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分子生物学常用实验技术(page1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分子杂交技术 第十章测序技术 第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第一节概述 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb 不等,为双链、闭环的DNA 分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿......阅读全文

表面等离子共振技术在蛋白-蛋白相互作用的应用(一)

应用领域结合特异性、抗体选择、抗体质控、疾病机制、药物发明、生物治疗、生物处理、生物标记物、配体垂钓、基因调控、细胞信号传导、亲和层析、结构-功能关系、小分子间相互作用等检测原理表面等离子共振(SPR)是一种光学现象,可被用来实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用。这种方法对生物分子无任何损伤,且

质谱成像技术使临床诊断更容易,更智能,分辨率可达3μm

  韩国DGIST的生物学研究团队最近开发出一种技术,该技术能够在一般大气压环境中无需化学预处理即可获得微米级活体生物样品的高分辨率质谱成像。  这项技术由DGIST的生物系Dae Won Moon教授和Jae Young Kim博士共同研发。该研究展示了一种高分辨率质谱成像系统,这个系统能够以几微

核磁共振波谱在药物分析中的应用,字数越多越好

核磁共振谱峰的面积(积分高度) 正比于相应质子数, 这不仅用于结构的分析中, 同样可用于定量分析. 用NMR 定量分析的最大优点, 是不需要引进任何校正因子或绘制工作曲线, NMR 可以用于多组分混合物分析、元素(如H、F) 的分析、有机物中活泼氢及重氢试剂的分析等. 其中, 混合物的定量分析更是广

樊春海:实现生物检测的一个“小目标”

   如何快速、准确开展各类遗传性疾病、传染病、肿瘤和神经退行性疾病等重要疾病的早期检测,是千万百姓心中的愿望。日前,一项生物检测研究获得了2016年度国家自然科学奖二等奖。该研究发展了若干早期生物检测技术,对于环境和传染性疾病的监控等方面具有重要意义。  这便是来自中科院上海应用物理研究所研究员樊

国家基金委八大学部公布“优先发展领域及主要研究方向”

  “十三五”期间,通过支持我国优势学科和交叉学科的重要前沿方向,以及从国家重大需求中凝练可望取得重大原始创新的研究方向,进一步提升我国主要学科的国际地位,提高科学技术满足国家重大需求的能力。各科学部遴选优先发展领域及其主要研究方向的原则是:  (1)在重大前沿领域突出学科交叉,注重多学科协同攻关,

免疫PCR的基本原理

    免疫PCR的基本原理1.定义  免疫PCR(immuno polymerase chain reaction,IM-PCR)是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结

链霉亲和素磁珠(SA magnetic bead)性能比较研究

磁性聚合物微球兼具高分子微球特性和磁响应性,因此,广泛应用于靶向给药、生物诊断、催化剂制备、磁成像等领域。目前,大部分的生物分子是通过表面的氨基或者羧基与磁性微球表面的基团共价结合的方式直接固定化在磁性微球的表面。这种方法不仅复杂,还会使固定化的生物分子活性受到较大影响,例如抗体可能会失去与抗原的特

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

免疫PCR[Im-PCR, Immuno PCR]基本原理、试验程序和操作方法-1

一、定义;免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高,常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方

太赫兹(THz)光谱在生物大分子研究中的应用(一)

 汪一帆1) 尉万聪2) 周凤娟1)** 薛照辉1)**(1)天津大学农业与生物工程学院,天津,300072; 2)清华大学生物科学与技术系,北京,100084)     摘要 太赫兹(THz)辐射是一种新型的远红外相干辐射源,近年

BIACORE3000生物分子相互作用分析仪使用说明

BIACORE3000操作手册本手册包括BIACORE3000工作原理,实验步骤,操作规程,注意事项等。BIA是基于表面等离子体共振(SPR)技术来实时跟踪生物分子间的相互作用,而不用任何标记物的技术。表面等离子体子共振(surface plasmon resonance , SPR)是一种

第五期原子光谱沙龙活动报道

ICP-MS单纳米颗粒技术在生命科学领域中的应用 清华大学化学系 韩国军博士   清华大学化学系的韩国军博士作了题为《ICP-MS单纳米颗粒技术在生命科学领域中的应用》的精彩报告。    自上世纪80年代ICP-MS被引入分析科学领域,近些年发展迅速。ICP-MS具有灵敏度高、速度快

质谱成像技术应用宝典

  现代生物学研究已经不再停留在仅从组织中识别一种特殊的化学成分,或者蛋白成分上了,我们需要精确的了解这些物质是如何分布,如何构成的,解答这些问题需要更进一步的实验技术,比如免疫组化或免疫荧光检测方法,但是这些技术需要特殊的抗体,而且效率低,偏差大。  因此研究人员将目光转向了质谱技术上,以质谱为基

质谱成像技术的完美解释

现代生物学研究已经不再停留在仅从组织中识别一种特殊的化学成分,或者蛋白成分上了,我们需要精确的了解这些物质是如何分布,如何构成的,解答这些问题需要更进一步的实验技术,比如,免疫组化或免疫荧光检测方法,但是这些技术需要特殊的抗体,而且效率低,偏差大。因此,研究人员将目光转向了质谱技术上,以质谱为基础的

《应用化学》-中科院化学所-生物分子马达组装

近日,在中国科学院、科技部和国家自然科学基金委的支持下,胶体、界面与化学热力学院重点实验室的研究人员与德国马普胶体界面研究所合作在生物分子马达的分子组装方面取得新进展,研究工作发表在近期出版的德国《应用化学》(Angew. Chem. Int. Ed. (2007, 46, 6996-7000))

生物素亲和素酶联免疫吸附试验(BAS-ELISA)

生物素亲和素(又称抗生物素)系统(biotinavidin system,BAS)标记抗体的技术是20世纪70年代后期发展起来的一种新的免疫检测方法。由于亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极其稳定,生物素标记抗体和酶的标记率高,又不影响蛋白的活性,使BAS标记技术比常规酶联免疫、放

生物分子的提取概述

生物分子分生物小分子和生物大分子。生物小分子的结构由较强的共价键决定。生物大分子中除较强的共价键外,还含有较弱的共价键和次级键,需温和的条件才能保证生物大分子的活性不被破坏。这两类生物分子的提取液成分和操作条件差别很大。生物分子的提取在离心机分离纯化的前期。将样品研磨,把被破碎的细胞置于一定的提取液

基因芯片相关技术

样品的准备及杂交检测目前,由于灵敏度所限,多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增,不过也有不少人试图绕过这一问题,如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法,引物特异性强,无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐; Lynx Therapeutics 公司引入

周连群团队打造国产生物分子界面分析仪

  蓝藻常于夏季开始繁殖,并且暴发速度极快,中科院苏州医工所传感创新中心研究员周连群和团队研发了一款神奇的生物分子界面分析仪,可在看不到蓝藻时,通过水样微囊藻毒素检测,快速检测出其藻毒素变化,从而预先知道蓝藻发展趋势。双通道生物分子界面分析仪便携式生物分子界面分析仪  近日,该款产品成功通过欧盟CE

太赫兹(THz)光谱在生物大分子研究中的应用(二)

4 THz 光谱在水环境中生物分子研究的应用    水对于生物分子发挥其功能有着至关重要的作用,但长期以来,由于实验仪器和研究方法的局限,水分子与生物大分子的相互作用难以观察. 90年代后期,随着THz-TDS技术开始应用于生物学研究领域,研究人员发现THz对生

大连化物所生物分子模拟理论方法研究取得系列进展

  随着生物大分子实验技术的飞速发展,越来越巨大和复杂的分子体系被发现和鉴定出来,凸显了生物分子体系本身特有的多尺度特性,而分子动力学模拟作为生物分子功能解析的强有力工具和研究手段,已经必不可少。但是由于这些体系包含的原子数目巨大,从几千到上百万,行使功能所涉及到的时间尺度从皮秒到毫秒,解析他们行使

生物亲和素 ELISA 知识

生物素亲和素 (又称抗生物素) 系统 (biotinavidinsystem,BAS) 标记抗体的技术是 20 世纪 70 年代后期发展起来的一种新的免疫检测方法。由于亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极其稳定,生物素标记抗体和酶的标记率高,又不影响蛋白的活性,使 BAS 标记技

MALDI-TOF MS在临床微生物检验中的应用进展

  1、前言  从目前的情况来看,大多数的微生物实验室采用的是一些传统的细菌鉴定手段,如革兰氏染色、氧化酶等生化反应,或者是采用梅里埃公司的API和Vitek鉴定系统。这些检测手段都很浪费时间,通常需要六到八个小时,对于一些难培养的细菌鉴定来说,将会耗费更多的时间。有时候我们也会采用一些分子生物学上

中科院苏州医工所研发生物分子“检测平台”

  “有没有一种东西,在一个事物的萌芽状态,就能检测出它的存在,从而加以预防与干预?”昨天,中国科学院苏州生物医学工程技术研究所发布信息,他们不仅研制出拥有完全自主知识产权、达到国际先进水平的“生物分子界面分析仪”,还研制出世界上最小的能产业化的便携式“生物分子界面分析仪”,体积只有“生物分子界面分

生物分子的提取概述

       生物分子分生物小分子和生物大分子。生物小分子的结构由较强的共价键决定。生物大分子中除较强的共价键外,还含有较弱的共价键和次级键,需温和的条件才能保证生物大分子的活性不被破坏。这两类生物分子的提取液成分和操作条件差别很大。  &

基于光子晶体纳米激光器的生物感应器可简化DNA探测过程

  科学家研究出新型,简单,低成本仪器,通过获知表面电荷密度或者溶液PH值的变化即可探测出DNA以及其他生物分子。  2015年1月13日华盛顿—一种简单易行的探测DNA分子以及癌症和其他如阿尔茨海默氏症标记蛋白的方法很快将要问世--这要归功于日本横滨国立大学(Yokohama National U

纳米增强酶生物传感器原理研究取得重要进展

    理化所主持的国家自然科学基金项目“酶分子构象影响传感器信息传递原理研究”,日前通过评审组专家评审,并被确定为“特优项目”。该研究从分子水平上探索了纳米材料与生物分子的结合和相互作用,从而指导分子生物传感器的组装应用,涉及当今生物分子传感技术研究的重大方向与前沿领

融智生物推出新一代适合定量应用的MALDI-TOF MS产品QuanTOF

  分析测试百科网讯 MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)是一种软电离生物质谱,仪器主要由两部分组成:基质辅助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子使其解吸,并通

MALDI TOF 在临床微生物检测中的应用

自从2015年美、中两国陆续推出了“精准医疗计划”后,“精准医疗”就一直备受社会各界的广泛关注。临床微生物检验在感染性疾病诊断、用药指导、抗菌药物管理、医院感染控制等方面对实施精准医疗起着至关重要的作用。近年来,由于抗菌药物的滥用导致多种细菌耐药以及新型细菌的出现,使得目前临床上对微生物种类的鉴定工