脑片膜片钳实验方法(一)

1966年,Yamamoto和McIlwain首次在脑片上记录了电生理活动(1966a, b),证实了脑组织在体外也能存活,并保持很好的活性状态。此后,该方法在生理学研究中的应用越来越广泛,并为中枢神经系统生理和药理学领域突飞猛进的发展奠定了基础。1989年,Blanton将脑片电生理记录与细胞的膜片钳记录结合起来,建立了脑片膜片钳记录技术,这为在细胞水平研究中枢神经系统离子通道或受体在神经环路中的生理和药理学作用及其机制提供了可能性。在脑片电生理记录中,实验者可以按不同的实验目的直接准确地改变脑片灌流液的成份和条件,如温度、酸度和渗透压、通氧状态、以及离子通道或细胞信号转导通路的阻断剂等;另外,实验者还能借助显微镜准确地放置记录电极和刺激电极,同时,可借助一些特殊的加药装置,将一定浓度的药物加到整个脑片或是脑片上的特定区域上,研究电信号沿神经环路的传递规律。在电生理学实验结束后,活性较好的脑片还可用于生物化学或解剖学的分析......阅读全文

脑片膜片钳实验方法(一)

1966年,Yamamoto和McIlwain首次在脑片上记录了电生理活动(1966a, b),证实了脑组织在体外也能存活,并保持很好的活性状态。此后,该方法在生理学研究中的应用越来越广泛,并为中枢神经系统生理和药理学领域突飞猛进的发展奠定了基础。1989年,Blanton将脑片电生理记录与细胞

脑片膜片钳实验方法(四)

5、突触反应的记录现在许多实验室都开始应用膜片钳技术记录培养神经元间、组织片中和异体移植组织中的突触传递。与尖电极记录相比,它具有明显的优势。如,记录的成功率较高,较高的信噪比,能较准确地钳制胞电位等。膜片钳甚至可以应用于在位突触活动的记录(Covey, 1996)。记录自发突触后反应   自发的

脑片膜片钳实验方法(三)

4、突触反应的判断及其波幅稳定性的评价突触信号的判断   突触信号样的假象波有三个来源。第一、邻近纤维的活动使静止细胞产生电压波动;第二、如果恒流刺激强度过大,电流就可被注入突触后神经元,使其产生失活时间类似EPSP或EPSC的信号,其信号幅度随刺激强度的变化而变化;第三、直接刺激突触后神经元诱导

脑片膜片钳实验方法(五)

(2) 自发性突触反应的分析  突触反应的检测   目前有三种方法判断自发性突触反应(Hwang,1999)。第一、峰值超过即定阈值,该方法受基线波动的影响较大,这可以通过基线加以弥补;第二、峰值相对于基线的变化量超过阈值,它受高频噪声的干扰较大,而且,很难设定一个合适的阈值,为克服这些不足,可以

脑片膜片钳实验方法(二)

二、海马脑片的膜片钳记录1、将刺激电极放置在含突触前纤维脑片区域附近在突触传递的研究中,应该同时记录突触前和突触后神经元的电信号,虽然,并不是所有突触前神经元胞体的动作电位均可传导至突触 (Vincent, 1996)。由于在突触前和突触后两个神经元上同时做膜片钳记录较困难,因此,需要用其它的方

膜片钳操作实验

运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳实验的过程,粗略地包括以下几个方面。 1. 标本制备 根据研究目的的不同,可采用不同的细胞组织,如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等,现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究

膜片钳操作实验

膜片钳技术可应用于:(1)膜离子通道特性的研究;(2)药物筛选。实验方法原理膜片钳技术是用微玻管电极(膜片电极或膜片吸管)接触细胞膜,以千兆欧姆以上的阻抗使之封接,使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域(膜片)与其周围在电学上分隔,在此基础上固定点位,对此膜片上的离子通道的离子电流(pA级)进行监测记

膜片钳实验操作

运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳实验的过程,粗略地包括以下几个方面。 1. 标本制备 根据研究目的的不同,可采用不同的细胞组织,如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等,现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所

膜片钳实验操作

运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳实验的过程,粗略地包括以下几个方面。1. 标本制备 根据研究目的的不同,可采用不同的细胞组织,如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等,现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所

膜片钳用脑片的振动切片机ZQP86的简介和操作说明

ZQP-86型振动切片机,是科研人员参考国外技术资料研制而成的,从切片功能和效果上与进口振动切片机相近,性价比高,它广泛地应用于科研、教学、化工、医疗卫生等单位将近30年。客户遍布全球各大研究院校,Indiana University,School of Medicine;Murdoch Unive

专访江小龙:3项新技术+反复枯燥的实验=里程碑式成果

  穷其一生我们大多数人都在渴望突破,但突破就像喵星人的尾巴,在追逐的过程中令人筋疲力竭,找到好的方法可能会事半功倍,那么要想获得一份科学突破,是百分之九十九的汗水更重要,还是百分之一的灵感更重要呢?也许每个人都有自己的答案,但对于贝勒医学院的江小龙博士来说,应该两者都很重要。   上个月江博士研究

膜片钳技术的应用进展(一)

【摘要】  膜片钳技术是研究离子通道的“金标准”,应用该技术可以证实细胞膜上离子通道的存在,并能对其电生理特性、分子结构、药物作用机制等进行深入的研究。 【关键词】  膜片钳技术 离子通道 进展    1976年由德国马普生物物理化学研究所的Neher和Sakamann首次报道了应用膜片钳技术在蛙胸

膜片钳记录和分析技术(一)

细胞是动物和人体的基本组成单元,细胞与细胞内的通信,是依靠其膜上的离子通道进行的,离子和离子通道是细胞兴奋的基础,亦即产生生物电信号的基础,生物电信号通常用电学或电子学方法进行测量。由此形成了一门细胞学科—电生理学(electrophysiology),即是用电生理的方法来记录和分析细胞产生电的大小

膜片钳实验系统配置

一个电生理配置有4个主要的需求:环境需求:保持标本的健康的手段。光学需求:显现标本以供观察的手段。机械结构需求:稳定定位微电极的手段。电子学需求:放大和测量信号的手段。我们将配置分成两种类型的“典型”配置:胞外记录和单通道膜片钳记录。胞外记录的配置该配置主要用于记录脑片的场电位。一般目标是将一个相对

新研究发现多个大脑神经细胞新类型

  美国研究人员日前发表论文说,借助高质量的成年小鼠脑片,他们对大脑神经细胞进行分类,找到多个以前未被描述过的神经细胞类型,揭开了神秘大脑的又一层面纱。  这一研究由美国贝勒医学院助理教授江小龙和同事安德烈亚斯·托利亚斯领导,研究论文发表在最新出版的《科学》杂志上。江小龙告诉新华社记者:“我们重建了

膜片钳技术的应用学科相关介绍

  膜片钳技术发展至今,已经成为现代细胞电生理的常规方法,它不仅可以作为基础生物医学研究的工具,而且直接或间接为临床医学研究服务,  目前膜片钳技术广泛应用于神经(脑)科学、心血管科学、药理学、细胞生物学、病理生理学、中医药学、植物细胞生理学、运动生理等多学科领域研究。  随着全自动膜片钳技术(Au

小鼠脑片免疫组织化学(ABC法)实验

实验方法原理 通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料 冷冻切片试剂、试剂盒 一

牛黄醒脑片的包装

  包装材质:PVC片材、铝箔泡罩;包装规格:12片×2板。

牛黄醒脑片的成分

  牛黄、水牛角、麝香、冰片、郁金、黄连、黄芩、栀子、雄黄、珍珠母、玳瑁、朱砂。

牛黄净脑片的性状

   本品为糖衣片,除去糖衣后显棕褐色;气清凉,味苦。

牛黄净脑片的成分

  人工牛黄、蒲公英、黄芩、大黄、玄参、赭石、麦冬、郁金、磁石(煅)、板蓝根、雄黄、朱砂、石决明(煅)猪胆糕、地黄、栀子、甘草、金银花、黄连、珍珠、冰片、天花粉、连翘、石膏、葛根。

大鼠海马神经细胞钠通道电流的记录实验

实验方法原理钠通道在多种细胞尤其是在神经、肌肉等可兴奋细胞中广泛存在。钠电流(ⅠNa)是快反应细胞上最重要的除极离子流,与细胞的兴奋性密切相关。钠通道在膜电位-70~-65 mV开始激活,产生一迅速激活并迅速失活的内向电流,最大电流峰值在膜电位-40 ~-30 mV,反转电位为+30 mV左右。在参

大鼠海马神经细胞钠通道电流的记录实验

实验方法原理 钠通道在多种细胞尤其是在神经、肌肉等可兴奋细胞中广泛存在。钠电流(ⅠNa)是快反应细胞上最重要的除极离子流,与细胞的兴奋性密切相关。钠通道在膜电位-70~-65 mV开始激活,产生一迅速激活并迅速失活的内向电流,最大电流峰值在膜电位-40 ~-30 mV,反转电位为+30 mV

神经元的电生理检测

实验概要本部分将以大鼠脑片的神经元为例,描述神经元的电生理检测过程。本检测是利用玻璃微电极检测电流的方法,来测定单个神经元的电生理反应。主要试剂电极液主要设备玻璃微电极、显微镜、视频摄像系统、显微操作仪、膜片钳、电极holder。实验材料大鼠脑片的神经元实验步骤(1)将玻璃微电极固定在电动操作臂上。

组织薄片膜片钳全细胞记录实验

实验方法原理通过全细胞膜片钳技术来检测组织薄片(脊髓片或脑片)上神经元的突触后电位、突触后电流及该突触后电位或电流的可塑性改变等现象。组织薄片膜片钳技术与分散细胞膜片钳技术相比,具有的优点是组织薄片中的细胞更接近在体的原始环境,很好地保持了神经元之间的突触联系。实验材料神经细胞试剂、试剂盒孵育细胞外

培养细胞膜片钳记录实验

实验方法原理 培养细胞膜片钳记录是在无菌条件下将组织块经过机械分离和消化酶的处理后分离成单个细胞并在孵箱中培养数天后进行常规膜片钳记录的一种方法。细胞原代培养过程与急性分离细胞的过程基本一致,但前者需在无菌条件下进行实验材料 细胞试剂、试剂盒 细胞培养液一般用F-12medium细胞分离过程用液一般

培养细胞膜片钳记录实验

实验方法原理培养细胞膜片钳记录是在无菌条件下将组织块经过机械分离和消化酶的处理后分离成单个细胞并在孵箱中培养数天后进行常规膜片钳记录的一种方法。细胞原代培养过程与急性分离细胞的过程基本一致,但前者需在无菌条件下进行实验材料细胞试剂、试剂盒细胞培养液一般用F-12medium细胞分离过程用液一般用Pu

组织薄片膜片钳全细胞记录实验

实验方法原理 通过全细胞膜片钳技术来检测组织薄片(脊髓片或脑片)上神经元的突触后电位、突触后电流及该突触后电位或电流的可塑性改变等现象。组织薄片膜片钳技术与分散细胞膜片钳技术相比,具有的优点是组织薄片中的细胞更接近在体的原始环境,很好地保持了神经元之间的突触联系。实验材料 神经细胞试剂、试剂盒 孵育

培养细胞膜片钳记录实验

基本方案             实验方法原理 培养细胞膜片钳记录是在无菌条件下将组织块经过机械分离和消化酶的处理后分离成单个细胞并在孵箱中培养数天后进行常规膜片钳记录的一种方法。细

组织薄片膜片钳全细胞记录实验

基本方案             实验方法原理 通过全细胞膜片钳技术来检测组织薄片(脊髓片或脑片)上神经元的突触后电位、突触后电流及该突触后电位或电流的可塑性改变等现象。组织薄片膜片