将基因转移至未分化ES细胞实验—将ES克隆挑取到96孔板
仪器、耗材ES 生长培养基neoR-MEF 滋养板96 孔 U-底板无菌吸头微量移液器实验步骤1. 准备下列试剂和材料：ES 生长培养基，含 300 μg/ml G418 和青霉素/链霉素96 孔平底 neoR-MEF 滋养板96 孔 U-底板细而圆的无菌吸头微量移液器（10~100 μl）8 道移液器无菌多道移液器容器2. 在有 neoR-MEF 滋养层的平底 96 孔板的每孔中加 150 μl 含 G418 和青霉素/链霉素的 ES 培养基。置温箱待用。3. 在生物安全柜内的倒置显微镜下挑取克隆。4. 用多道微量移液器在 96 孔 U 底板每孔加 25 μl 胰酶溶液。5. PBS 冲洗含 ES 克隆的 100 mm 培养板两次。加 PBS，恰好没过培养板的底。6. 在显微镜下，用装有无菌超细吸头的微量移液器挑取 ES 克隆。破坏 ES 克隆周围的 MEF 细胞，将克隆吸入吸头，体积不要超过 20 μl。7. 克隆放入含胰酶......阅读全文
将基因转移至未分化ES细胞实验—将ES克隆挑取到96孔板
仪器、耗材ES 生长培养基neoR-MEF 滋养板96 孔 U-底板无菌吸头微量移液器实验步骤1. 准备下列试剂和材料：ES 生长培养基，含 300 μg/ml G418 和青霉素/链霉素96 孔平底 neoR-MEF 滋养板96 孔 U-底板细而圆的无菌吸头微量移液器（10~100 μl）8 道移
将基因转移至未分化ES细胞实验
ES细胞电穿孔 将ES克隆挑取到96孔板 分配96孔板上细胞用于冻存和体外分化 融化96孔板上的细胞
将基因转移至未分化ES细胞实验
分配96孔板上细胞用于冻存和体外分化 试剂、试剂盒 DMSOPBS胰酶溶液冻存液 仪器、耗材 平底 96 孔板移液器ES 生长培养基ES 分化培养基 实验步骤 1. 准备下列试剂和材料： DMSO（组织培养级） 平底 96 孔板 多道移液器 无菌多道
将基因转移至未分化ES细胞实验
ES细胞电穿孔 将ES克隆挑取到96孔板 分配96孔板上细胞用于冻存和体外分化 融化96孔板上的细胞 实验材料
将基因转移至未分化ES细胞实验——ES细胞电穿孔
实验材料线性化转移基因 DNA未分化 ES 细胞仪器、耗材电穿孔仪和电穿孔杯neoR-MEF 滋养板ES 生长培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：线性化转移基因 DNA（1 mg/ml，溶于无菌 TE）未分化 ES 细胞Bio-Rad 电穿孔仪和电穿孔杯100 mm neoR-MEF 滋养板ES
将基因转移至未分化ES细胞实验—融化96孔板上的细胞
仪器、耗材ES 细胞冻存板MEF 滋养板塑料盒ES 生长培养基微量移液器实验步骤1. 准备下列试剂和材料：96 孔 ES 细胞冻存板24 孔 MEF 滋养板塑料盒ES 生长培养基微量移液器2. 在塑料盒内装入无菌水，置温箱中预热。3. 从 -80℃ 冰箱中取出 96 孔 ES 细胞板。4. 欲融化的
ES细胞分化培养实验
实验材料单一胚胎样体仪器、耗材组织培养板巴斯德吸管玻璃盖玻片无菌镊子ES 分化培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：培养悬液中的单一胚胎样体6 孔组织培养板带棉塞巴斯德吸管明胶包被的玻璃盖玻片无菌镊子ES 分化培养基2. 准备明胶包被的玻璃盖玻片3. 用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明
ES细胞分化培养实验
实验材料 未分化 ES 细胞试剂、试剂盒 PBS仪器、耗材 ES 分化培养基移液器实验步骤 1. 准备下列试剂和材料：未分化 ES 细胞无 Ca2+ 和 Mg2+ PBSES 分化培养基8 道微量移液器无菌多道移液器容器2. 收获未分化 ES 细胞。3. 在 100 mm 组织培养皿中加 10 ml
ES细胞分化培养实验
悬滴培养 培养皿ES细胞集落 附着ES细胞分化培养 实验材料 未分化 ES 细胞
ES细胞分化培养实验——培养皿ES细胞集落
实验材料ES 细胞单一胚胎样体仪器、耗材细菌培养皿ES 分化培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：悬滴培养的 ES 细胞单一胚胎样体100 mm 细菌培养皿ES 分化培养基2. 在 100 mm 细菌培养皿中加 10 ml 预热的分化培养基。3. 从温箱中取出培养 2 天的悬滴培养物。小心翻转培养
ES细胞分化培养实验——悬滴培养
实验材料未分化 ES 细胞试剂、试剂盒PBS仪器、耗材ES 分化培养基移液器实验步骤1. 准备下列试剂和材料：未分化 ES 细胞无 Ca2+ 和 Mg2+ PBSES 分化培养基8 道微量移液器无菌多道移液器容器2. 收获未分化 ES 细胞。3. 在 100 mm 组织培养皿中加 10 ml PBS
ES细胞打靶技术介绍
你听说过喀迈拉兽（chimera）吗？没错，就是古希腊神话故事中一只会喷火的怪兽，这种怪兽拥有狮头、羊身、蛇尾，像是由几种动物拼成的。或许你知道喀迈拉兽，但你是否知道在生物遗传学中也有一种名为喀迈拉的动物吗？那这神奇的怪兽与我们生物领域中的ES细胞基因打靶到底有什么关系呢？本期话题，咱们就一起来聊聊
小鼠多能ES细胞的增殖实验
试剂、试剂盒 PBS胰酶溶液 仪器、耗材 MEF 滋养板巴斯德吸管ES 生长培养基 实验步骤 1. 准备下列试剂和材料： 60 mm MEF 滋养板（接种不能超过 7 天） 带棉塞无菌巴斯德吸管 无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS ES 生长培养基 胰酶
小鼠多能ES细胞的增殖实验
试剂、试剂盒 PBS 胰酶溶液 仪器、耗材 MEF 滋养板 巴斯德吸管 ES 生
小鼠多能ES细胞的增殖实验
试剂、试剂盒 PBS 胰酶溶液 仪器、耗材 MEF 滋养板 巴斯德吸管 ES 生
大鼠ES细胞的实验相关介绍
IannacconePM等从大鼠PVG近交系分离克隆大鼠ES细胞系-RESC-01，该细胞系对SSEA-1和AKP呈阳性，在大鼠胎儿成纤维细胞饲养层上能很好的增殖，在体内环境能分化形成多种细胞类型。RESC-01细胞系在体外悬浮培养时形成的胚体出现有节律的收缩运动，将其注入囊胚并移植假孕母鼠能生
Electroporation of ES cells
Cells are routinely passaged two days prior to electroporating. Usually one 10 cm plate at approximately 80% confluency will provide enough cells for
KARYOTYPING ES CELLS
An actively growing culture of cells is required, i e 2 - 3 d ES cell culture. The total number of cells needs to be between 106 - 107 cells. N B Re
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Freezing Human ES Cells
Collagenase cells for approximately 7 minutes at 37 °C (until edges of colonies are curling up). With a 5 ml pipet, gently pipet and scrape colon
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Thawing Human ES cells
Remove Human ES cells from liquid nitrogen storage tank. Fill out a freeze/thaw form.Thaw cryovial by gently swirling in waterbath until only a small
胚胎干细胞的生物特性
特征 ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，细胞核大，有一个或几个核仁，胞核中多为常染色质，胞质胞浆少，结构简单。体外培养时，细胞排列紧密，呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色，ES细胞呈棕红色，而周围的成纤维细胞呈淡黄色。细胞克隆和周围存在明显界限，形成的克隆细胞彼此界限不清，细胞表面有折光较
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——General notes on ES cell culture
hES media has a two week shelf life. hES cells should be cultured in 4, 6, 24, 48, 96 well plates. Growing cells in flasks is not recommended be
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols—Splitting Human ES cells onMatrige
based on splitting onto on plateWarm collagenase media to 37°C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following amount of co
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Splitting Human ES cells on MEFs
based on splitting onto one plateWarm collagenase IV split media to 37 °C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following a
ES细胞的主要用途
（1）可用于研究哺乳动物个体发生和发育的规律，也是在体外条件下研究细胞分化的理想材料。（2）ES细胞通过诱导分化可产生新的组织细胞，用于治疗人类的组织损伤和某些顽症。（3）可通过ES细胞的体外诱导分化，定向培育人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和移植后免疫排斥的问题。
Counting ES cell Chromosomes
(original reference: "tissue culture made easy" by Christian LaMantia from the Magnuson lab) 1) Plate cells onto gelatinized plates (35 or 60 mm) wi
Routine Culturing of ES Cells
Cell are normally passaged every 2-3 days, this is important to avoid differentiation.Signs of differentiation are:-i) colonies are surrounded by flat
ES Cell Culture and Manipulation
MediaHigh glucose DMEM (-pyruvate, -glutamine)20% Heat-inactivated Fetal calf serum (can vary by cell type, be sure!!)1X l-glutamine1X Penicillin/stre
FACS Analysis of ES Cells
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surf
牛ES细胞的分离培养相关介绍
Saito等在加有LIF的培养基中对牛ICM进行培养，分离得到牛ES细胞并进行传代。Sims等使用与一般ES细胞分离完全不同的低密度培养法，使用BRL(buffaloratliver)条件培养基并添加亚硒酸钠、胰岛素、运铁蛋白和50mL/L胎牛血清，培养6d～10d，得到15个ES细胞系，将其作