般为8.1~8.3cm,宽度根据裁的胶大小实际测量,但胶一

Western Blot Protocol实验操作步骤

一、提取抗原蛋白 将提取RNA途中留存的样品,加入150μl100%酒精充分混匀,静置  5min(RT),2000×g,4℃离心5min,吸取上清至新管中,加入750μl异丙醇,混匀,静置10min(RT),12000×g,4℃离心  10min,弃上清,加入1ml0.3mol/L盐酸胍/95%酒

western blot 具体操作步骤

什么是Westernblot?最佳答案Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western

western blot 具体操作步骤

什么是Westernblot?最佳答案Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western

western blot 具体操作步骤

什么是Westernblot?最佳答案Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western

western blot 的原理及操作步骤

原理Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附