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细菌Argonaute蛋白生成和加载DNA引导链的分子机制

近期,《分子细胞》(Molecular Cell)杂志在线发表了中国科学院生物物理研究所王艳丽课题组及其合作者关于细菌Argonaute(Ago)蛋白独立生成和加载DNA引导链的最新研究成果,题为Autonomous Generation and Loading of DNA Guides by Bacterial Argonaute。 真核生物的Ago蛋白是RNA干扰通路的重要组分,它们利用小的RNA引导链靶向互补配对的RNA分子。RNA引导链的成熟和加载是通过不同的酶来完成的一系列催化反应。Ago蛋白也存在于原核生物中,它们参与抵抗外源入侵的DNA。与真核Ago蛋白利用RNA引导链靶向RNA分子不同,大量研究表明原核Ago蛋白利用DNA引导链靶向DNA分子。但是小干扰DNA(small interfering DNA, siDNA)引导链如何产生并加载到原核Ago蛋白的分子机制依然有待研究。 嗜热菌(Thermust......阅读全文

RNA:全世界都在看

  2011年夏天,一项持续3年的肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)研究终于完成。研究小组将重点集中在了一种引发家族性ALS的突变上――仅仅是9号染色体上的3个基因。   一直以来,研究人员通过使用各种新的排序技术和超大计算能力,进行了详细全面的基因分析,但未能发现任何有关连的突变。   而美国国

RNA甲基化研究深度剖析(一)

一、听说最近 RNA甲基化很火,它是何方神圣?1、高分文章频现 说起近来的科研热点,RNA甲基化修饰的相关研究可以说是当前整个生命科学领域最热门的方向之一,亮点文章频出,着实让人有些目不暇接。RNA甲基化的研究近3月发表的文章影响因子为10分以上的,就有高达 17 篇。

补骨脂素介导的光交联反应研究RNA与蛋白质分子间的作...

补骨脂素介导的光交联反应研究RNA与蛋白质分子间的作用实验实验材料 蛋白酶K试剂、试剂盒 变性胶电泳缓冲液非变性胶电泳缓冲液结合缓冲液水解缓冲液丙烯酰胺储存液RNA 洗脱缓冲液四甲基乙二胺过硫酸铵AMV 反转录酶及反应缓冲液磷酸钠8-羟基补骨脂素13-二碘丙烷碳酸钾丙酮石油醚乙酸乙酯硫酸钠硅胶三氟乙

2019中国生命科学领域CNS盘点:曹雪涛 颜宁 施一公上榜

  截至2019年12月23日,中国学者在Cell,Nature及Science在线发表了107篇文章(2019年的Cell ,Nature 及Science 已经全部更新),iNature团队对于这些文章做了系统的总结:  按杂志来划分:Cell 发表了31篇,Nature 发表了44篇,Scie

补骨脂素介导光交联反应研究RNA与蛋白质分子间的作用

            实验材料 蛋白酶K 试剂、试剂盒 变性胶电泳缓冲液 非变

RNA编辑:肿瘤和遗传疾病治疗的新选择

  2018年,美国FDA和欧洲EMA批准了来自RNA药物制造两大巨头Ionis Pharmaceuticals公司的反义寡核苷酸疗法药物Tegesedi(Inotersen)和Alnylam Pharmaceuticals公司的siRNA疗法药物Onpattro(Patisiran),用于治疗遗传

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

环状RNA研究深度剖析(二)

目标circRNA的机制研究 a RIP-qPCR:挑选功能最为明显的1个circRNA做RIP-qPCR实验,检测circRNA是否与AGO2蛋白结合。(AGO2是circRNA发挥海绵作用的指示蛋白) b RNA pull down:对上述circRNA进行RNA pull down实验,拉

凝胶迁移实验(EMSA)

            实验方法原理 一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的

2017年7月Cell期刊不得不看的亮点研究

  7月份即将结束了,7月份Cell期刊又有哪些亮点研究值得学习呢?小编对此进行了整理,与各位分享。  1.Cell:中科院生物物理所王艳丽/章新政课题组从结构上揭示Cas13a切割RNA机制  doi:10.1016/j.cell.2017.06.050  作为一种VI-A型CRISPR-Cas系

昨日明星LncRNA搭上m6A后逆袭为今天新星

  m6A RNA甲基化是当前在LncRNA,环状RNA等非编码RNA之后最为火热的科研明星,到底有多火?摆出数据告诉你!   2019年才过去一半还不到,已发表文章数就已占去年的7成。RNA甲基化领域,不仅文章数量多,高分文章也有许多。据统计,仅2019年上半年就发表了多篇Nature,Cell

殷平教授Nature子刊解析植物RNA编辑的分子机制

  早在1989年研究人员就在植物中发现了RNA编辑的现象。2005年,第一个参与RNA编辑的蛋白因子被鉴定出来,发现它是一个PLS-type的PPR蛋白。近期来自华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室的研究人员报道了RNA编辑关键因子MORF蛋白可以和PLS-type PPR蛋白相互作用形成复报道

Cell Reports | 郭采薇等揭示RNA剪接在阿尔茨海默症中的作用

  pre-mRNA剪接过程是基因表达调控的重要步骤,对于形成极具多样性的神经细胞转录组尤为关键。因此,RNA 剪接失调能够引起包括脊髓性肌肉萎缩症和肌萎缩性脊髓侧索硬化症等多种神经疾病【1,2】。2013年,美国Emory大学的Seyfried教授课题组发现RNA剪接失调可能也是引起阿尔兹海默症的

清华大学王宏伟研究组Cell发表首发性成果

  RNA干扰(RNAi, RNA interference)是敲低一个基因表达的最为常用的一种手段。内源性引起RNA干扰的小RNA主要是微小RNA (miRNA)。 到目前为止,人体内已经发现多达1800种微小RNA,越来越多的文献报道认为很多肿瘤的发生发展、转移等行为与微小RNA的异常表达密切相

清华大学《Cell》文章:解决多个技术难题,终发首发性成果

  清华大学生命学院再次发表了一最新结构生物学成果:首次报道了人源核酸内切酶Dicer蛋白的全长高分辨率结构,同时还报道了人源核酸内切酶Dicer蛋白结合一种小RNA前体pre-let-7底物的两种不同结构状态。  这一研究成果公布在Cell杂志上,文章通讯作者为清华大学生命学院、清华-北大生命科学

同时检测各类癌症当中RNA甲基化相关酶&RNA甲基化水平(下)

  又到了一周云序生物课堂开讲时间!你,准备好了吗?   上一期文章当中,云序通过引用这样一张表格给大家传递了一个重要信息:表中的METLL3、METTL14、NSun2、FTO、ALKBH5、YTHDF2均是RNA甲基化重要的酶,而且这些酶在不同疾病当中意义有所不同,例如METTL3在AML、B

快速检测各类癌症当中RNA甲基化相关酶&RNA甲基化水平(下)

  又到了一周云序生物课堂开讲时间!你,准备好了吗?   上一期文章当中,云序通过引用这样一张表格给大家传递了一个重要信息:表中的METLL3、METTL14、NSun2、FTO、ALKBH5、YTHDF2均是RNA甲基化重要的酶,而且这些酶在不同疾病当中意义有所不同,例如METTL3在AML、B

酵母三杂交系统检测和分析RNA-蛋白相互作用实验

酵母三杂交系统(yeast three-hybrid system)可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中,RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录,可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方

酵母三杂交系统检测和分析RNA-蛋白相互作用实验

实验方法原理 酵母三杂交系统(yeast three-hybrid system)可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中,RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录,可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。试剂、试剂盒 YPD 和 SD 培养基鲑

酵母三杂交系统检测和分析RNA-蛋白相互作用

一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内,得到包含 RNA 质粒的细胞,再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库(杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性,与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白

RIP 技术--研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具

  microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。   miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA

RIP 技术--研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具

  microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。   miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA

我国科学家开发出一种新型RNA编辑系统

  使用工程核酸酶的基因组编辑技术,比如锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)和CRISPR系统中的Cas蛋白已被用于操纵许多有机体的基因组。最近,科学家们已将胞苷脱氨酶或腺苷脱氨酶与CRISPR-Cas9融合在一起,构建出可编程的DNA碱基编辑器,从而为校正致病性突变提供新

正粘病毒化学组成及其功能(一)

流感病毒由68%~70%的蛋白质、1%~2%的核糖核酸(RNA)、20%~25%脂质和5%~8%的糖组成。病毒蛋白质含有5种多肽,即血凝素、神经氨酸酶、基质蛋白、核蛋白和多聚酶。  (1) 正粘病毒基因组组成 〖HT5SS〗流感病毒的基因组是由8个分节段的单链、负股RNA组成,

基因技术专题-2

RNAi技术RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应

光活化的核苷酸类似物介导的RNA-蛋白的交联实验

光化学交联技术是研究核搪核蛋内复合物中 RNA 与蛋白的相互作用的有效手段。 其基本原理是未经任何化学修饰的 RNA -蛋白天然复合物在短波长紫外线(254 nm ) 照射时,RNA 中的核苷酸和蛋白质中的氨基酸会产生光化学反应,转变为活性状态,进而形成分子间共价交联。本实验来源「RNA 实验指导手

2019年,大牛们都在研究什么?—m6A文章盘点

  19年悄悄的已经将近过半,但RNA甲基化研究马不停歇。单单过去一个半月的时间里高分文章就有十多篇,Nature,Cell子刊均有相关文章发表;造血干细胞分化,癌细胞上皮间质转化,树突细胞活化,心肌细胞肥厚,内源性免疫应答调控都有它的身影。这里小编给大家列举展示几篇最新的m6A RNA甲基化研究成

2019年,大牛们都在研究什么?—m6A文章盘点

  19年悄悄的已经将近过半,但RNA甲基化研究马不停歇。单单过去一个半月的时间里高分文章就有十多篇,Nature,Cell子刊均有相关文章发表;造血干细胞分化,癌细胞上皮间质转化,树突细胞活化,心肌细胞肥厚,内源性免疫应答调控都有它的身影。这里小编给大家列举展示几篇最新的m6A RNA甲基化研究成

探索RNA与蛋白的相互作用,你需要这两种检测

  从DNA到蛋白质,这是一个相当复杂的过程。转录DNA的代码,这只是万里长征的第一步。随后,大量蛋白质编辑RNA,带领它从细胞核到细胞质,控制其稳定性,并指导其翻译。  据印第安纳大学的副教授Sarath Chandra Janga介绍,数百个RNA结合蛋白(RBP)参与了这个过程。Janga正在

天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验

细胞中,蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外运,翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段,RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞