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除了 PCR 和 Southern 杂交可以检测病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA。实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取缓冲液乙酸钠乙醇PCR 扩增缓冲液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培养基完全 MEM-10／BrdU 培养基筛选试剂4 dNTP 混合物MgCl2仪器、耗材24 孔组织培养板杯状超声仪实验步骤实验试剂准备详见「其他」。1. 吸出汇片生长单层细胞的培养基。1.1 对于 XGPRT 筛选，用 BS-C-1 细胞。1.2 对于 TK 筛选，用 HuTK-143B 细胞。2. 用 37℃ 的 PBS 或胰酶/EDTA 洗细胞 1 次，以除去剩余血清。3. 用刚好覆盖单层细胞、37℃ 的胰酶/EDTA（对于 ......阅读全文
实验方法原理本方案用DNA点迹杂交检测噬斑以鉴定重组病毒。像点迹杂交一样，将感染细胞裂解物印迹在硝酸纤维素膜上（可参考「痘苗DNA检测实验」中「斑点杂交法」）。用可以识别外源基因表达蛋白的抗体与膜一起孵育，用125I 标记的蛋白 A 检测结合的抗体，还可应用化学发光检测系统，如 Amersham E
四、微生物学诊断 （一)病毒分离 采取病人唾液，脊髓液及口腔、宫颈、阴道分泌液，或角膜结膜刮取物等接种易感细胞中培养1～2天，出现细胞肿用胀，变圆，相互融合等病变，可作初步诊断。然后用免疫荧光法（IFA)，酶联免疫吸附试验（ELISA)进行鉴定，确诊HSV。必要时进行分型。 （二