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RealtimePCR实验注意事项(防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...3

DEPC处理方法如下:1.DEPC处理(1)DEPC水:100ml超纯水加入0.2ml DEPC,充分混匀,高压灭菌。(2)Tip头(枪头)、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材(包括1ml、200μl、20μl Tip头;EP管和PCR反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超纯水加入1ml DEPC)37℃浸泡过夜,高压灭菌。2.提取RNA,用DEPC水溶解3.RT我是用PCR仪来控制温度和时间的,所以RT是在PCR反应管中作的。4.操作过程中要戴一次性手套,并经常换手套。最好把要直接接触样品的东西都用DEPC水处理一下,枪头盒插好枪头后,加入1-2ml的0.1轕C水,在灭菌就行了;现在有进口的RNASE FREE的枪头买,直接用不用处理的如何消除污染机器运行完后,取出PCR产物时不能随便丢弃,应该用塑料手套或其他打结包好后丢入垃圾桶。(1) 试剂:mixer尽量分装,不要原瓶多次取用。(2)加样:原......阅读全文

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南一、基本步骤:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比

Real-time PCR实验注意事项

Real-time PCR实验注意事项实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到zui大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱,切记切记多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这几乎是zui快提高的捷径了所有的试剂都自己配,出了问题才好

shRNA干扰载体构建

产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号,H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA,shRNA经过RISC剪切后形

shRNA干扰载体构建

产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号,H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA,shRNA经过RISC剪切后形

RNA干扰载体的构建的实验流程

RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控,RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域,进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体,本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。产品技术背景pRI系列载体是基于III类rna聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动

实时荧光定量PCR(realtime PCR)

            实验方法原理 实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

One Step RT- PCR PreMix(染料法)使用说明

One Step RT- PCR PreMix(染料法) 使 用 说 明 书 【前言】 本产品提供了一个灵敏、高效、快速地扩增并检测 RNA 的完整系统。One Step RT- PCR preMix 包含所有 RT-PCR 所需的、并经优化的 Reaction Buffer、RT 酶混合物等,使用

如何做实时荧光定量 PCR (realtime PCR)

  标签: 实时 荧光定量 PCR realtime PCR 本生生物   所谓实时荧光定量 PCR 技术,是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   原理及材料:   实验材料:细胞样品   试剂、

实时荧光定量PCR(realtime PCR)

实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰仪器、耗材 离心管离心机风光光度计电泳槽凝胶板Realtime PCR仪实验步骤 一、 样品

实时荧光定量PCR(realtime PCR)

实验步骤一、 样品RNA的抽提 1.  取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。2.  两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分

荧光定量PCR具体使用操作步骤简介

操作步骤荧光定量PCR 实验步骤:折叠样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层

实时荧光定量PCR

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析,分析的都是PCR终产物。但是在许多

奥林巴斯生化分析仪五十问

( 1 )问题:工作结束之后不能再次开始工作或正常关机。 原因:最常见的原因是打印机处于实时打印状态( Data Log List 或 Realtime Report 状态),打印机可能缺纸、卡纸、被误操作为暂停或关机等。 解决方法:排除打印机故障,点击 < 仪器状态 >< ( 6

真假鱼翅分析—RephiLe

2013年1月8日,CCTV央视新闻播出了记者卧底暗访假鱼翅真相的报道,其中曝光了不少饭店所售鱼翅实为明胶制作的“赝品”,这些所谓的鱼翅不过是用“鱼翅精”调制而成的。 鱼翅作为中国传统的名贵食材之一,广泛为东亚各国所接收。鱼翅以鲨鱼的鳍制成,有机成分主要有多种蛋白如软骨粘蛋白、胶原和软骨硬蛋白等。鱼

生物标志物研究与早期药物研发基因表达分析功...(三)

靶基因表达标准化参考基因选择对于相关定量分析来说,通过参考基因表达进行靶基因表达标准化。理想情况下,标准化处理应该能够补偿 RNA/cDNA起始量变异情况,以及cDNA合成或 PCR 扩增中潜在抑制剂的作用。参考基因作为内源性样本材料对照,工作流中,与靶基因一同被处理。为获取可靠结果,标准化

荧光定量PCR

  荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结

2449.8万!这所高校发布采购建设分析测试中心平台

  分析测试百科网讯 近日,海南省教学仪器设备招标中心受招标人海南大学委托,采购场发射透射电子显微镜、基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱仪、纳米喷雾干燥仪、石英晶体微天平、多功能样品前处理平台、热重-红外图像-气质联用原位反应系统、显微傅里叶变换红外光谱仪+光声光谱检测器、差示扫描量热

生物标志物研究与早期药物研发基因表达分析功...(四)

FFPET 样本特异性RealTime ready qPCR检测潜在生物标志物假设检验我们使用的第一套临床样本来自于各种用于人类研究的福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织。肿瘤来源的 FFPE  组织是临床试验或生物标志物研究中,治疗复合物研发最具有相关性的样本材料。使用 High

miRNA引物设计流程介绍

MiRNA的命名原则可以大致归纳如下:一个系统命名包含三部分内容,即物种,microRNA类别,序号。三者间用短线连接。物种一般用三个小写字母表示,如hsa,mmu和rno分别代表人,小鼠和大鼠。MicroRNA类别是指所命名的microRNA是pre-miRNA还是mature miRNA。pre

miRNA引物设计流程介绍

  MiRNA的命名原则可以大致归纳如下:   一个系统命名包含三部分内容,即物种,microRNA类别,序号。三者间用短线连接。物种一般用三个小写字母表示,如hsa,mmu和rno分别代表人,小鼠和大鼠。MicroRNA类别是指所命名的microRNA是pre-miRNA还是mature miR

生化分析仪50问,从此不求人

( 1 )问题:工作结束之后不能再次开始工作或正常关机。原因:最常见的原因是打印机处于实时打印状态( Data Log List 或 Realtime Report 状态),打印机可能缺纸、卡纸、被误操作为暂停或关机等。解决方法:排除打印机故障,点击 < 仪器状态 >< ( 6 )

转基因大米中Bt基因的检测方法

2014 年 7 月,央视日前报道了湖南、湖北、安徽、福建等4省存在转基因大米的新闻,引发社会极大关注。记者在武汉市一家大型超市,随机购买5种大米。经检测后发现,这 5 种大米中,有 3 种含转基因成分:Bt63。Bt63 是一种抗虫害的基因,它是苏云金芽孢杆菌基因中的杀虫晶体蛋白基

转基因大米中Bt基因检测

2014 年 7 月,央视日前报道了湖南、湖北、安徽、福建等4省存在转基因大米的新闻,引发社会极大关注。记者在武汉市一家大型超市,随机购买5种大米。经检测后发现,这 5 种大米中,有 3 种含转基因成分:Bt63。Bt63 是一种抗虫害的基因,它是苏云金芽孢杆菌基因中的杀虫晶体蛋白基因,可以有效防止

PCR技术盘点

  PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:模板DNA的变性,模板DNA与引物的退火(复性),引物的延伸。重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小

原来分子信标引物设计可以这样

分子信标的设计分子信标(Tyagi and Kramer 1996) 是另一种特异的荧光实时 PCR 探针(图 1), 这种分子信标可以在体内和体外动态地、实时地检测核酸 杂交事件(Tyagi and Kramer 1996; Kostrikis et al. 1998; Tyagietal. 19

qRT-PCR

实验概要实时定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前,实时定量PCR所使用的荧光化学组分一般可分为两种:荧光探针和荧光染料。1)TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的

qRT-PCR

实验概要实时定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前,实时定量PCR所使用的荧光化学组分一般可分为两种:荧光探针和荧光染料。1)TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的

免疫组化实验过程中的注意事项

如何随心所欲的做好免疫组化?免疫组化(Immunohistochemistry) 至今也有八十余年的历史了,从 1930 年免疫组化的理论被提出讨论,一直到 1941 年以带有荧光色素的抗体,成功地观察到组织中肺炎双球菌抗原的存在,至此之后不断对于方法改良创新,也就形成了我们实验中才使用的免

总统推荐、FDA特批的ID NOW 5分钟检测新冠病毒是啥原理?

根据雅培所说,其ID NOW COVID-19检测仪非常轻巧,只有6.6磅重,相当于一台面包机大小。无需将其送到中心实验室进行分析,而是直接在急救室或紧急护理诊所进行,这能减少部分患者所面临的长达数天的检测结果等待时间。医生将采集到病人鼻咽拭子的棉签直接插入机器,测试新冠病毒阳性反应只需要5分钟时间

生物标志物研究与早期药物研发基因表达分析功...(一)

生物标志物研究与早期药物研发基因表达分析功能学检测RealTime ready 应用生物标志物研究与早期药物研发基因表达分析功能学检测RealTime ready应用 Sabine Lohmann*, Andrea Herold*, Tobias Bergauer#, Anton Be