组织切片的免疫荧光双标记实验

间接免疫荧光显微镜检术可使两种或更多种抗原可以在同一切片,同一时间内被显示出来,可用于(1)细胞标记;(2)免疫荧光筛选干细胞。实验方法原理通过使用激发波长及发射波长均不相间的荧光染料而进行的。通常限用两种荧光染料,最常见的是罗丹明(绿光激发,发射红光)和荧光素(蓝光激发、发绿光)联合使用。实验材料组织样品试剂、试剂盒第一抗体IgG仪器、耗材玻片加湿盒实验步骤1. 当进行双标记实验时,最重要的准则是:第一抗体应为不同类型,从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体,这一要求就有可能达不到,当使用单抗时,不同型的抗体如IgG和IgM,可被第二抗体确切区分。但不同亚类(IgG 1和IgG 2)的抗体通常不能被二抗确切区分。2. 实验操作过程和“组织切片的免疫荧光标记实验”相同,例外的是所加第一抗体和第二抗体由两种第一抗体及两种第二抗体的混合成分所替换。 3. &......阅读全文

组织切片的免疫荧光双标记实验

实验材料 组织样品试剂、试剂盒 第一抗体IgG实验步骤 1.  当进行双标记实验时,最重要的准则是:第一抗体应为不同类型,从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体,这一要求就有可能达不到,当使用单抗时,不同型的抗体如IgG和IgM,可被第二抗体确切区分

组织切片的免疫荧光双标记实验

间接免疫荧光显微镜检术可使两种或更多种抗原可以在同一切片,同一时间内被显示出来,可用于(1)细胞标记;(2)免疫荧光筛选干细胞。实验方法原理通过使用激发波长及发射波长均不相间的荧光染料而进行的。通常限用两种荧光染料,最常见的是罗丹明(绿光激发,发射红光)和荧光素(蓝光激发、发绿光)联合使用。实验材料

组织切片的免疫荧光标记实验

实验方法原理免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。实验材料组织样品试剂、试剂盒PB

组织切片的免疫荧光标记实验

实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS抗体仪器、耗材 玻片加湿盒实验步骤 1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。 3.  稀释的第

LSCM冷冻组织切片的免疫荧光标记

冷冻组织切片的免疫荧光标记 将冷冻组织切片从 -80℃ 冰箱中取出,室温放置 10 min,待切片回温并干燥,浸于 PBS 中 10 min洗去OCT,可以无需 Triton 处理,即可进行免疫荧光抗体标记,操作步骤与培养细胞反应方法相同。反应在避光湿盒中进行,反应结束时用无荧光封固剂封片,4℃保存

免疫组织化学法实验——组织切片的免疫荧光标记

实验材料组织样本冰冻切片置于载玻片上试剂、试剂盒PBS第一抗体5〜10μg mL第二抗体特异性针对第一抗体的抗体突光染料结合物封片介质(如Gelvatol)仪器、耗材塑料玻片盒或加湿盒实验步骤1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片,交叉放入玻片盒(每边约6片

组织切片的免疫金标记

实验方法原理 利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。实验材料 组织样品试剂、试剂盒 免疫金标记物仪器、耗材 培养箱显微镜实验步骤 1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,

组织切片的免疫金标记

实验方法原理利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。实验材料组织样品试剂、试剂盒免疫金标记物仪器、耗材培养箱显微镜实验步骤1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片

组织免疫荧光是用石蜡切片还是冰冻切片

二者应该都是可以的,具体要看自身的实验条件哪个操作更方便以及抗体的性质。看你的实验要求,冰冻片要求较高(低温环境,液氮,冰冻切片机,OCT包埋剂等等),石蜡片的制作就比较简单,试剂也较便宜。另外看你购买的抗体适用于哪种片子免疫组化的话,一般大都使用石蜡切片。免疫荧光染色的话,都可以的,冰冻切片比较容

LSCM组织切片的细胞核标记

组织切片的细胞核标记目前仍然采用 DAPI(4,6-联脒-2-苯基吲哚,ex 359 nm / em 461 nm),其特点是专一性强、灵敏度高、稳定性好、毒性小,且可被405nm激光器有效地激发,获取明亮的核标记荧光图像。PI(碘化丙啶 ex 536nm / em 617nm)也可以用于核标记,因

冰冻切片免疫荧光实验步骤

1.组织用4%多聚甲醛固定6-8小时,转至20%蔗糖溶液至组织沉底。2.冰冻切片8-10μm,推荐瑞沃德冷冻切片机,温度稳定,切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片,-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。3.1xPBS洗3次,每次3-5分钟。4.用2%BSA室温或3

冰冻切片免疫荧光实验步骤

1.组织用4%多聚甲醛固定6-8小时,转至20%蔗糖溶液至组织沉底。2.冰冻切片8-10μm,推荐瑞沃德冷冻切片机,温度稳定,切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片,-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。3.1xPBS洗3次,每次3-5分钟。4.用2%BSA室温或3

组织切片的免疫过氧化物酶标记实验

实验材料组织样品试剂、试剂盒PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材离心机加湿盒培养箱实验步骤1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片

组织切片的免疫过氧化物酶标记实验

实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材 离心机加湿盒培养箱实验步骤 1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿

组织病理实验_冰冻切片

组织病理实验广泛应用于生物学、解剖学、病理学、肿瘤学、法医学、临床诊断学等实验方法原理冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间。同时,由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等

实验技术:组织切片的制备

【目的】组织标本必须首先被制成组织切片,再经过染色处理,然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术,也称为H & E染色。苏木素是碱性染色,细胞核被染成深紫或兰色,常用作核染色;伊红是酸性染色,细胞浆染呈红色,常用作胞浆染色。【材料】1.试剂和溶液(

冷冻组织切片的制作实验

实验试剂液氮,干冰,1%明胶,4%多聚甲醛,PBS,含1%NP-40的PBS,3%BSA/PBS稀释抗体,辣根过氧化物酶标记的二抗,DAB/金属盐试剂,3%过氧化氢,0.3%(W/V)氯化镍贮存液,Harris苏木精,乙醇实验设备载玻片,Whatman 1#滤纸,低倍光学显微镜实验材料未受损伤的组织

光镜下双/多重免疫标记实验——免疫荧光双重标记TRITCFITC

双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理,在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物,或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物,达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分(定性、定位、定撤),分析不同抗原成分相互间功能的增消关系,操作遵循的原则与要求同单

石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色

石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色曾经作过脑组织的TUNEL,也指导过别人做心肌的TUNEL,谈谈我的意见:蛋白酶K37度30min,好像有点偏长,我是10min。你是NBT/BICP显色的话,这说明你用的是AP系统,而不是HRP这样的话就不是用3%H2O2来去除内源性酶的了,(H2O2是

光镜下双/多重免疫标记实验——双重免疫荧光染色

实验步骤1. 古兹菲德-雅各氏病(CJD)病人的尸解脑组织,4% 中性甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,厚 5 μm(贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏合剂)。2. 常规脱蜡,水化。3. 抗原修复(柠槺酸盐缓冲液 pH 6.0 中,高压灭菌器加热 100℃,20 min)及 96% 甲酸孵育 2 m

冰冻组织制备及切片实验

实验材料 冰冻组织试剂、试剂盒 异戊烷OCT多聚-L-赖氨酸仪器、耗材 滤纸切片机加热槽冰冻机细毛刷实验步骤 1.  将一个50 ml 硬质玻璃烧杯浸入盛有液氮的烧瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰冻,烧杯中加CryoKwik(或异戊烷)。2.  在滤纸条一端以铅笔注明标签,用镊子将样品放于另一端。 3. 

冰冻组织制备及切片实验

实验材料冰冻组织试剂、试剂盒异戊烷OCT多聚-L-赖氨酸仪器、耗材滤纸切片机加热槽冰冻机细毛刷实验步骤1.  将一个50 ml 硬质玻璃烧杯浸入盛有液氮的烧瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰冻,烧杯中加CryoKwik(或异戊烷)。2.  在滤纸条一端以铅笔注明标签,用镊子将样品放于另一端。 3.  保证C

组织病理实验_石蜡切片法

实验方法原理石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。实验

冷冻组织及切片的准备实验

            实验材料 新鲜的组织 试剂、试剂盒 丙酮 蒸馏水 干冰 磷酸盐缓冲液(PBS

冷冻组织及切片的准备实验

实验材料 新鲜的组织试剂、试剂盒 丙酮 蒸馏水 干冰磷酸盐缓冲液(PBS) Tek OCT 组织复合物仪器、耗材 封闭容器烧杯 恒冷装置 解剖工具 平盘组织模子载玻片刀片实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂丙酮蒸馏水干冰磷酸盐缓冲液(PBS)Tek OCT 组织复合物(Sakura Finet

冷冻组织及切片的准备实验

为了获得较好的结果,应当用新鲜的组织,因为在-80°C 中保存超过 24 h 的样品,其RNA 的产量和完整性将大打折扣。尽管有几个实验小组曾经报道用 LCM 技术从石蜡包埋的组织中获得了没有降解的 RNA, 但作者还是推荐使用冷冻的组织块。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼

​-免疫组织化学法实验——悬浮细胞的免疫荧光标记

实验材料细胞生长于含培养液的15 mL Falcon管中试剂、试剂盒PBSPFA固定液仪器、耗材多聚L-赖氨酸包被的载玻片实验步骤1) 细胞在冰浴中冷却,然后用台式离心机在4℃以800 g离心5 min (用于淋巴细胞)。吸去培养液并以4℃的PBS重悬细胞。离心机转速依细胞类型进行调整,但必须低转速

冰冻切片免疫荧光

实验原理抗原抗体结合主要试剂固定液、梯度蔗糖、磷酸盐缓冲液、封闭液、一抗、荧光标记的二抗、DAPI、荧光抗淬灭封片剂主要设备冰冻切片机、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜实验材料组织切片实验步骤切片提取新鲜组织置于4%多聚甲醛中固定;2.梯度蔗糖脱水:10%-20%-30%;3.冰冻包埋剂包埋并切片,切片

冰冻切片免疫荧光

实验概要冰冻切片免疫荧光实验原理抗原抗体结合主要试剂固定液、梯度蔗糖、磷酸盐缓冲液、封闭液、一抗、荧光标记的二抗、DAPI、荧光抗淬灭封片剂主要设备冰冻切片机、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜实验材料组织切片实验步骤切片1.提取新鲜组织置于4%多聚甲醛中固定;2.梯度蔗糖脱水:10%-20%-30%;3

TUNEL分析实验——组织切片的-TUNEL-染色

实验材料组织试剂、试剂盒甲醛NaOHPBS二甲苯乙醇蛋白酶 KTris-HCl 溶液仪器、耗材Parafilm 膜实验步骤1. 取下组织,立即用新制备的 4% 甲醛固定,室温过夜。用多聚甲醛制备 4% 的甲醛溶液,在 100 ml 水中加 8 g 多聚甲醛,在通风橱中加热至 50~60℃,加几滴 1