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PCR法检测乙肝病毒(HBV)

PCR法检测乙肝病毒(HBV)主要用于对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作。实验方法原理多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃ 低温退火,引物与模板互补结合。在72℃条件下,结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下,利用反应体系中的4种dNTP为原料,按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的DNA链。所扩增的DNA可作为下一轮扩增反应的模板。重复上述循环过程,经过20~30个周期后,特异的目的DNA可扩增百万倍以上。 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。实验材料血清样品试剂、试剂盒HBV-PCR反应液HBV-DNA裂解液阳性模板溴化乙锭仪器、耗材PCR扩增仪电泳仪......阅读全文

实时荧光定量PCR技术在分子生物学和医学研究等领域的...

  定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied biosystems公司推出,它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该

什么是PCR阴性?

举乙肝的例子来说:通过酶免的方法查乙肝两对半和通过荧光定量PCR的方法学查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身体不舒服或者正常体检(比如入职体检),他去看医生,临床医生怀疑他得了肝炎(肝炎有很多种比如病毒性肝炎,也就是病毒倾入他体内后由于人体的三道防线没能把病毒消灭掉,导致病毒在

ELISA法与PCR法检测乙型肝炎病毒标志物的实验研究

[摘  要] 目的:探讨ELISA法和PCR法联合检测对乙型肝炎诊断的临床价值。方法:采用ELISA法与PCR法同时检测421份血清标本。结果:用ELISA法测定HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)时,HBVDNA阳性率高达90.6%;用ELISA法测定HBsAg(+)、抗H

荧光定量PCR应用——病毒篇

诺如病毒诺如病毒(Norovirus,NVs)属于杯状病毒科诺如病毒属,是引起非细菌性急性胃肠炎的主要病原体,世界50%以上的胃肠炎暴发均由它引起,可在医院、学校、餐馆等人群密集地爆发急性胃肠炎。根据病毒RNA 聚合酶和衣壳蛋白核苷酸序列的差异,诺如病毒分为5个基因型,其中GI、GII 型诺如病

感染性疾病基因诊断进展

感染性疾病有病原微生物引起,致病的病原微生物主要有病毒、细菌、衣原体、支原体和螺旋体等。这些病原体的传统检测方法通常采用形态学检查,体外培养和免疫学试验。但对某些难以培养的病原体,抗原抗体检测不能判断体内病原体 DNA 或 RNAde 复制情况,或存在检测灵敏度低等问题。自聚合酶链反应( PCR )

时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA)

时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术,它用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素螯合物的发光特点,用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏

专家视角|“乙肝转阴”意味着什么?

  慢性乙肝的根本治疗措施是抗病毒,目前推荐的一线抗病毒药物有恩替卡韦、替诺福韦和聚乙二醇干扰素,其他可选择的药物还有替比夫定、阿德福韦和拉米夫定。在评价抗病毒疗效时,需要进行乙肝病毒学检测,检测内容包括乙肝五项指标(俗称两对半)和病毒脱氧核糖核酸(即HBV DNA)。  乙肝五项指标检测结果常常用

IVD行业之分子诊断产业链分析

  上游是原料供应商,包括诊断酶、引物、反转酶、探针等生物制品,高纯度氯化钠、无水乙醇等精细化学品,以及提取介质材料;  中游是分子诊断试剂和仪器制造商,包括罗氏、赛默飞、达安基因、科华生物、之江生物、湖南圣湘等;  下游是使用仪器或试剂的用户,包括医院、 第三方医学实验室、血站、体检中心等。  从

乙型肝炎的实验室诊断及质量控制

2005年12月我国第一部《慢性乙型肝炎防治指南》颁布,2006年1月卫生部颁布了《2006-2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划》。其目的在于科学、规范和有效开展我国乙型肝炎防治工作。卫生部计划在未来3~4年内逐步建立全国乙型肝炎实验室检测网络,制定《全国乙型肝炎实验室检测工作技术规范》,加强实验

肝炎病毒标志物的检验,你知道多少?

  各类病毒型肝炎传播途径(不是所有类型肝炎均通过吃饭传播):甲型、戊型病毒型肝炎主要通过消化道传播;乙型病毒型肝炎主要通过输血、性接触、母婴传播;丙型病毒型肝炎主要通过输血、性接触、纹身、吸毒注射器、母婴传播;丁肝主要是血液传播。  肝炎病毒标志物知多少?  甲型肝炎  甲型肝炎:(HAV-IgM

乙型肝炎病毒感染标志物的检测现状和思考

 全球慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者约4亿,亚太地区是全球HBV的高发区[1]。在我国临床各类(约103种)肝病中,病毒性肝病占一半以上;病毒性肝病中,乙型肝炎占80%以上。一般人群HBsAg携带率为7.18%。据此推算,我国现有的慢性HBV感染者约9 300万例,其中慢性乙型肝炎患者约

肝炎病毒标志物的检验,你知道多少?

肝炎病毒学标志物检查:是用来判断是否感染肝炎病毒,常见嗜肝病毒学标志物包括甲肝抗体、乙肝两对半、乙肝病毒DNA,丙肝抗体、丙肝病毒RNA,丁肝抗体,戊肝病毒抗体。各类病毒型肝炎传播途径(不是所有类型肝炎均通过吃饭传播):甲型、戊型病毒型肝炎主要通过消化道传播;乙型病毒型肝炎主要通过输血、性接触、母婴

血清HBV标志物、前S1抗原与HBVDNA检测结果的相关性

【摘要】  目的  探讨HBV血清标志物前S1抗原(HBVPreS1-Ag)与HBVDNA的相关性。方法  用ELISA法对乙肝患者分别进行五项HBV血清标志物,前S1抗原检测,同时采用PCR法检测HBVDNA的含量。结果 &nb

乳汁乙肝病毒标志物检测的临床意义

母婴乙肝病毒的传播途径,为分娩时经产道时被感染,或出生后与母亲接触被感染。了解乙肝表面抗原(HBsAg)阳性乳汁中乙肝两对半(HBV)及HBV-DNA含量,有利于指导母乳喂养。现将70例血清HBsAg阳性产妇的乳汁进行HBV和HBV-DNA检测情况报道如下。   &nb

“大三阳”“小三阳”是怎么来的?(内附乙肝五项解析)

乙型肝炎病毒是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科,该科病毒以RNA中间体为模板经反转录合成DNA链。在电镜下观察,HBV感染者血清中存在三种形式的颗粒:Dane颗粒、小球形颗粒、丝状或核状颗粒。一般情况下,血清中小球形颗粒最多而Dane颗粒最少。常用检测方法:在我国有50%~70%的人受过感染,由

HBV变异对乙肝病毒检测的影响

 [摘 要] 目的:了解无锡地区HBV前C/C基因变异情况,探讨基因变异对乙肝病毒标志物(HBVM)及HBV DNA定量的影响。方法: HBVM用时间分辨荧光定量试剂检测;HBV DNA定量PCR以德国Roche Lightcycler 荧光定量扩增仪检测;HBV DNA前C/C测序使用①

单项乙肝核心抗体「阳性」是怎么回事?

在谈乙肝色变的中国,慢性乙肝病毒携带者达到了1.2亿人,慢性乙肝患者有3000万人,乙肝作为我国最为严重的传染病之一,开展它的相关检测非常有必要。HBV感染检测常用的血清学标志物包括表面抗原(HBsAg)、表面抗体(HBsAb)、e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)。H

时间分辨荧光免疫分析技术在食品安全领域的应用

随着分析方法的飞速发展,无论是食品中有毒有害物质,还是环境中痕量元素的检测,或者生物体内功能因子的分析,都迫切需要一种灵敏度高、快速准确、性能稳定的痕量分析方法。时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay,简称为TRFIA)是20世纪80 年代中期发展起

乙型肝炎病毒前S2抗原/抗体检测及其临床意义

乙型肝炎病毒包膜上的前S1、前S2蛋白及表面抗原为HBV DNA的S区前S1、前S2及S基因的编码产物。pre S蛋白参与HBV的组装、分泌和侵入肝细胞的机制,而机体对pre S的免疫应答成为清除肝细胞内HBV以及阻止病毒侵入肝细胞提供重要的防御作用。本文讨论pre S2 Ag/Ab检测与乙型肝炎病

乙肝检测项目结果解析大全

生物化学检查血清ALT与AST血清ALT(丙氨酸氨基转移酶)和AST(门冬氨酸氨基转移酶)水平一般可反映肝细胞损伤程度,最为常用。若大于正常上界10 倍见于急性病毒性肝炎、中毒性(药物性)肝坏死和缺血性肝炎。但转氨酶水平的高低不能完全代表肝功能的好坏, 更确切地说转氨酶水平与肝功状态不成平行关系。A

乙肝病毒血清标记物与血清HBV-DNA的关系

【摘要】  目的: 探讨不同乙肝感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行对比分析。方法: 采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物, 荧光定量PCR (FQPCR) 检测HBV-DNA, 比较二者之间的关系。结果: HBsAg、 HBeAg、 HBcAb阳性组和HBsAg、 HBeAg

PCR检测输血传播病毒DNA的临床应用

在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、急性重型肝炎及肝硬化病例中,有部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。继1995年发现庚型肝炎病毒(HGV)后,1997年日本学者Nishizawa等[1]报道了应用代表性分析法发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒,暂时称为输血传

基因芯片技术及其研究现状和应用前景

  摘要:基因芯片技术是90年代中期以来快速发展起来的分子生物学高新技术,是各学科交叉综合的崭新科学。其原理是采用光导原位合成或显微印刷等方法,将大量DNA探针片段有序地固化予支持物的表面,然后与已标记的生物样品中DNA分子杂交,再对杂交信号进行检测分析,就可得出该样品的遗传信息。基因芯片技术目前国

基因芯片的制备、应用与前景

 摘要:基因芯片技术是90年代中期以来快速发展起来的分子生物学高新技术,是各学科交叉综合的崭新科学。其原理是采用光导原位合成或显微印刷等方法,将大量DNA探针片段有序地固化予支持物的表面,然后与已标记的生物样品中DNA分子杂交,再对杂交信号进行检测分析,就可得出该样品的遗传信息。基因芯片技术目前国内

基因芯片技术及其研究现状和应用前景

  生物芯片技术是随着"人类基因组计划"(human genome project, HGP)的进展而发展起来的,它是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一,它融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术,具有重大的基础研究价值,又具有

基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法(1)

应用聚合酶链反应(PCR)技术测定临床标本中的病原体核酸成分,是一种高度敏感,且最为直接的检测手段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质,可干扰PCR反应,故在做PCR反应前必须进行核酸提取。经典的核酸提取方法通常是加去污剂(SDS等)裂解细胞,经蛋白酶处理、有机溶剂提取及乙醇沉淀等步骤。由于样本的

带您了解肝炎的病原学检测

作者:周宗   审核:吴洪巧2016年7月28日是第六个世界肝炎日,7月28日是已故诺贝尔奖得主巴鲁克·布隆伯格的诞辰日,为纪念这位乙肝病毒发现者,世界卫生组织将每年的世界肝炎日变更为7月28日。肝炎一直是全球性重要公共卫生问题之一。世卫组织最新数据显示,世界上有4亿人感染乙型和丙型肝炎,

体外诊断IVD行业主要仪器和试剂品牌汇总

体外诊断,即IVD(In Vitro Diagnosis),是指在人体之外,通过对人体样本(血液、体液、组织等)进行检测而获取临床诊断信息,进而判断疾病或机体功能的产品和服务。体外诊断产品主要由诊断设备(仪器)和诊断试剂构成。根据我国国家食品药品监督管理局(SFDA)的《医疗器械分类目录》标准,体外

QPCR的基础知识问答

问:什么是QPCR?答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系?答:聚合酶链式反应(Polymerase C

QPCR的基础知识

问:什么是QPCR?答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系?答:聚合酶链式反应(Polymerase C