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以原核生物16S保守序列设计引物，用PCR方法，从荧光假单胞菌基因组中扩取其16S保守序列，连接到T-载体，以设计好的限制性内切酶，分别切割表达载体（pET32a、pMAL-c2、pGEX-6p-1 ）和目的基因，然后将目的基因与表达载体连接，转化大肠杆菌表达宿主菌（BL21、Origami），并以酶切方法验证连接的正确性；诱导表达后即可得到LPL（脂蛋白脂肪酶） 荧光假单胞菌 (Pseudomonas fluorescens) 分类学上属于细菌域、变形菌门、γ-变形菌纲、假单胞菌目、假单胞菌科的假单胞菌属。细胞为直的杆菌，大小为0.7-0.8X2.3-2.8 微米，不产芽孢，革兰氏染色阴性。有数根极生鞭毛，运动。需氧,进行严格的呼吸型代谢,以氧为最终电子受体。能以硝酸盐为替代的电子受体进行厌氧呼吸。化能营养异养，不需要有机生长因子。氧化酶阳性，接触酶阳性。能利用葡萄糖和果糖，有些菌株能从蔗糖合成果聚糖，明胶液化。生长温......阅读全文
以原核生物16S保守序列设计引物，用PCR方法，从荧光假单胞菌基因组中扩取其16S保守序列，连接到T-载体，以设计好的限制性内切酶，分别切割表达载体（pET32a、pMAL-c2、pGEX-6p-1 ）和目的基因，然后将目的基因与表达载体连接，转化大肠杆菌表达宿主菌（BL21、Origami），
荧光假单胞菌(P. fluorescens)属于假单胞菌属rRNA I群荧光DNA同源组，是植物根际最普遍的微生物类群，具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。世界许多国家均有人报道分离到抗植物病害的荧光假单胞菌，而且许多菌株能产生几种活性物质，抗多种植物病害。其作用机制包
国际乳品联合会（IDF）采用 IDF Standard 101A 和 IDF Standard 132A检测标准，前者采用 6.5℃培养10天后平板计数，后者 21℃培养 25h后计数，132A培养时间短稳定性好，菌数较为准确。平板计数法将原料乳稀释后，采用涂布法，倾注法，3M细菌总数试纸等方法
氨肽酶法通过革兰氏阴性菌细胞壁上的氨肽酶与特定的化合物反应，检测氨肽酶的活性。吕元等人用氨肽酶法，对杭州地区原料奶中荧光假单胞菌，阪崎肠杆菌和鲁氏不动杆菌 3 种优势嗜冷菌进行快速检测。结果得出 3 种菌的浓度和氨肽酶活性存在显著的相关性，且与传统的平板计数法的结果没有显著差异，可以在很大程度上
ELISA 法通过抗体特异性反应检测菌落数，具有高灵敏性，也易于同其他方法结合。PicardC 等人通过测定酪蛋白糖多肽计算原料乳中嗜冷菌含量。利用单克隆抗体，检测出成品奶样中嗜冷菌，与平板计数法相关性达 0.96。从脱脂奶粉中检测6种沙门氏菌，检出线为10 CFU/mL，检测时间为3h。Cro
荧光假单胞菌（P.Fluorescens）是一种环境污染菌。对于人类是一种罕见的机会致病菌。荧光假单胞菌属于假单胞菌属，是化能异养型的革兰氏阴性菌，呈杆状，有鞭毛。能分泌黄绿色荧光色素发出荧光，能产生抗生素、水解酶等代谢产物，在 4℃-37℃范围内，中性环境中生长，生理生化特性显著，是作为嗜冷菌
针对16S rRNA 保守序列设计引物，通过 PCR 扩增，可以将牛奶中嗜冷菌扩增出147bp的 DNA片段，标记后用 ELISA 检测，得到荧光假单胞菌AH-70 的OD450和菌浓度的方程，分析得此方法和平板计数法的相关系数达到 0.94，可以检测菌浓度范围是103-107CFU/mL。PC
一、细菌的传播与致病 假单胞菌普遍存在,而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常见的一种假单胞菌，它偶尔可在腋下和肛门生殖道周围的正常皮肤,但除非给服抗生素,在粪中甚为罕见。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中,但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染.假单胞菌感染通常发生于医院内。洗
流式细胞法FCM（Flow Cytometry Method）可以检测菌液中标记荧光信号的单细胞，对菌株实现逐一定量分析。流式细胞法检出的菌数是平板计数法的 3.8 倍，因为能统计到总体菌落数量。利用这个方法检测牛奶中假单胞菌，能在4 h内完成检测，且在菌落数含量较少时灵敏度有很大的提高。此方法
直接荧光法DEFT（Direct Epifluorescent Filter Technique）是利用电离辐射对食品样品菌落计数的方法，操作简便，具有高通量性。将样品通过过滤器后，吖啶橙染色，在紫外显微镜下活细胞能观察到橘黄色，而死细胞染成绿色，可以统计出样品中所有菌落的总数。原料乳用滤膜过滤