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肽质量指纹图谱—MALDITOF法鉴定蛋白质实验

实验材料测序级猪胰蛋白酶试剂、试剂盒碳酸氢铵碳酸氢铵缓冲液乙腈 碳酸氢铵缓冲液消化缓冲液仪器、耗材真空离心机烤箱实验步骤许多凝胶染色方法适用于后续的 MALDI-TOF 肽质量指纹图谱（PMF ) 分析。在第 14 章已经比较讨论了一些染色方法的性能和兼容性。3.1 胶内消化凝胶消化方法改编自 Jensen 等。对于凝胶处理和消化步骤，必须认真处理样品，尽量减少外源性角蛋白的污染（如头发、皮肤、羊毛衣服、气流、通风冷却等）（见注释 1)。1. 从二维聚丙烯酰胺凝胶挖蛋白质点( 1 ) 将 1 ml 枪头在离尖端 5 mm 处用刀片切除，做一个打孔器（切口直径 1~2 mm ) ( 见注释 2) 。( 2 ) 挖取凝胶点，并转移到离心管中。2. 清洗凝胶碎片( 1 ) 用 100 μl 碳酸氢铵缓冲液清洗（振荡 15 min) ，然后弃上清液。( 2 ) 用 100 μl 乙腈/碳酸氢铵缓冲液洗两次（振荡 15 min) ，然后弃......阅读全文