一、引物搜索
1.
打开Primer premier5.0软件,调入人瘦素(leptin)基因序列:点击“file” “open” “ DNA
sequence”;或者直接点击 “file” “new” “DNA
sequence”,弹出一对话框如下图,然后将序列人瘦素(leptin) 基因复制在空白框。
2. 序列文件显示如图,点击“Primer”;
3.
进一步点击“search” 按钮,出现“search criteria”窗口,有多种参数可以调整。搜索目的(Seach
For)有三种选项,PCR引物(PCR Primers),测序引物(Sequencing Primers),杂交探针(Hybridization
Probes)。搜索类型(Search Type)可选择分别或同时查找上、下游引物(Sense/Anti-sense
Primer,或Both),或者成对查找(Pairs),或者分别以适合上、下游引物为主(Compatible with
Sense/Anti-sense Primer)。另外还可改变选择区域(Search Ranges),引物长度(Primer
Length),选择方式(Search Mode),参数选择(Search
Parameters)等等。使用者可根据自己的需要设定各项参数。我们将Product Size设置300-350,其他参数使用默认值。
然后点击“OK” ,随之出现的Search Progress窗口中显示Search Completed时,再点击“OK”。
4、这时搜索结果以表格的形式出现,有三种显示方式,上游引物(Sense),下游引物(Anti-sense),成对显示(Pairs)。默认显示为成对方式,并按优劣次序(Rating)排列,满分为100,即各指标基本都能达标。
|