平衡法选择高亲和力噬菌体抗体

[器材和试剂] ● 链霉亲和素磁珠(DynabeadsM280,Dynal) ● 磁性1.5ml试管架(Dynal) ● 磷酸盐缓冲液(PBS) ● 2%脱脂奶粉PBS(2%MPBS) ● 生物素化试剂盒 ● 含0.1为Tween-20的PBS(PBS/Tween) ● 100mmol/L HCI ● lmol/L Tris.pH 7.4 ● 对数期生长的大肠杆菌TGI细胞 ● 用于自文库甘油储存料中制备噬菌体抗体的设备和试剂 ● 由定位突变或链改组制备的scFv突变衍生物文库 [方法] 1. 多样化的噬菌体抗体丈库中制备噬菌体抗体。 2. 根据厂家说明,对抗原进行生物素化。 3. 选择前,在1个1.5ml微量离心管中。用2%MPBS 1m1封闭150ul链霉亲和素磁珠,室温1小时......阅读全文

平衡法选择高亲和力噬菌体抗体

[器材和试剂] ● 链霉亲和素磁珠(DynabeadsM280,Dynal) ● 磁性1.5ml试管架(Dynal) ● 磷酸盐缓冲液(PBS) ● 2%脱脂奶粉PBS(2%MPBS) ● 生物素化试剂盒 ● 含0.1为Tween-20的PBS(PBS/Tween) ● 100mmol/L HCI 

ELISA检测噬菌体抗体与目的抗原的亲和力

【材料和试剂】 (1)酶标板 (2)酶标仪 (3)0.5mol/L Na2CO3(pH9.6) (4)1%A (5)HRP标记的抗M13噬菌体多抗 (6)2mol/L H2SO4 【操作步骤】 (1)将抗原用或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀释至10μg

ELISA检测噬菌体抗体与目的抗原的亲和力

实验概要本实验利用ELISA检测了噬菌体抗体与目的抗原的亲和力。主要试剂1. 0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)2. 1%BSA3. HRP标记的抗M13噬菌体多抗4. 2mol/L H2SO4主要设备1. 酶标板2. 酶标仪实验步骤1. 将抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(p

噬菌体培养法

一. 液体培养法1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中,于适当温度下振荡培养约8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。

电荷平衡法

这种方法对离子方程式最有用。在离子方程式中,除了难溶物质、气体、水外,其它的都写成离子形式,首先让方程两端的电荷相等,再用观察法去配平水、气体等。这种方法一般不失手,但对氧化还原反应却不太好用。如:碳酸氢铵溶液中滴加足量的氢氧化钠溶液1.首先把可电离的物质写成离子形式:H+ + NH4+ + OH-

新加坡:高碳排放平衡难度大

  新加坡自诩是一个干净和绿色的城市国家,但是蓬勃发展的经济和高消费的生活方式已使它成为世界上平均碳排放最大的城市之一。   法新社报道称,正在墨西哥举行的联合国气候峰会力图找到减少碳排放的方法,以减缓全球变暖。而新加坡在碳平衡上的状况,对亚洲及其他地区提出了具有挑战性的问题。   新加坡在许多

高亲和力单克隆抗体制备问题及对策

1,细胞长的慢或细胞死亡正常生长情况下,细胞一天传代一次,生长越好,贴壁越多对策:①培养基配方不对;② 接种密度太低,低于10的4次方;③污染了支原体或者其他不明细菌,支原体的现状是出现小黑点;细菌污染是浑浊;霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落;不明细菌污染出现砂状平铺背景,视野发暗。④细胞瓶刷洗不干净

平衡透析法的概念

中文名称平衡透析法英文名称equilibrium dialysis定  义用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得大分子与小分子结合的数据。应用学科生物化

平衡透析法的定义

中文名称平衡透析法英文名称equilibrium dialysis定  义用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得大分子与小分子结合的数据。应用学科生物化

平衡透析法的概念

中文名称平衡透析法英文名称equilibrium dialysis定  义用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得大分子与小分子结合的数据。应用学科生物化

抗体的亲和力

抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol,通常K的范围在 1

碘亲和力法判断直链淀粉与支链淀粉的纯度

  直链淀粉和支链淀粉是淀粉的两大主要组分,由于二者的分子结构、分子聚集状态各异,从而使得不同来源的淀粉有各自的应用表现。已有研究表明,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉的产品加工、物化特性等有着直接影响。而直链淀粉和支链淀粉的含量不同,关系着小麦等物质的品质。因此,我们经常需要用直链淀粉测

厦门改造高集海堤改善海域生态平衡

  人民网厦门10月18日电 (记者 蒋升阳)记者今天从厦门市政府召开新闻发布会上获悉,厦门高集海堤改造工程暨海堤纪念公园定于10月28日正式动工,高集海堤连接厦门岛与集美,是厦门岛第一条出道通道,始建于1953年6月17日,建成于1955年10月,全长2212米。

噬菌体抗体库的菌落筛选法

实验概要本实验介绍了噬菌体抗体库的菌落筛选操作流程。实验步骤1. 将每轮筛选洗脱的噬菌体用来感染新鲜的XLIBlu菌,以10μl、20μl等不同量菌液涂于LB氨苄青霉素平皿,37℃ 4~5h。2. 事先将硝酸纤维素膜在5mmol/L的IPTG溶液中浸泡10min,在超净台中晾干后,铺在上述涂有细菌的

高亲和力高纯度零污染的细胞培养级抗体制备指南

单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),是针对专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年,主要原理是利用产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。目前大量制备单抗的方法主要有两种方法:一种是动物体内生产法(腹水制备),在小鼠腹腔内接种

如何测定抗体亲和力

在《抗体工程》上有亲和力常数的测定方法,如平衡透析、竞争结合、荧光增强法、硫氰酸盐洗脱法、ELISA和固相放射免疫测定法(SPRIA)等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的检测方法。通常采用竞争结合以及Scatchard作图法。如果有条件用SPR方法,这是目前国际上流行的方法,该方法灵敏,客观。另

如何测定抗体亲和力

在《抗体工程》上有亲和力常数的测定方法,如平衡透析、竞争结合、荧光增强法、硫氰酸盐洗脱法、ELISA和固相放射免疫测定法(SPRIA)等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的检测方法。通常采用竞争结合以及Scatchard作图法。如果有条件用SPR方法,这是目前国际上流行的方法,该方法灵敏,客观。另

压力平衡法(压力室法)测定植物组织水势

一、原理植物叶片通过蒸腾作用不断地向周围环境散失水分,产生蒸腾拉力。导管中的水分由于内聚力的作用而形成连续的水柱。因此,对于蒸腾着的植物,其导管中的水柱由于蒸腾拉力的作用,承受着一定的张力或负压,使水分连贯地向上运输。当叶片或枝条被切断时,木质部中的液流由于张力解除迅速缩回木质部。将叶片装入压力室钢

抗原抗体反应抗体基因文库

  抗体基因文库(antibody recombination library)是将不同的重链和轻链基因随机组合,克隆到合适的表达载体中,在原核细胞表达不同的抗体,形成一个抗体库,从这个抗体库中,用抗原可以筛选到相应的抗体基因。抗体基因来源于杂交瘤细胞或动物B细胞(免疫或未免疫)的DNA和mRNA。

如何缩短库伦法水分仪平衡时间

  (1)检查分子筛是否干燥(可加少许变色硅胶作指示) :更换分子筛(可再生, 160 -300℃ 24 小时以上)  (2)检查滴定杯是否干净(会吸附水分):将滴定杯拆下,清洗干净,干燥后再装配  (3)检查泵管是否有残留的溶剂:将残留的溶剂敲入滴定杯,进行预滴定  (4)检查滴定杯是否拧紧(潮湿

润湿平衡法(可焊性测试)简介

本文目的是证明润湿平衡法在质量控制和过程开发方面优于传统可焊性肉眼观测测试法。 背景:大家都熟悉可焊性肉眼观察测试传统方法,如边缘浸润,漂锡,波峰焊测试,焊料扩散试验等,大多数测试似乎可以满足您的要求。焊接完成后,如果缺失一些元件,就要进行返工或退货,当然这会涉及额外费用。目前的测试方法无法跟上科技

关于高量输血法

   高量数输血法的目标是血色素维持在12-13克。例:输血前血色素11克,输血后血色素13克,平均值是12克;输血前血色素10.5克,输血后血色素13.5克,平均值是12克。   地贫患者的骨髓不能制造正常的红细胞,大部分的红细胞在骨髓内就死亡了,这就是贫血的原因。而骨髓会努力造血,于是体积就会变

抗体亲和力成熟的概念

抗体亲和力成熟(antibody affinity maturation)是指机体正常存在的一种免疫功能状态。在体液免疫中,再次应答所产生抗体的平均亲和力高于初次免疫应答。这种现象称为抗体亲和力成熟。只有那些表达高亲和力抗原受体的B细胞,才能有效的结合抗原,并在抗原特异的Th细胞辅助下增殖,产生高亲

“人体X形平衡法”的原理和应用

  本文介绍了周尔晋创造的“人体X形平衡法”,它的原理和技术操作要点,及其在祖国医学经络穴位理论上的创新。西医沿着“分析”的思路,把病分得越来越细,研制越来越多的新药,这是至繁、至昂贵的路子;中医则更着重认识“人”,即更重“扶正”,开发人的自愈潜能,事半而功倍,至简而至廉。下面简要介绍一下“人体

杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发

Part 1前言ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法,其实质是亲和力测定方法的一种变种,其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法,用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点,1.待测

ELISA方法学

ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法,其实质是亲和力测定方法的一种变种,其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法,用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点:待测样本极具多样性,且

噬菌体铺平板产生噬斑实验——连续稀释法

实验方法原理这种方法能从单个噬斑中分离出纯的噬菌体部落,而且可以对噬菌体母液进行浓度测定。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒麦芽糖培养基仪器、耗材平板微波炉试管加热器毛细管实验步骤1.  在含0.2 %麦芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉汤培养基培养大肠杆菌至饱和。加0.3 ml的大肠杆菌培养液到

关于平衡透析法的基本内容介绍

  平衡透析法是用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得到大分子与小分子结合的数据。  平衡透析法的透析动力是扩散压。扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的

双层平板法测噬菌体效价的优缺点

双层平板法的优点:①加了底层培养基后,可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补;②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上,因此不仅每一-噬菌斑的大小接近、边缘清晰,而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象;③因上层培养基中琼脂较稀,故形成的噬菌斑较大,更有利于计数。

满足高通、带通和平衡要求的OF2滤光片

海洋光学可提供高品质的玻璃滤光片,可吸收光谱中某些区域的光能。 这些OF2系列滤光片可轻松配置到我们的 光源, 比色皿支架和样品架上,以适应各种应用。高通滤光片通常用于阻挡二阶衍射光,在荧光和拉曼实验中,用于阻挡激发光。中性密度滤光片在部分区域吸收能量,而在其它区域透射能量。 例如,OF