固相化pH梯度双向凝胶电泳实验8
方案8 第二向：蛋白质的 SDS-PAGE 实验实验方法原理在第一向 IEF 和 IPG 胶条平衡之后，需进行第二向 SDS-PAGE。SDS-PAGE 是基于蛋白质分子量的不同而将其分离的。这种分离系统可从多家供应商处获得，在许多蛋白质化学实验室中也普遍使用。这里介绍放置 IPG 胶条的方法以及第二向凝胶电泳条件。实验材料已聚焦 IPG 胶条试剂、试剂盒琼脂糖密封溶液蛋白质分子量标准5XSDS 电泳缓冲液仪器、耗材滤纸钳子和多用尺子温度控制仪电源SDS-PAGE 凝胶垂直电泳设备实验步骤1.在 100°C 加热琼脂糖封闭溶液使之熔化。每块凝胶约需 1ml 溶液。完全熔化琼脂糖要花 1Omin，最好在即将平衡 IPG 胶条时进行（方案 8)。琼脂糖熔化后，将其冷却至 40~50°C。2.在第二向凝胶表面的平板之间用钳子定位平衡后的 IPG 凝胶条，保证塑料支持条靠着其中一块玻璃平板。在平板之间用一把薄的软塑料尺子推动 IPG 胶......阅读全文
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验
方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验 实验方法原理 可用乙醇沉淀人类脑脊液以浓缩其中的蛋白质和除去盐分，否则这些物质会干扰第一向 IEF。 实验材料 人类脑脊液 试剂、试剂盒 乙醇NaOH增溶溶液β-巯基乙醇 仪器、耗材 离心管冷冻离心机超声
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验
实验方法原理 肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。 实验材料 鼠肝 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇（DTT)抽提溶液
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验 方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备实验 方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验 方案5 第一向：蛋白质的等电聚焦电泳实验
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验3
方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 实验方法原理 细菌裂解液含大量核酸，在进行双向凝胶电泳之前，需先对核酸进行处理。可通过超声波处理包含脲和 CHAPS 的细菌提取液。当脲存在时，核酸酶（Benzonase) 是有活性的，但是其活性依赖于 Mg2+。核酸酶处理后加入 ED
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验6
方案6 垂直 SDS 平板凝胶的制备：均一凝胶的灌制实验 实验方法原理 蛋白质通过 IEF 进行分离之后，可进行第二向电泳，即 SDS-PAGE。本方案详细介绍了灌制均一 SDS-PAGE 凝胶的方法。均一凝胶（具完全相同的%T和％c) 对特殊分子量范围的蛋白质有较好的分离效果，因
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验8
方案8 第二向：蛋白质的 SDS-PAGE 实验 实验方法原理 在第一向 IEF 和 IPG 胶条平衡之后，需进行第二向 SDS-PAGE。SDS-PAGE 是基于蛋白质分子量的不同而将其分离的。这种分离系统可从多家供应商处获得，在许多蛋白质化学实验室中也普遍使用。这里介绍放置 IPG
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验10
方案11 银氨染色 实验方法原理 银染聚丙烯酰胺凝胶首先由 Switzer 等引进（1979)，已迅速成为一种最普遍使用的高灵敏度蛋白质染色方法。因存在背景高、重复性不好及银镜等问题，多年来对此方法的改进较多。目前，Rabilloud 等（1994b）在文献中发现 100 多种不同
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验11
方案11 与质谱兼容的银染法实验 实验方法原理 在方案 11 中介绍的银氨方法是用于检测在 SDS-PAGE 凝胶上蛋白质的最灵敏的方法之一。但是，这种方法和其他标准银染方法都不适合于质谱分析，而质谱已成为鉴定双向凝胶上蛋白质的最好方法。因为在凝胶中被质谱分析的蛋白质不能被修饰，许
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验12
方案12 用 SYPRO Ruby 进行荧光染色 实验材料 含蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 固定液SYPRO Ruby 染料 仪器、耗材 聚丙烯塑料平皿往复式或定轨式摇床UV或蓝光透射仪 实验步骤 1.将胶放入聚丙烯塑料平皿中，其中应有足够的固
固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验13
方案13 用 GelCode 磷蛋白染色试剂盒对磷蛋白进行染色实验 实验材料 含蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 乙酸钼酸铵溶液含硝酸的钼酸铵溶液甲基绿溶液NaOH磺基水杨酸溶液含氯化钙的磺基水杨酸溶液 仪器、耗材 带有盖子的玻璃或塑料平皿烘箱往复式或定轨式摇