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1.HRP的底物 作为供氢体的底物化合物较多，常用的有以下几种： （1）邻苯二胺（OPD）：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用最早的底物，但其应用液稳定性差，易变色，需新配制后在1小时内使用，显色反应过程需避光，而且具有致癌性。 （2）四甲基联苯胺（TMB）：TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。TMB具有稳定性好，成色无需避光，无致突变作用等优点，已成为目前ELISA中应用最广泛的底物。缺点是水溶性差。 （3）其他：5-氨基水杨酸（5-ASA）和2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）也是HRP常用的底物。 2.AP的底物 常用对-硝基苯磷酸脂（p-NPP），p-N......阅读全文
酶结合物是酶与抗原或者抗体、半抗原在交联剂作用下联结的产物,是 ELISA 成败的关键试剂。它不仅具有抗原抗体的特异性反应,还具有酶促反应的特性,最终产生生物放大的特性。酶免疫反应中,最常用的酶是辣根过氧化物酶,HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型染
免疫酶标技术1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗
（一） 原理 酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物的反应形成不同的电子密度，借助于电子显微镜观察，证明酶的存在，从而对抗原进行定位。（二）材料与试剂1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1
1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗涤3×3分钟。7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色
实验方法原理 先将酶与抗体结合形成酶标抗体，然后和相应的抗原反应，使抗原抗体复合物上带有酶分子，再与酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃联苯胺）发生显色反应，在显微镜下观察，根据颜色产物检测相应抗原。实验材料 抗体试剂、试剂盒 PBSH2O2血清仪器、耗材 显微镜实验步骤 1. 标本
酶免疫技术一般分成酶免疫组化技术和酶免疫测定两大类。酶免疫组化技术与荧光抗体技术相似，酶标记抗体与组织切片上的抗原起反应，然后与酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光学显微镜下观察。如酶作用的产物电子密度发生一定的改变，则可用电子显微镜观察，称为酶免疫电镜技术。 酶免疫测定根据抗原抗体反应后
酶和酶作用底物（一）酶的要求： 一个酶蛋白分子每分钟可催化10 3 ～10 4 个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合：1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。2.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。3.作用专一性强 ，酶活性不受样品中其他成分的
酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂的方法，是标记免疫技术的一种。近年来标记免疫技术飞速发展，应用不同标记物，根据不同原理、不同技术建立起来的检测方法层出不穷，而方法的创建者往往给同类的方法以不同的名称。因此确知某一方法属于哪一类型，对该方法的正确理解有着重要意义。本节先叙述各种标记免疫技
酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂的方法，是标记免疫技术的一种。近年来标记免疫技术飞速发展，应用不同标记物，根据不同原理、不同技术建立起来的检测方法层出不穷，而方法的创建者往往给同类的方法以不同的名称。因此确知某一方法属于哪一类型，对该方法的正确理解有着重要意义。本节先叙述各种标记免疫技
酶免疫技术一般分成酶免疫组化技术和酶免疫测定两大类。酶免疫组化技术与荧光抗体技术相似，酶标记抗体与组织切片上的抗原起反应，然后与酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光学显微镜下观察。如酶作用的产物电子密度发生一定的改变，则可用电子显微镜观察，称为酶免疫电镜技术。 酶免疫测定根据抗原抗体反应后