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细菌中制备基因组DNA实验——小量制备

真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。实验材料细菌试剂、试剂盒TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB仪器、耗材离心机摇床实验步骤1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态,取1.5 ml 的培养物离心2 min。2. 沉淀物加入567 ul 的TE缓冲液,用吸管反复吹打使之重悬。3. 加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K,混匀,于37℃温育1 h。 4. 加入100 ul&nb......阅读全文

研究蛋白质与DNA相互作用的主要方法

  一、引言   在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mRNA转录与修饰以及病毒的感染等都涉及到DNA与蛋白质之间的相互作用的问题。   重组DNA技术的发展,人们已分离到了许多重要的基因。现在的关键问题是需要揭示环境因子及发育信号究竟是如何控制基因的转录活性。为此需要:   a、鉴定分析

研究蛋白质与DNA相互作用的主要方法

一、引言在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mRNA转录与修饰以及病毒的感染等都涉及到DNA与蛋白质之间的相互作用的问题。重组DNA技术的发展,人们已分离到了许多重要的基因。现在的关键问题是需要揭示环境因子及发育信号究竟是如何控制基因的转录活性。为此需要:a、鉴定分析参与基因表达调控的DNA元件

蛋白质组学实验技术大全

每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新,蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多,但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前,先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mR

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

微阵列中期分裂相染色体的比较基因组杂交(CGH) 实验

实验方法原理 实验材料 高分子质量基因组DNA EcoR I 或 Dpn II试剂、试剂盒 SSCcDNA阵列dNTP 混合液 dCTP 酵母 tRNADNA 聚合酶 I仪器、耗材 Qiaquick PCR 纯化试剂盒 BioPrime 标记试剂盒Micrcon 30 滤器杂交炉Maxiprep D

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

凝胶迁移实验(EMSA)

实验方法原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列

中英合作聚焦:优良实验室规范保证生物实验数据质量

优良实验室规范(GLP)是国际公认的药品安全评价标准之一,我国GLP标准虽发展迅速,但与世界一流水平还存在一定的差距。来自中国国家药物安全评价检测中心的6名技术人员日前完成了在英国为期两周的学习培训,这一中英科技合作项目将有助于提升我国药物非临床安全性评价管理水平。国家药物安全评价监测中心主任李波研

PCR扩增产物鉴定与纯化

实验概要通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,并对获得的产物进行割胶纯化回收,为接下来的DNA重组和转化实验提供外源DNA片段。实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验) 本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purifi

放射性同位素的应用-同位素示踪法(三)

(二)正式实验阶段 1.选择放射性同位素的剂量   同位素必须能经得起稀释,使其最后样品的放射性不能低于本底,一般来说放射性同位素在生物体内不是完全均匀地被稀释,可能在某些器官、组织、细胞、某些分子中有选择性地蓄积,蓄积的部分放射性就会很强,在这种情况下,应以相关部位对示踪剂的蓄积率来考虑示踪剂用量

PCR扩增产物的克隆技术-2

T-载体的构建一:仪器:同质粒DNA提取实验、酶切实验及RT-PCR实验二:试剂:SmaI、其余同质粒DNA提取实验、酶切实验及RT-PCR实验三:操作:1:提纯载体DNA2:将1ug提纯的PGEMDNA用SmaI1ul进行全酶切(为了切割彻底、甚至能破坏酶切位点周围碱基序列而防止自连发生,酶可过量

质粒DNA的抽提与纯化

目的 : 采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术原理 : 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完

DNA酶切及凝胶电泳实验原理、仪器试剂和操作步骤

【实验原理】DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此他们能以相同的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下,DNA 分子的迁移速度取决于分子

PCR扩增产物鉴定与纯化

  实验原理  琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验)  本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统,结合DN

PCR扩增产物鉴定与纯化

  实验原理  琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验)  本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统,结合DN

生化分析仪器助力DNA检测

生化分析仪器助力DNA检测    原始亲子鉴定方法缺少科学依据    外貌对比    由于遗传的原因,父子、母子、兄弟姐妹之间的长相、肤色等一般都会有某些相似的地方,通过外貌长相的对比来确定亲子关系恐怕是zui原始的方法,但这样方法只是一种猜测、判断,作为一种参考。    滴骨验亲    滴骨验亲法

体外DNA重组技术-1

在体外将两个或多个来源相同或不相同的DNA片段连接成新的重组DNA分子,再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。DNA重组技术的基本程序包括:(1)获得外源DNA:外源DNA是进行DNA重组的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶链式反应(PCR)或逆转录-DNA聚合酶链

电泳实验的危害与防护注意事项

  1.DNA电泳与溴化乙锭   “DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所

电泳操作过程中有哪些注意事项

  1.DNA电泳与溴化乙锭  “DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在

凝胶迁移实验(EMSA)——凝胶迁移

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

微阵列中期分裂相染色体的比较基因组杂交(CGH) 实验

染色体 CGH 的独特优点在于它的全基因筛查功能,与检测单一靶 DNA 剂量改变的低通量方法,如 Southern 分析、PCR 和荧光原位杂交(FISH) 相比,速度显著提高且省力。目前染色体 CGH 是一种比较完善的分子细胞遗传学方法,但是它的两个缺陷限制其作为一种综合性筛查工具的应用。来源:《

生化分析仪器助力DNA检测

 生化分析仪器助力DNA检测    原始亲子鉴定方法缺少科学依据    外貌对比    由于遗传的原因,父子、母子、兄弟姐妹之间的长相、肤色等一般都会有某些相似的地方,通过外貌长相的对比来确定亲子关系恐怕是zui原始的方法,但这样方法只是一种猜测、判断,作为一种参考。    滴骨验亲   

电泳实验的危害与防护注意事项

1.DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生

生化分析仪器助力DNA检测

  原始亲子鉴定方法缺少科学依据    外貌对比    由于遗传的原因,父子、母子、兄弟姐妹之间的长相、肤色等一般都会有某些相似的地方,通过外貌长相的对比来确定亲子关系恐怕是zui原始的方法,但这样方法只是一种猜测、判断,作为一种参考。    滴骨验亲    滴骨验亲法就是将生者的血液滴在死人的骨骸

体外DNA重组技术-5

(三)DNA酶切片段的回收【实验方法与步骤】1.冻融法:(1)在UV灯下,用手术刀片将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下,-70℃冷冻至少 15min,然后在65℃水浴中使胶融化;(2)加入等倍体积TE-饱和酚,剧烈振荡30秒钟,然后-70℃冷冻 15min;(3)室温融化后,12,000rpm离心5mi

PCR扩增产物鉴定与纯化实验原理及实验过程

实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验)本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统,结合DNA制

电泳实验的危害与防护注意事项

1.DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生实验

物理所等在单个DNA分子的凝聚动力学研究中获得新成果

  无论是在病毒还是在细胞中,DNA皆以紧密压缩的结构存在。比如,在真核细胞中,DNA缠绕在组蛋白周围形成核小体,并进一步凝聚成大家熟知的染色体结构。在哺乳动物精子中,DNA凝聚成更致密的面包圈状(toroid)结构。了解DNA这些紧密排列的结构,并分析它们形成的动力学过程,对认识D

实验室离心机可以用来做亲子鉴定吗

在医疗行业,离心机的使用率越来越广,可以涉及到很多层面,但是大家知道离心机可以用来做亲子鉴定吗?用离心机做亲子鉴定准确度怎样?下面由国内一线离心机品牌代理商-上海赵迪生物科技的技术人员为你介绍如何用医用离心机做亲子鉴定:首先要抽取1-3毫升静脉血:先采集血样,就开始提取里边的DNA了。血样采集和抽血

双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分

【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法:针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行设计了两对引物,采用双重PCR同时扩增上述基因,用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质,在50cm×100μm i.d.涂壁毛细管中,于一1