mESCs建系
实验概要mESCs建系主要试剂细胞基础培养液、DPBS、0.25%Trypsin、0.1%明胶、兔抗鼠全血清原液、豚鼠补体、0.5%链蛋白酶、冲胚液、培养液A、mESCs培养液B主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、体视镜、注射器、镊子、虹膜剪实验材料小鼠（3.5 dpc），即见阴道栓后3.5天的怀孕小鼠实验步骤（1）胚胎的获得①取怀孕3.5 dpc的孕鼠，用断颈法处死。②用75%酒精消毒孕鼠，尽量喷湿全身。③打开腹腔，用虹膜剪和镊子修剪去脂肪和系膜（用镊子将子宫轻轻拉起，使系膜和脂肪张开，然后用虹膜剪紧贴子宫将系膜与子宫分离），从输卵管根部及子宫下端分叉处剪下双侧子宫，将双角子宫于阴道处剪断。！注意：冲胚时选择合适大小的镊子、剪刀，直镊、直剪。④注射器吸入冲胚液CZB，配以剪平头的4＃至6＃针头，用镊子（最好是直头镊子）轻轻从一端（细端，即连接卵巢的一端）插入子宫腔内2～3 ......阅读全文
mESCs建系
实验概要mESCs建系主要试剂细胞基础培养液、DPBS、0.25%Trypsin、0.1%明胶、兔抗鼠全血清原液、豚鼠补体、0.5%链蛋白酶、冲胚液、培养液A、mESCs培养液B主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、体视镜、注射器、镊子、虹膜剪实验材
miPS建系protocol
实验概要本实验方法介绍了miPS建系的详细操作流程。主要试剂所用试剂盒： 逆转录病毒体系试剂盒 MIPD0-000-001慢病毒体系试剂盒 MIPD-000-02规格：5次 组分名称货号规格数量逆转录病毒体系/慢病毒体系20ul/支5支助转因子10ul1支小鼠iPS细
mESCs传代
实验概要mESCs传代主要试剂细胞基础培养液、DPBS、mES培养液A、mESCs培养液B、0.25% Trypsin主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、冻存管、倒置显微镜、离心机实验步骤（1）传代前一天准备好饲养层细胞，饲养层细胞要求接种密度大致
hESCs的分离及建系
实验概要hESCs的分离及建系主要试剂hESCs培养液、DPBS、0.25%Trypsin、1 mg/mL胶原酶Ⅳ、丝裂霉素C、0.1%明胶、囊胚培养液G2、胚胎冻存液、细胞基础培养液主要设备35 mm培养皿、4孔培养板、滤器、注射器针头；2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、25 mL、50
原代细胞的培养与建系
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。细胞的纯化或细胞克隆技术是细胞培养工作的基础。 原代细胞的取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。 一、取材的基本要求 1．取材要注意新鲜和保鲜 2．应严格无菌
mESCs冻存及复苏
实验概要mESCs冻存及复苏主要试剂mESCs培养液A 或者B、冻存液A、DPBS、0.25%Trypsin、细胞基础培养液实验材料15 mL离心管、冻存管、程序降温盒、镊子、培养皿实验步骤（1）冻存①冻存细胞时，最好提前两个小时更换新鲜的培养液。②准备冻存液并放到冰上预冷。③弃去培养液，用DPBS
mESCs体外EBs分化鉴定
实验概要mESCs体外EBs分化鉴定主要试剂0.25%Trypsin，细胞基础培养液实验材料60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、倒置显微镜实验步骤（1）常规方法消化细胞（参见胚胎干细胞传代方法），吹打成单细胞。（2）将单细胞移至60 mm或100 mm培养皿中，改用细
原代细胞的培养与建系2
（四）骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 取上述标本时，除严格无菌，注意抗凝外，还要尽快分离培养，一般无需其他处理，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。具体操作详见后面有关章节。 （五）动物组织取材 1、鼠胚组织取材 首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物，然
原代细胞的培养与建系1
细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增
原代细胞的培养与建系3
下面为美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）入库细胞的基本要求： （1）培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态，细胞已传代数等。 （2）冻存液 培养基和保护剂名称。 （3）细胞活力 冻融前后细胞接种存活率和生长特性(生长繁殖曲线，分裂指数等)。 （4
原代细胞的培养与建系4
（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用
原代细胞的培养与建系3
（二）消化分离法组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易
神经干细胞的建系培养
实验概要神经干细胞的建系培养主要试剂神经干细胞培养液主要设备移液枪、3.5 cm细胞培养皿实验步骤（1）分离、分选得到的细胞用神经干细胞培养液培养，每2 d予以半量换液一次。注意换液时动作要轻，不要吸到神经球。（2）培养2～4 d后可观察到神经球在培养液中呈悬浮生长，每次分离得到的神经球记为一个系。
原代细胞的培养与建系1
原代细胞的培养与建系 细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20
原代细胞的培养与建系2
(二)原代细胞的维持 1、贴壁细胞（包括半贴壁细胞的换液） 贴壁细胞长成网状或基本单层时，由于营养缺乏，代谢产物增多，pH变酸，不适宜细胞生长，此时细胞还未长成单层，未达到饱和密度，仍需继续培养，因此，需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单，即弃去旧液，
原代细胞的培养与建系5
三、原代细胞的培养方法原代细胞的培养也叫初代培养 是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。原代细胞因刚从组织中分离开，生物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，也最接近和反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。原代细胞往往有多种细胞
原代细胞的培养与建系4
4.软琼脂克隆分离法 本法仅适用于悬浮培养的类淋巴细胞或恶性程度高的贴壁细胞，而正常贴壁细胞在软琼脂中不能形成克隆。 （1）将对数生长期的细胞制成单个细胞悬液(贴壁细胞用0.25%胰蛋白酶消化使之分散成单个细胞)作活细胞计数。调整细胞浓度至1×106细胞/L，然后根据实验要求再作梯倍稀释。通
猴胚胎干细胞的分离及建系
实验概要猴胚胎干细胞（monkey Embryonic Stem Cells，monESCs）的分离及建系主要试剂重组人卵泡刺激素（recombinant human Follicle Stimulating Hormone，rhFSH）、hCG、豚鼠补体、抗猴全血清、TL-HEPES、0.5
mESCs二倍体胚胎嵌合
实验概要mESCs二倍体胚胎嵌合主要试剂孕马血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG）、H-CZB、人绒毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin，hCG）实验材料注射器、手术剪、手术镊、35 mm培养皿、15 mL离心
mESCs四倍体胚胎嵌合
实验概要mESCs四倍体胚胎嵌合主要试剂PMSG、H-CZB、hCG、电融合液、CZB培养液、含葡萄糖的CZB培养液实验材料注射器、手术剪、手术镊、35 mm培养皿、15 mL离心管、持卵针、体视显微镜、显微操作仪、电融合仪实验步骤（1）二倍体二细胞期胚胎准备①超数排卵。采用8～12周龄的雌性小鼠，
各种类型的基因编辑鼠如何建系？
《鼠年说鼠》系列文章，每周二更新，专门解答大小鼠铲屎官们在养鼠过程中经常遇到的繁育与鉴定类的问题，同时向大家征集问题，任何基因编辑鼠饲养繁殖或鉴定的困惑统统可以丢给小赛，小赛会给您回复或统一在后面的内容为大家做出详细的解答。今天我们就开始第九期的内容吧～ 完全性基因敲除、基因敲入（点突变）鼠如何建
小鼠诱导性多能干细胞诱导及建系
实验概要小鼠诱导性多能干细胞诱导及建系主要试剂0.05%Trypsin、0.25% Trypsin、0.1%明胶、细胞基础培养液、DPBS、冻存液A、iPSCs诱导培养液实验材料35 mm、60 mm、100 mm培养皿，15 mL、50 mL离心管、体视镜实验步骤①每隔24 h为感染后的细胞换液，
慢病毒用于体外（in－vitro）－感染培养原代细胞和建系细胞
1. 慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，用户使用Invabio提供的慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体内（in vivo）注射所需要的病毒量。如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测
单－克－隆－抗－体－的－制－备——杂交瘤的建系
实验步骤 在单克隆抗体的特异性得到充分验证之前，应该对所有候选的杂交瘤进行建系。但为了减少不必要的工作量，可以选择其中 2 0 个最佳的候选孔。在检测这 2 0 个孔的培养上 清（见辅助方案1 ) 为阳性后，应该将这些孔的细胞进行冻存，同时进行有限稀释。附 加 材 料（其他材 料 见 基 本 方 案
mESCs体内畸胎瘤形成和苏木素伊红染色
实验概要mESCs体内畸胎瘤形成和苏木素-伊红染色主要试剂mESCs培养液A或者B、无水乙醇、二甲苯、石蜡、4% PFA、伊红染液、苏木素染液、浓盐酸、中性树胶主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、细胞计数板、手术剪、载玻片、切片机、包埋机、烘箱、倒
脂肪含量和肥胖相关蛋白在哺乳动物发育中的功能底物
N6-甲基腺嘌呤（m6A）是真核生物mRNA内部最常见、最丰富的修饰，受多种蛋白的调控。其中，脂肪含量和肥胖相关蛋白（FTO）作为首个被鉴定的RNA去甲基化酶，可以擦除mRNA内部的m6A，但FTO在哺乳动物发育中的主要功能底物仍不清楚。近日，美国芝加哥大学和同济大学合作在《Science》杂志
一步生成条件性基因敲除小鼠ESC
最近发展的基因组编辑工具，包括转录激活因子样效应物核酸酶（TALENs）和CRISPR/Cas9，使我们能够通过诱导双链断裂（DSBs）的非同源末端连接（NHEJ）修复，快速而有效的敲除靶向基因。然而，这种方法不能进行必需基因的功能研究，这类研究通常采用的策略是基于Cre-LoxP系统的条件性基
破解家畜干细胞不能承受－长周期、多次基因编辑难题
家畜干细胞在生命科学基础研究、细胞培养人造肉生产和优良品种培育等方面具有巨大应用前景。自1981年小鼠胚胎干细胞（mESCs）培育成功以来，国内外科学家一直试图建立稳定的、可长期传代的大型家畜胚胎多能干细胞系，但始终未获得成功。 近日，中国农业大学韩建永教授团队联合国内多家单位在该领域获得重大
m6A修饰新功能——调控染色质状态和转录活性
m6A是真核生物中最常见的一类化学修饰，能够在多种生物过程中发挥重要作用，包括癌症发生发展、细胞分化、压力应答、免疫反应以及神经发育等方面。目前大部分研究主要探究m6A对蛋白编码基因的调控——即影响mRNA稳定性或翻译效率。2020年1月17日，美国芝加哥大学何川，中科院北京基因组研究所韩大力和同济
lncRNA甲基化如何研究？
lncRNA分子通过海绵机制结合microRNA发挥生物学功能，这个ceRNA机制已经让大家心生厌倦了。可大牛就是大牛，引入甲基化就能轻松的变废为宝，竟然能让lncRNA的ceRNA思路变得瞬间高大上发表10分以上的文章，你一定和小编我一样很好奇他是怎么做到的。RNA甲基化，作为最新的国自然热点受到