免疫酶细胞化学实验技术
免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色后，于光镜或电子显微镜下观察分析的形态学研究方法。 40多年前，Coons及其同事利用荧光色素（FITC）标记抗体而开创的免疫荧光抗体技术，具有一定的灵敏性、特异性、操作简单等优点，但亦存在抗体用量大，标本不能长期保存、需较昂贵的荧光显微镜等问题。几乎在同一时期，电子显微镜在医学生物学领域中得到了广泛的应用。为克服荧光抗体法的不足、并能在超微结构水平定位抗原物质的存在部位，Nakane(1966)等成功地引入了酶代替荧光色素标记抗体，进行组织细胞内抗原或半抗原的定位，开辟了酶标抗体技术免疫酶细胞化学之路。 Sternberger（......阅读全文
免疫酶细胞化学实验技术
免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色
免疫酶细胞化学实验技术-4
三、ICC在细胞功能研究中的应用 形态学研究目的之一是揭示组织细胞结构特征及其功能意义。利用ICC显示给与细胞增殖标记物，是组织细胞学研究中形态和功能相结合的重要手段之一。目前常用的细胞增殖标记物有4种，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
免疫酶细胞化学实验技术-3
一、对照实验 1．吸收实验 应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时，需用相应的抗原吸收抗血清后，再孵育标本，判断结果的可信性（结果应为阴性）。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种（见本书第一章 ），对于不能形成沉淀，难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原，以固相吸收为佳
免疫酶细胞化学实验技术-2
（四）染色原理及步骤 1．基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同，亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而绝大数单克隆
细胞免疫化学：免疫酶标技术
1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗涤3×3分钟。7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理 免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上，吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术，其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体，通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合，形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物，因
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上，吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术，其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体，通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合，形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物，因此可用荧光显微镜或普通光学显微镜观察到复合物的存在，达到检测
酶细胞化学技术的实验方法介绍
样品制备酶细胞化学的一个重要问题是既要保存好细胞内酶的活性，又要保存好细胞的结构，因此选择适当的固定剂种类、浓度、固定的方式和时间是细胞化学技术的一个关键问题。光镜样品固定多选用中性福尔马林或多聚甲醛,4℃、24小时，常规的石蜡包埋切片可以满足相当一部分酶的细胞化学要求；电镜样品固定通常用0.5～2
电镜酶细胞化学实验
实验方法原理 电镜酶细胞化学反应分两步：①细胞内酶在一定条件下与底物进行初级酶反应（形成初级产物）；②应用捕捉剂与初级产物反应形成电子致密物质。电镜酶细胞化学捕捉方法很多，最常用于水解酶类的为金属盐沉淀法和应用于氧化还原酶类的为嗜锇物质形成法。金属盐沉淀法原理是酶反应初级产物与重金属结合形成不溶解的
免疫酶组织化学技术
免疫酶组织化学技术 1．酶标直接法和间接法 Nakane(1966)将辣根过氧化物酶(HRP) 标记在抗体免疫球蛋白分子上，创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶桥法的基础上，建立了非标记抗体法，先将HRP免