方案12胶内蛋白质的S吡啶乙基化实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒β-巯基乙醇还原缓冲液仪器、耗材冷冻干燥离心机去离子水温箱冷冻干燥机小离心管移液管塑料皿实验步骤方法 1: 整块凝胶的还原和 S-吡啶乙基化1.保证整块凝胶的正确染色和脱色（见方案 9)。2.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h。这一步骤是为了除去脱色液中的乙酸，否则乙酸会反方向地影响还原缓冲溶液的 pH 值。3.将凝胶转移到一个干净的器皿中。4.将凝胶浸在 50 ml 的还原缓冲溶液中（体积取决于凝胶和器皿的大小）。在 4℃ 孵育凝胶 2 h。5.加入 4-乙烯基吡啶到还原缓冲溶液中，终浓度为 2%(体积分数）。避光室温孵育 lh。6.加人过量的 2-巯基乙醇（终浓度 2%，体积分数），以终止烷基化作用。7.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h。这一步骤是为了除去/5-巯基乙醇，否则会干扰蛋白质水解。8.如果蛋白质条带不再可见，重......阅读全文
方案12 胶内蛋白质的S-吡啶乙基化实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒β-巯基乙醇还原缓冲液仪器、耗材冷冻干燥离心机去离子水温箱冷冻干燥机小离心管移液管塑料皿实验步骤方法 1: 整块凝胶的还原和 S-吡啶乙基化1.保证整块凝胶的正确染色和脱色（见方案 9)。2.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化：大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化：微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M
方案11 胶内蛋白质的硝酸银染色实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒乙酸显影液固定液甲醇硫酸银水溶液终止反应液仪器、耗材塑料皿摇床实验步骤1.将凝胶放在塑料皿中（用一次性的塑料皿或者彻底洗过的塑料皿），加入足量的固定液以覆盖凝胶。固定 20 min, 并轻轻摇动。2.弃掉固定液，加人足量的 50% 甲醇覆盖胶，轻轻摇动
方案10 胶内蛋白质的锌/咪唑负染色实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒固定液咪唑硫酸锌仪器、耗材摇床实验步骤方法 1: 直接用咪唑、SDS 和锌负染色1.将胶浸放在固定液中 20 min，并轻轻摇动。2.弃掉固定液，用去离子水洗胶 2 次，轻轻摇动 15 min。3.将胶与含有0.1%SDS 的 0.2mol/L 咪唑共孵
方案9 胶内蛋白质的考马斯亮蓝染色实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒考马斯亮蓝染色液脱色液仪器、耗材玻璃纸塑料制凝胶干燥框机械摇床塑料皿塑料包装纸高级纸巾实验步骤一、染胶除非特别提到，否则应在室温下进行染色。1.把含有目标蛋白质的凝胶放到装有考马斯亮蓝染色液的塑料皿中，使染色液覆盖凝胶。把塑料皿放到机械摇床上，在室温下染
方案13 胶内蛋白质的酶解和肽段提取实验
实验材料在二维凝胶电泳中分离的蛋白质试剂、试剂盒胶内胰酶消化缓冲液三氟乙酸（TFA)仪器、耗材冷冻干燥离心机小离心管水浴锅实验步骤1.切下凝胶上的蛋白质点，放人小离心管中。2.以 0.lmol/L NH4HCO3、50% 乙腈（用于胰酶）或 0.05mol/L Tris-HCl(PH9.3)、50%
方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化：微量方法
实验材料纯化的蛋白质样品试剂、试剂盒乙腈碘乙酸正丙醇还原缓冲液储存液仪器、耗材台式离心机HPLC 系统冷冻干燥离心机聚丙烯小管水浴或温箱实验步骤一、样品还原1.利用冷冻干燥离心机蒸发纯化的蛋白质样品溶液（含 0.01%~0.02% Tween-20)，直到少于 10ul。2.加入 150ul 储存液
方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化：大规模方法
实验方法原理蛋白质链间或链内完整的二硫键，会给酶解或化学裂解带来麻烦。如：1.二硫键连接的肽段洗脱物，在基于RP-HPLC的肽段作图中会产生单个的峰，从而使这些肽段图很难解释；2.最理想的方法是在序列测定之前，分离由S—S键连接的肽段，否则会使序列数据的解释变得复杂；3.没有断裂二硫键的蛋白质不便于
方案12 应用分子扫描器进行蛋白质组分析实验
试剂、试剂盒 乙腈α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA)α-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（TAME）氨基黑封端（capping)试剂考马斯亮蓝 R250HCl石蜡油PBS-TweenTris-Cl胰酶凝胶电泳试剂 仪器、耗材 电转膜仪电泳系统IAV膜MALDI 样品板质谱仪PVDF
蛋白质免疫印迹实验制备分离胶、积层胶
制备分离胶、积层胶 1）所需器材：制冰机、制胶槽、Teflon梳子、小烧杯、手套、大冰盒、去离子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸钠）、10%AP（过硫酸铵）、TEMED（四甲