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siRNA制备方法介绍

体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高,定制周期长,特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高,为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了,比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于:已经找到最有效的siRNA的情况下,需要大量siRNA进行研究不适用于:筛选siRNA等长时间的研究,主要原因是价格因素2.体外转录以DNA Oligo为模版,通过体外转录合成siRNAs,成本相对化学合成法而言比较低,而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制,虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs,但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比,还是需要占用研究人员相当的时间。值得一提的是体外转录得到的siRNAs毒性小,稳定性好,效率高,只需要化学合成的siRNA量的1/10就可以达到化学合成s......阅读全文

RNA干扰实验技术

实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因

RNAi-制备小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)的方法-2

越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的 mRNA,这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference

RNAi:制备siRNAs的方法

越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA,这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference p

RNAi:制备siRNAs的方法

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siRNA的转染

将制备好的siRNA,siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种: 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙,RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合,沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转

小分子RNA

RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”,但越来越多的证据清楚的表明,RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰(RNA interference)的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识,更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具,

专家指南:如何研究基因调控(一)

随着基因组学研究的深入,人们已经不再满足于了解基因的功能,而是对基因调控表现出愈加浓厚的兴趣。现在,我们知道,DNA甲基化和组蛋白修饰可调控基因,microRNA和非编码RNA也可以。基因调控的研究工具也越来越多,包括RNA-seq、ChIP-seq、ChIP-chip等。究竟该采用哪种方法来测定m

羊城再聚首 颗粒学不忘初心,砥砺前行!

  分析测试百科网讯 2020年10月25日,由中国颗粒学会、大同大学(台北)、台北科技大学主办的中国颗粒学会第十一届学术研讨会暨海峡两岸颗粒技术研讨会在厦门隆重举行。大会进入第二天,国内知名颗粒学领域知名学者继续为参会听众带来学术盛宴。分析测试百科网作为大会支持媒体,为您带来全程跟踪报道。和妍(上

脂质体制备中使用最多的磷脂辅料-阳离子脂质材料DOTAP

说起DOTAP,这是一款带正电荷的阳离子脂质材料,阳离子脂质体作为如今最火热的研究方向之一,如何选择制备材料是我们需要了解的首要部分。本期AVT小编要介绍的即是在阳离子脂质体制备中使用最多的DOTAP,制备脂质体不可或缺。 根据包载的API不同,可将阳离子脂质体分为两大类,一类是包载以mR

贴壁/悬浮细胞瞬时转染-RFect质粒DNA转染操作步骤和注意..

本文以RFect Plasmid DNA Transfection Reagent(RFect质粒DNA转染试剂盒),作为携带质粒穿膜的载体物质,具体介绍DNA转染方法。图. 用本产品4ul转染1ug pEGFP-C2质粒到293T细胞后,绿色荧光蛋白的表达情况。贴壁/悬浮细胞瞬时转染-RFect质

2018国自然研究热点一:环状RNA研究深度剖析

  1.环状RNA为什么火?它到底是何方神圣?   2013年两篇Nature[1][2]文章的出世,彻底颠覆了我们对RNA的传统认知,同时也迅速引爆了整个生物医学界!经过严格统计汇总后,2017年国家自然科学金获批的项目中环状RNA研究相关的项目总数高达176项,其中有两项杰出青年基金,一项优秀

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关于外泌体目前最火热的研发方向深度解读

刚登 nature 又上 science,外泌体为啥这么火 近几年外泌体研发持续升温,全球科研大咖纷纷扎堆此领域,有关外泌体载药、诊断、免疫疗法等方向的文章陆续发表在Science、Nature等各大顶级期刊上,外泌体已成为生命科学/基础医学研究的一大热点。图自网络 外泌体是由哺

转基因技术的发展与转基因动植物

1.转基因技术的发展 自从人类学会蓄养动物、耕作植物以来,我们的祖先就从未停止过对物种的遗传改良。过去的几千年里改良物种的主要方式:针对自然环境造成的突变或无意的人为因素所产生的优良基因和重组个体进行选育和利用,从而通过随机和自然的积累优化基因。然而这种极低几率且无人类控制性的被动模式大大

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第三届浦江论坛DMPK学术会议在沪召开

  分析测试百科网讯 2016年7月19日,由上海药理学会药物代谢专业委员会和中科院上海药物所共同主办的第三届浦江论坛DMPK学术会议在沪召开。本次会议以“基于药物转运体的相互作用的理论和应用:从计算机、到体外、到临床”为主题,诚邀前日本东京大学药学院院长、国际药代学会主席、现日本RIKEN研究所所

JACS/Angew/AM 11篇,赵东元、彭笑刚、楼雄文、张强等成果速递

  1. JACS:用于检测癌细胞和肿瘤中溶酶体甲醛含量的双“锁钥”钌复合探针  生物医学研究表明,过量的甲醛生成是造成组织癌变、癌症进展和转移的关键因素之一。响应性分子探针可以检测活细胞和肿瘤中溶酶体内的甲醛,并对药物引发的甲醛清除过程进行监测,这也有助于未来的癌症诊断和治疗监测。  大连理工大学

《ACS Nano》:传递DNA至脑瘤细胞的可降解纳米粒子

Biodegradable plastic molecules (orange) self-assemble with DNA molecules (intertwined, black circles) to form tiny nanoparticles that can carr