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免疫金标记检测方法标准操作程序

【目的】 保证免疫金标技术检验准确性 【本SOP适用范围】 免疫金标技术 【原理】 氯化金分子在还原剂作用下聚合形成金颗粒,颗粒与颗粒之间因静电作用而相互排斥,使其保持一个比较稳定的胶体状态,故称作胶体金。利用胶体金颗粒的高电子密度及其表面能结合生物大分子(如抗体、SPA、植物血凝素和刀豆蛋白A等)以 及具有一定颜色等特性,可用光镜和电镜对细胞内抗原进行定位、定性的研究。 【方法学分类】 1. 班点金免疫渗滤试验 固相膜免疫测定中液体在微孔膜中穿过流出呈穿流形式,为斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay,DIGFA),亦有称免疫金溶胶斑点法、滴金免疫测定法等。试验单位为三层反应盒,第一层为过滤器(滤纸层),第二层为反应膜(NC膜或MC膜)上点加有特异性抗原或抗体,第三层为吸水垫料,有称此渗滤装置为滴金反应板。 以双抗体夹心法测dsDNA为例:试验中将标本加在反应盒上......阅读全文

组织切片的免疫金标记

实验方法原理 利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。实验材料 组织样品试剂、试剂盒 免疫金标记物仪器、耗材 培养箱显微镜实验步骤 1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,

组织切片的免疫金标记

实验方法原理利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。实验材料组织样品试剂、试剂盒免疫金标记物仪器、耗材培养箱显微镜实验步骤1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片

免疫金标记技术原理

免疫金标记技术原理:胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能,蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面,无共价键形成,标记后大分子物质活性不发生改变。金颗粒具有高电子密度的特性。金标蛋白在相应的配体处大量聚集时,在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红

免疫电镜胶体金标记法

第四节 免疫电镜胶体金标记法  金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,

免疫电镜胶体金标记法(简称金标法)

1、 包埋后染色 (超薄切片的金标记法)(1)超薄切片厚50~70nm左右,载于200~300网孔的镍网上;(2)滴1%的H2O2液1滴于蜡板上,将网的载片面轻浮于液滴上10min至1h;(3)双蒸水洗3次,每次10分钟。第1、2次洗法如(2),浮于液面上,第3次以盛双蒸水的注射器沿镍网面冲洗,水流

免疫电镜胶体金标记法-1

金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标

免疫电镜胶体金标记法-2

(4)胶体金与蛋白A的结合和纯化,依上法测得所需的比例超过10%,即每30ml胶体中加入2mg蛋白A,5min后,加入0.3ml PEG作为稳定剂,然后以15000r/min离心45min(不同方法制备的金离心速度不同),略带红色的松散的复合物沉淀即为PAg复合物。小心弃去上清液,加入PBS冲洗

免疫金标记检测方法标准操作程序

【目的】保证免疫金标技术检验准确性【本SOP 适用范围】免疫金标技术【该SOP 变动程序】本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。【原理】氯化金分子在还原剂作用下聚合形成金颗粒,颗粒与颗粒之间因静电作用而相互排斥,使其保持一个比较稳定的胶

免疫电镜胶体金标记法操作大全

金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金

免疫金标记检测方法标准操作程序

  【目的】  保证免疫金标技术检验准确性  【本SOP适用范围】  免疫金标技术  【原理】  氯化金分子在还原剂作用下聚合形成金颗粒,颗粒与颗粒之间因静电作用而相互排斥,使其保持一个比较稳定的胶体状态,故称作胶体金。利用胶体金颗粒的高电子密度及其表面能结合生物大分子(如抗体、SPA、植物血凝素和