外切核酸酶Ⅲ消化产生多组嵌套缺失突变体
试剂、试剂盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ缓冲液核酸酶 S1 停止反应混合液酚氯仿醋酸钠外切核酸酶ⅢKlenow 混合物连接混合物核酸酶 S1 反应混合物限制性内切酶凝胶靶 DNA仪器、耗材 微量离心管或带 U-型孔的微量滴定板水浴装置实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分清参阅附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。dNTP 溶液中含有 dATP、dGTP 和 dTTP, 每种 dNTP 浓度为 0.5 mmol/L，溶在 25 mmol/L Tris-Cl(pH8.0) 中乙醇（100%, 冰冷；70%, 室温。)10x 外切核酸酶Ⅲ缓冲液660 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)66 mmol/LMgCl2100 mmol/Lβ-巯基乙醇核酸酶 S1 停止反应混合液0.3 mmol/L Tris50 mmol/L EDTA(pH8-0)酚：氯仿醋酸钠（3mol/L,pH5.2)酶和缓冲液外切核酸酶Ⅲ不同......阅读全文
外切核酸酶的种类
为限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease，简称限制酶）。当外源DNA侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被水解，从而得到保护。 限制性核酸内切酶的研究和应用发展
外切核酸酶的种类
20世纪70年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序，称为限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease，简称限制酶）。当外源DNA侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA
外切核酸酶的介绍
一、核酸外切酶 有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例
外切核酸酶的基本介绍
一、核酸外切酶有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒
外切核酸酶的基本介绍
核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为核糖核酸酶（RNase）,有些核酸酶只能作用于DNA,称为脱氧核糖核酸酶（DNase）,有些核酸酶专一性较低,既能作用于RNA
外切核酸酶的基本信息
核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶专一性较低，既能作用于RNA也能
外切核酸酶Ⅲ的基本信息
中文名称外切核酸酶Ⅲ英文名称exonuclease Ⅲ;exoⅢ定 义编号：EC 3.1.11.2。沿3′→5′方向催化脱氧核糖核酸外切，产生5′-磷酸单核苷酸的酶。此酶优先水解双链DNA，对DNA链上无嘌呤核苷酸附近的位点具有核酸内切酶的活性。大肠杆菌外切脱氧核糖核酸酶Ⅲ是其中一种。应用学科生物
关于外切核酸酶的种类介绍
20世纪70年代,在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶,能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序,称为限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease,简称限制酶）。当外源DNA侵入细菌后,限制性内切酶可将其水解切成片段,从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达,而细菌本身的D
外切核酸酶Ⅲ的基本信息
中文名称外切核酸酶Ⅲ英文名称exonuclease Ⅲ;exoⅢ定 义编号：EC 3.1.11.2。沿3′→5′方向催化脱氧核糖核酸外切，产生5′-磷酸单核苷酸的酶。此酶优先水解双链DNA，对DNA链上无嘌呤核苷酸附近的位点具有核酸内切酶的活性。大肠杆菌外切脱氧核糖核酸酶Ⅲ是其中一种。应用学科生物
外切核酸酶的基本信息
核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶专一性较低，既能作用于RNA也能
外切核酸酶的基本信息介绍
一、核酸外切酶 有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸,所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶,只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸,称为3′→5′外切酶,例
外切核酸酶－Ⅲ－消化产生多组嵌套缺失突变体
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 乙醇 外切核酸酶Ⅲ缓冲液 核酸酶 S1 停止反应混合液 酚 氯仿 醋酸钠 外
外切核酸酶－Ⅲ－消化产生多组嵌套缺失突变体
逐步地从靶 DNA 的一端或另一端删除多个寡核苷酸的嵌套式缺失突变方法被用来确定功能性顺式调控元件的边界，早先曾作为指导 DNA 测序的模板。该方法依赖于核酸酶，这些核酸酶均以可预测的方式消化 DNA, 其中外切核酸酶 HI 是目前最好的。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J.
外切核酸酶－Ⅲ－消化产生多组嵌套缺失突变体
试剂、试剂盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ缓冲液核酸酶 S1 停止反应混合液酚氯仿醋酸钠外切核酸酶ⅢKlenow 混合物连接混合物核酸酶 S1 反应混合物限制性内切酶凝胶靶 DNA仪器、耗材 微量离心管或带 U-型孔的微量滴定板水浴装置实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分清参阅附录
单链特异性外切核酸酶的基本信息
中文名称单链特异性外切核酸酶英文名称singlestrand specific exonuclease定 义编号：EC 3.1.11.1。特异地催化从多核苷酸单链的末端相继切下核苷酸的酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
单链特异性外切核酸酶的基本信息
中文名称单链特异性外切核酸酶英文名称singlestrand specific exonuclease定 义编号：EC 3.1.11.1。特异地催化从多核苷酸单链的末端相继切下核苷酸的酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
外切体复合物的简介
外切体的核心是一个由六个亚基组成的环状结构，外围的亚基都结合在这一环状结构上。在真核细胞中，这一核心存在于细胞质和细胞核（特别是核仁）等细胞区室中；在不同的区室中，与之结合的蛋白质也不尽相同，从而可以调控外切体的活性以特异性地降解特定区室的RNA底物。外切体的底物包括信使RNA（mRNA）、核糖
关于核酸外切酶的简介
有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶
关于增变基因的基本信息介绍
许多增变基因的存在，有力地表明自发突变与其说是依赖于理化因子，莫如说是大大的依赖于遗传控制的生物因子。例如在T4噬菌体中，在同一个DNA多聚酶。 基因座位上曾发现有与增变基因性质相反的反增变基因（antimutator——能使自发突变率降低的基因）的突变型。这是因为在具有增变基因的突变型中DN
S1核酸酶作图的方法和原理
三种不同的核酸酶——S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行RNA定量，确定内含子位置，以及用来鉴定在克隆的DNA模板上的mRNA 5′端和3′端的位置。当检测RNA被杂交到DNA模板上时，用核酸酶S1进行保护试验的分析；当检测RNA被杂交到来自DNA模板的RNA上时用RNA酶。外切核酸酶Ⅶ有更
外切糖苷酶的基本信息
外切糖苷酶是一种蛋白质，能够切下多糖非还原末端的一个单糖。外切糖苷酶对单糖组成和糖苷键有专一性要求。
外切葡聚糖酶的基本信息
中文名称外切葡聚糖酶英文名称exoglucanase定 义催化葡聚糖中末端糖苷键水解，将单糖分子切下，有一定的底物专一性的酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
外切糖苷酶的基本信息
外切糖苷酶是一种蛋白质，能够切下多糖非还原末端的一个单糖。外切糖苷酶对单糖组成和糖苷键有专一性要求。
关于核酸外切酶的信息介绍
有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶
不同质量的内切酶，实验结果大不相同
不好的内切酶常常被各种蛋白酶、非特异外切酶和核酸外切酶污染。使用被外切酶污染的内切酶切割DNA，则会在切割底物的同时破坏产物的末端（外切酶偷偷切掉1、2个bp，琼脂糖电泳却看不出来），让后续的连接、克隆和表达出现问题！而NEB提供的内切酶大部分都经过重组改造，在最大程度上避免了外切酶污染的问题，让你
核酸酶的分类介绍
核酸外切酶有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
核酸酶的主要种类
核酸外切酶有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
细胞内cccDNA的抽提与纯化
最常用的抽提细胞内cccDNA的方法是蛋白质－去污剂沉淀法，其原理是基于rcDNA和cccDNA与蛋白质结合能力的差异。rcDNA能与蛋白质共价结合，与绝大多数细胞染色体DNA一起形成沉淀，而cccDNA不能与蛋白质结合故游离于上清中，用酚氯仿抽提上清即可得到cccDNA。根据笔者的经验，该方法的主
内切葡聚糖酶的外切葡聚糖酶
中文名称外切葡聚糖酶英文名称exoglucanase定 义催化葡聚糖中末端糖苷键水解，将单糖分子切下，有一定的底物专一性的酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
DNA聚合酶外切酶活性─校对作用
外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA 生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有 聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明