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DCCIK细胞制备方法(一)

CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写,中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。 CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-γ、IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群, 其既具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性,又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。CIK细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广,对正常组织毒性低,体外可高度扩增等特点,是目前临床上广泛使用的过继性免疫治疗细胞。 DC是“DendriticCells”的缩写,中文全称为“树突状细胞”,因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。DC是由2011年诺贝尔奖获得者、加拿大籍科学家RalphM. Steinman于1973年发现的,是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞(Antigen Presen......阅读全文

DC-CIK细胞制备方法(一)

 CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写,中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。 CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-γ、IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群, 其既

DC-CIK细胞制备方法(二)

1.外周血单个核细胞的采集  1.1 用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞80 - 100ml;   1.2 淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC);   1.3 无血清培养液洗涤

DC-CIK细胞制备方法(三)

 5.0 DC-CIK细胞的制备和质检  5.1 收集步骤4和步骤3中所获得的DC 细胞和CIK 细胞,按1:10(数目比)的比例共培养,无血清培养液中添加重组人IL-2 (300 U/ml);  5.2 每3天半量换液

CIK/DC-CIK及其在细胞治疗上的应用(一)

【背景知识】  CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写,中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。 CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-γ,IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群,其既具有

CIK/DC-CIK及其在细胞治疗上的应用(三)

【培养原理】 1.DC培养用细胞因子: 1.1 GM-CSF(粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子) GM-CSF是一种造血生长因子,在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成,并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。 GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细胞因子之一。GM-CSF在

DC-CIK的制备方法(三)

2. (可选步骤)  肿瘤抗原的制备用于负载 DC 的肿瘤抗原可以是肿瘤特异性抗原肽 (Tumor-Specific  Antigens,  TSA)或肿瘤相关抗原 (Tumor-αssociated Antigens, TAA),也可以是肿瘤全细胞抗原。用 TSA

DC-CIK的制备方法(四)

4. DC 细胞的培养及鉴定4.1 步骤 3.2 中剩下的贴壁细胞 (主要是 CD14+的单核细胞),加入含重组人 GM-CSF500-1,000U/ml 和重组人 IL-4 500U/ml 的无血清培养液,37℃,5%CO2 培养箱中 培养,诱导单核细胞向 DC 细胞分化。4.2 每 3d 半量换

DC-CIK的制备方法(五)

【步骤简图】【推荐试剂】生产商产品名称产品编号产品规格使用浓度PeproTech重组人 GM-CSF (Animal Free)AF-300-0320ug/50ug/100ug/250ug/500ug1mg50-100ng/mlPeproTech重组人 IFN-g (Animal Free)AF-3

CIK/DC-CIK及其在细胞治疗上的应用(二)

【细胞制备】 1.外周血单个核细胞的采集 1.1 用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞50-100mL; 1.2 淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC); 1.3 无血清培养液洗涤2次,获得纯度在90%以上的PBMC。 2.CIK细胞的培养及鉴定 2.1 将PBMC按1

CIK/DC-CIK及其在细胞治疗上的应用(四)

 一、高效CIK  高效CIK(High-efficiency cytokine-induced killer),即高效细胞因子诱导的杀伤细胞,是治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染的细胞免疫治疗方法之一。其技术是从患者自体外周血(20~100ml)中分离单个核细胞,经过体外刺激