糖基化与免疫
蛋白糖基化是真核生物常见的蛋白质翻译后修饰过程，合成后的或正在合成的蛋白质在糖基转移酶的作用下，将活化的单糖加到肽链上。根据糖与肽链中氨基酸的连接方式不同，可将糖基化修饰分为三种形式：N-糖苷(N-glycan)、O-糖苷(O-gly-can)、糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinos-itol，GPI)。蛋白质经糖基化修饰后产生数千种具有独特生物活性糖蛋白，参与到机体生命活动的各个领域中。其中，蛋白糖基化与机体的免疫反应息息相关，如人类的ABO(H)血型系统就是由于人红细胞表面H抗原的糖基化方式不同而形成的，H抗原上添加GalNAc残基则转化成A抗原，添加半乳糖残基则转化成B抗原，而未经修饰的H抗原就是O型血红细胞表面抗原。几乎所有参与天然免疫和应答免疫中的免疫分子，如免疫球蛋白、细胞因子、补体、黏附分子和主要组织相容性复合物分子均属于糖蛋白。蛋白糖基化影响免疫分子的结构和功能，从而影响机体对抗原......阅读全文
糖基化与免疫
蛋白糖基化是真核生物常见的蛋白质翻译后修饰过程，合成后的或正在合成的蛋白质在糖基转移酶的作用下，将活化的单糖加到肽链上。根据糖与肽链中氨基酸的连接方式不同，可将糖基化修饰分为三种形式：N-糖苷(N-glycan)、O-糖苷(O-gly-can)、糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphat
蛋白质糖基化分类
根据糖苷链类型，蛋白质糖基化可以分为四类，即以丝氨酸、苏氨酸、羟赖氨酸和羟脯氨酸的羟基为连接点，形成-O-糖苷键型。以天冬酰胺的酰胺基、N一末端氨基酸的 α - 氨基以及赖氨酸或精氨酸的ω - 氨基为连接点，形成-N-糖苷键型;以天冬氨酸或谷氨酸的游离羧基为连接点，形成脂糖苷键型以及以半胱氨酸为连接
细胞培养条件对蛋白质糖基化的影响
糖基化可能会影响蛋白质的半衰期、免疫原性、结合活性和稳定性。蛋白糖基化是一个复杂的过程，包括碳水化合物部分的连接，以及可能通过蛋白质结构中的天冬酰胺（N-连接）或丝氨酸/苏氨酸（O-连接）氨基酸连接的位置。在哺乳动物细胞培养过程中，使用不同的细胞系培养可能会在可能发生的糖基化类型上产生重大差异。糖基
蛋白质糖基化的检测实验——化学脱糖基化
实验材料蛋白样品试剂、试剂盒TFMS苯甲醚仪器、耗材玻璃器皿实验步骤1. 在冰上预冷干净、干燥的玻璃器皿。用带有 Teflon-丝帽的玻璃试管混合试剂。2. 打开或混合试剂前，在冰上预冷所有的溶液。从冰冷的原液中，TFMS:苯甲醚 ( Sigma) 以 2:1 (v/v) 的比例混合。缓慢的向试管内
蛋白质糖基化的检测实验——酶脱糖基化
实验方法原理用酶或化学脱糖基化、通过选择性标记或通过凝集素亲和层析法是检测蛋白糖基化常用方法。实验材料蛋白样品试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液蛋白溶液β-巯基乙醇NP-40 溶液仪器、耗材SDS-PAGE玻璃器皿植物凝集素柱实验步骤一、用 PNGaseF（N-多糖酶）处理1. 以 0.1 mol/L 磷酸钠
蛋白质糖基化的检测
试剂、试剂盒 磷酸钠缓冲液蛋白溶液β-巯基乙醇NP-40 溶液仪器、耗材 SDS-PAGE实验步骤 一、用 PNGaseF（N-多糖酶）处理1. 以 0.1 mol/L 磷酸钠（或 Tris-HCl，而不用柠檬酸）缓冲液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高达 2 mg/ml 的蛋白溶液，并
蛋白质糖基化的过程
N-连接的糖链合成起始于内质网，完成于高尔基体。在内质网形成的糖蛋白具有相似的糖链，由Cis面进入高尔基体后，在各膜囊之间的转运过程中，发生了一系列有序的加工和修饰，原来糖链中的大部分甘露糖被切除，但又被多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子，形成了结构各异的寡糖链。糖蛋白的空间结构决定了它可以和
糖基化对膜蛋白功能的影响
糖基化对膜蛋白功能影响常常是很重要的，对特异的生物学功能起介导作用：1，对细胞具有保护、稳定、组织及屏障等多方面作用；2，可作为外源性受体的特异性配体，某些糖链可作为各种病毒、细菌及寄生物的特异受体；3，糖链也可作为内源性受体的特异性配体，参与介导清除、周转及胞内穿行作用；4，糖链在受精过程中起着重
活细胞中去糖基化的方法
活细胞中去糖基化的方法：1，衣霉素在体内阻断N－连糖； 2，将内切神经氨酸酶注入发育中的视网膜提示了多唾液酸的特异性作用－－将高纯度酶注入细胞内+恰当的对照；3，将糖基修饰酶的cDNA在活细胞或动物中表达； 4，在培养环境中加入凝集素或抗体把特异的聚糖封闭掉。
活细胞中去糖基化的方法
1、衣霉素在体内阻断N－连糖； 2、将内切神经氨酸酶注入发育中的视网膜提示了多唾液酸的特异性作用－－将高纯度酶注入细胞内+恰当的对照； 3、将糖基修饰酶的cDNA在活细胞或动物中表达； 4、在培养环境中加入凝集素或抗体把特异的聚糖封闭掉。