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细菌质粒的基本特征

①质粒DNA的复制为不依赖细菌染色体而自主复制;②可自行丢失和消除;③转移性;④编码产物赋予细菌某些性状特征。......阅读全文

细菌的遗传物质

  一、细菌染色体  细菌作为原核型微生物,虽没有完整的核结构,但却有核区(或核质)。在电镜下观察,核区有盘旋堆积的DNA纤维。自大肠杆菌提取的DNA是一条完整的DNA链,分子量为2.4×109daltons,仅为人体胞DNA量的0.1%。细胞的DNA含量决定存在的基因数。如按每个基因由平

分子克隆技术(质粒DNA和DNA插入片段的制备、连接反应...-1

克隆(Clone)是指通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。分子克隆(Molecular Cloning)是指由一个祖先分子复制生成的和祖先分子完全相同的分子群,发生在基因水平上的分子克隆称基因克隆(DNA克隆)。其基本原理是:将编码某一多肽或蛋白质的基因(外源基因)组装到细菌质粒(

质粒提取的方法和影响因素

质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或者表达的重要媒介,这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值,质粒提取是分子生物学最常见的实验之一。目前质粒提取实验大多借助试剂盒来完成,那么关于质粒提取的原理,您的了解足够深入吗? 目前,质粒提取试剂盒最常用的方法是碱裂解法。碱裂解法原理:根据共价闭合环状D

原核表达(prokaryotic expression)条件优化

影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外,还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素[58]。由于Vector NTI suitor7.0软件模拟表达,可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难,所以本实验的工作主要

细菌的耐药性是怎样产生的?

    由于细菌有了耐药性,许多抗生素用起来已经不那么灵了,这几乎已经是普遍都知道的事实了。可是,细菌是怎么会产生耐药性的呢?    四十年代青霉素刚发明的时候,可以说是药到病除。几年后,大部分葡萄球菌便对青霉素产生了耐

质粒提取实验方法

导论质粒DNA的小量制备质粒DNA的大量制备质粒DNA的纯化一、导论    已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA, 这些方法都含有以下3个步骤:细菌培养物的生长。细菌的收获和裂解质粒DNA的纯化。(一)细菌培养物的生长  从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

质粒提取的原理与常见问题

现在较常用的质粒提取方法有三种:碱裂解法、煮沸法和去污剂裂解法,前两种方法较为剧烈,适用于较小的质粒(<15Kb),而去污剂裂解法则比较温合,一般用于分子量较大的质粒(>15Kb)。 碱裂解法是一种广泛使用的制备质粒DNA的方法。其原理为:染色体DNA远远大于质粒DNA,染色体DNA为线状

Microbial Genomics:口腔细菌或会导致肠炎的发生

  悉尼新南威尔士大学领导的一项研究发现,严重的溃疡性结肠炎(一种炎症性肠病(IBD))与一种新发现的口腔细菌菌株有关。  科学家在患有严重溃疡性结肠炎的人的细菌细胞样本中发现了一种名为“ pSma1”的分子。该分子在通常存在于口腔中的弯曲杆菌弯曲杆菌(C. condisus)的某些菌株中。  这项

国内外菌种保藏机构名称与缩写

中 国ACCC 中国农业微生物菌种保藏管理中心ISF 中国农业科学院土壤肥料研究所SH 上海市农业科学院食用菌研究所CACC 抗菌素菌种保藏管理中心IA 中国医学科学院抗菌素研究所 SIA 四川抗菌素工业研究所CGMCC 普通微生物菌种保藏管理中心AS 中国科学院微生物研究所AS-IV 中

质粒DNA的抽提、沉淀及琼脂糖凝胶电泳

一、实验目的·学习酚、氯仿抽提去除蛋白质的基本方法·了解质粒DNA的抽提方法·学习掌握琼脂糖凝胶电泳的方法·熟练取液枪的使用方法二、实验原理·在DNA的粗提液或其他的DNA反应体系中,一般都混有蛋白质、寡糖苷酸等杂质。酚和氯仿可以使蛋白质变性,离心后变性蛋白质存在于有机相和水相之间的界面,吸取上层含

利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验

            实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在内的多种 RNA

利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验

实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料 质粒菌株试剂、试剂盒 X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠

利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验

实验方法原理大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料质粒菌株试剂、试剂盒X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠溶液β

质粒提取

一、导论已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA,这些方法都含有以下3个步骤:细菌培养物的生长。细菌的收获和裂解质粒DNA的纯化。(一)细菌培养物的生长从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长),然后从中纯化质粒,质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载

探访监测超级细菌的微生物实验室

医生在检测培养皿中的细菌  中国疾控中心26日通报了三起感染“超级细菌”病例,其中一名福建患者因肺癌晚期死亡。江苏已将江苏省人民医院、南京市鼓楼医院等多家医院列为检测“超级细菌”的哨点医院。记者昨天来到江苏省人民医院临床检验科微生物实验室――这个监控“超级细菌”的

分子生物学常用实验技术(一)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定第二章DNA 酶切及凝胶电泳第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第四章RNA 的提取和cDNA 合成第五章重组质粒的连接、转化及筛选第六章基因组DNA 的提取第七章RFLP 和RAPD 技术第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆第九章分子杂交技术第十章测

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳

(一)碱变性法提取质粒DNA   质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息,可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测

质粒(Plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息,可赋予细菌某些新的表型。分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤:即(1)细菌的培养和质粒DNA的扩增;(2)细菌菌体的裂解;(3)质粒DNA的提取与纯化。实验方法原理1、碱变性法提取质粒DNA:细菌

科学家解析病原菌多重耐药性分子机制

  为了应对动物源细菌耐药性的快速传播给畜牧养殖业造成的危害,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究创新团队,系统研究了细菌在抗生素长期使用下产生耐药性的分子机制,日前取得重要进展,研究成果发表于美国微生物学会近期出版的《抗菌药物和化疗》上。  该项研究揭示了细菌中携带的质粒在不同抗生素使用条

超级细菌来袭 细菌耐药已成“全球威胁”

  青霉素对许多致病菌不起作用了;结核病常规特效药对相当数量的病人失效了;青蒿素在非洲也遇到了耐药……   日前,中科院生物物理所等单位在《自然—基因组学》上发表了揭示结核分枝杆菌耐药性的文章;与此同时,中科院武汉病毒所在《艾滋病免疫综合征》上发表了关于HIV基因进化与传播耐药研究的

细菌耐药已成“全球威胁”

  青霉素对许多致病菌不起作用了;结核病常规特效药对相当数量的病人失效了;青蒿素在非洲也遇到了耐药……   日前,中科院生物物理所等单位在《自然—基因组学》上发表了揭示结核分枝杆菌耐药性的文章;与此同时,中科院武汉病毒所在《艾滋病免疫综合征》上发表了关于HIV基因进化与传播耐药研究的重要进展;而中

细菌遗传物质的常见分类

1)细菌染色体:细菌的各种遗传特性主要受细菌的核质中染色体环状双螺旋DNA所控制。2)质粒:质粒是能够自主复制的细菌染色体以外的双股环状DNA医学`教育网搜集整理。细菌所携带的重要质粒有F质粒、Vi质粒、Col质粒和R质粒等。3)转位因子(或称转座因子):为细菌基因组中可以改变自身位置的独特DNA片

质粒提取(三)

10)按步骤8)所述再次轻轻地吸去上清,这一步操作要格外小心,因为有时沉淀块贴壁不紧,去除管壁上形成的所有乙醇液滴,打开管口,放于室温直至乙醇挥发殆尽,管内无可见的液体(2-5)分钟。11)用50μl含无DNA酶的胰RNA酶(20μg/ml)的TE(pH8.0)溶解核酸稍加振荡,贮存于-20℃。注:

我国科学家在细菌耐药性研究领域取得新发现

  近日,华南农业大学刘雅红教授团队在持续的耐药性监测中分离到一株同时耐受碳青霉烯类和粘菌素抗生素的“超级细菌”,介导这两类药物的耐药基因位于可转移的质粒上,并且可以高效地转移给其他的菌株,如果该质粒转移给临床致病菌,将会给人医临床的治疗带来巨大的挑战。相关研究成果近日以“Co-transfer o

南海海洋所揭示质粒上毒素/抗毒素系统新功能

  近日,中国科学院南海海洋研究所研究员王晓雪团队在《美国科学院院刊》(PNAS)上,在线发表了题为《接合型质粒编码的毒素/抗毒素系统PrpT/PrpA直接调控质粒拷贝数》的论文,系统阐述了质粒编码的毒素/抗毒素系统调控质粒复制功能的发现和作用机制。   质粒是存在于细菌染色体之外,具有独

抗生素滥用导致耐药性基因层出不穷

  抗生素的出现,拯救了无数生命。但是细菌对于抗生素产生的耐药性问题也逐年加重,新药研发的速度远跟不上细菌耐药出现的速度。  多年来,由于抗生素的滥用,多种耐药性基因开始在全球蔓延。一旦大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和其它类似的肠道栖息生物产生耐药性,那么对革兰氏阴性菌有很强杀菌作用的多粘菌素

煮沸裂解法提取质粒DNA

  质粒是存在于细菌染色体外的一个或多个能独立复制并稳定遗传的小型环状双链DNA分子,其分子量一般在0.2-10KD范围内。由于质粒分子小,便于分离和提取,可以携带目的基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达。  质粒提取方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质

质粒DNA的提取与纯化

一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步:①细菌的培养和质粒的扩增,②细菌菌体的裂解,③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方

质粒DNA提取实验步骤

质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。