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聚乙二醇修饰反应类型

在20种构成蛋白质的常见氨基酸中,只有具有极性的氨基酸残基的侧链基团才能够进行化学修饰。常用的反应氨基酸包括赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸,N-端氨基和C-端羧基。这些氨基酸残基上的反应性基团多呈亲核性,其亲核活性通常按下列顺序依次递减:巯基>alpha氨基>E氨基>羧基(羧酸盐)>羟基。根据化学修饰剂与蛋白质之间反应性质的不同,修饰反应主要分为酰化反应、烷基化反应、氧化还原反应、芳香环取代反应等类型,对蛋白质进行氨基、巯基和羧基等侧链基团进行化学修饰。巯基通常存在于蛋白质的二硫键和活性位点上,而羧基如果不与蛋白质上的氨基发生分子间或分子内中和反应,也很难活化。因此,蛋白质或多肽分子最容易与修饰剂发生作用的位点是分子表面赖氨酸残基上的氨基,包括alpha氨基或E氨基。氨基修饰蛋白质分子表面的游离氨基具有较高的亲核反应活性,一般不处于活性中心部位,因而成为化学修饰......阅读全文

蛋白质PEG化修饰与纯化

聚乙二醇具有较广的分子量分布,随着平均分子量的不同,性质也产生差异,当分子量小于1000Da时,聚乙二醇是无色无臭粘稠的液体,高分子量的聚乙二醇则是蜡状白色固体,固体聚乙二醇的熔点正比于分子量,逐渐接近67℃的极限。毒性随分子量的增加而减少,小于400Da的 PEG在体内会经乙醇脱氢酶降解成有毒的代

固相微萃取-液相色谱联用技术研究进展(二)

目前,使用in-tube SPME 技术研究的样品及化合物有:水样中的氨基甲酸酯类农药[10 ,11] 、苯基脲类农药[4]、几种常见的易挥发芳香烃[14] 、尿样及血清样中的β阻滞剂[8] 、尿样及药片中的雷尼替丁[61] 、尿样中的苯异丙胺、脱氧麻黄碱及其衍生物、尿样中的抗抑郁剂等[49

这些血友病潜在创新疗法正在涌现

  血友病是一种X连锁的单基因隐性遗传病。它的特征是血液凝结级联反应受到破坏。在A型血友病中,凝血因子VIII(FVIII)缺失,而B型血友病中因子IX(FIX)缺失,导致失控的出血事件。关节内和肌肉内出血是最常见的临床症状。重复关节出血会导致永久性关节损伤,关节疼痛和活动幅度受限,严重影响患者生活

疏水作用色谱概述

 疏水作用色谱始于1972年SHaltiel及其工作者,他们利用带有碳氢化合物配基的琼脂糖凝胶以“疏水亲和色谱”分离蛋白 质。在其他实验室内也进行了类似研究和探索,1976年Hofstee将这种类型的色谱命名为疏水作用色谱。1980 年前后,不少学者就疏水作用的机理、分离规律等进行

抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检测的应用进展

类风湿关节炎(rheumataid arthritis,RA)是一种以慢性关节炎为特征的系统性自身免疫性疾病,该病如不及时诊断治疗,即可出现软骨和骨的侵蚀性病变,造成关节结构破坏,最终发展成为关节畸形、强直,导致不同程度的残疾,因此早期诊断至关重要。但是,目前的诊断均依据1987年美国风湿协会修订的

液相色谱填料基质的发展概述

高效液相色谱的填料可分为无机基质填料和有机基质填料,无机基质填料包括硅胶、氧化铝、氧化锆、羟基磷灰石、氮化物以及活性碳等。此外还有复合物材料,即通过精细调控技术制备的无机-有机球杂交基球,经化学衍生后,制备得对药物分析和筛选很有用的高效、可耐pH2~8、低吸附性的新型填料。1、硅胶无机基质材料中最重

赛默飞在HUPO上发布两款新质谱

Thermo Scientific Exactive Plus EMR 和 Q Exactive Plus Orbitrap 系统在 HUPO上加入最新 Orbitrap 

抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检测的应用进展

类风湿关节炎(rheumataid arthritis,RA)是一种以慢性关节炎为特征的系统性自身免疫性疾病,该病如不及时诊断治疗,即可出现软骨和骨的侵蚀性病变,造成关节结构破坏,最终发展成为关节畸形、强直,导致不同程度的残疾,因此早期诊断至关重要。但是,目前的诊断均依据1987年美国风湿协会修订的

PCR技术 PCR技术的应用

一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合

PCR检测方法(二)

3.实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不

PCR简介及污染的处理 高速离心机

何谓PCR,简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制.目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。 PCR的要素基本的PCR须具备1.要被复制的DNA模板 Template 2

PCR简介及污染的处理

PCR技术简介  前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reacti

PCR实验污染与对策

PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪

PCR检测方法

PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染

PCR污染及解决对策

 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法,在微生物感染的诊断中具有重要的价值。在PCR扩增过程中,扩增的DNA产量是呈指数上升的,经过n个循环的扩增,一个DNA分子的产量便达到2n个拷贝。PCR产物一般为10

BioMarin递交血友病领域基因疗法申请

  血友病是一种罕见的伴性遗传凝血障碍疾病。由于患者体内缺乏凝血因子,轻微受伤就可能导致他们难以忍受的疼痛和危及生命的出血。大部分血友病患者通常无法正常上学,不能尽情玩耍,并且需要不停输入凝血因子……而这一切即将被改变。就在不久前,BioMarin Pharmaceutical先后在欧洲和美国递交了

纳米技术和基因工程技术相结合或能开发新型抗癌疗法

  由于癌症耐药性的出现、对肿瘤组织靶向性变差及癌症随后的转移,具有选择性抗癌活性的化疗药物的开发如今对科学家们越来越没有吸引力,而在具有肿瘤特征的细胞类型中,研究者发现,癌症干细胞与患者癌症进展和转移密切相关,这就反映了癌症干细胞能够自我更新并且进入机体的循环系统中。图片来源:JAIST  近日,

单克隆抗体的制备(三)

3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死,在无菌操作下取组织,放 在 4°C无血清培养基中,最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

PCR污染与对策

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因  (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污

质谱界重磅:继Nature子刊后董梦秋团队又发Nature

  交联质谱技术(英文全称Chemical cross-linking of proteins coupled with mass spectrometry, 简称CXMS或XL-MS);CXMS利用化学交联剂将蛋白质或蛋白质复合体中空间距离足够接近的两个氨基酸通过共价键连接起来,酶切成肽段后用质谱

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。磁珠法 纯化DNA原理磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸发生吸附反应。硅磁(

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

    磁珠法纯化DNA原理    磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料,来吸附核

核酸分离与纯化的原理及其方法学进展

 核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综

核酸分离与纯化的原理及其方法学进展

核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综述。核酸分离

核酸分离与纯化的原理及其方法学进展

核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综述。核酸分离

核酸分离与纯化的原则、步骤、磁珠法纯化DNA原理

磁珠提核酸磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤、磁珠法纯化DNA原理。核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko  Koide  and  Shohei  Koide          

基因疗法简介

基因疗法是指将正常基因植入靶细胞代替病人细胞中的遗传缺陷基因,或关闭、抑制异常表达的基因,以达到预防和医疗疾病目的的一种临床医疗技术。在治疗遗传性疾病、恶性肿瘤、癌症、艾滋病病毒(HIV)、关节炎、糖尿病、腺苷脱氢酶(ADA)缺陷症、神经系统紊乱、心脏病等疾病方面,基因疗法发挥着越来越重要的作用。基