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实验步骤基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 检 测以下步骤可以釆用淋巴或非淋巴细胞、原代细胞或培养的细胞系、活化或非活化的细胞。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)待检测的细胞 冰预冷的 PBS含蛋白酶抑制剂的 I X 细 胞 裂 解 液（新鲜配置并于冰上保存）含蛋白酶抑制剂的 5 X 裂 解 液（细胞活化用，新鲜配制并于冰上保存）考马斯蛋白检测试剂（Pierce) 或类似试剂多克隆或单克隆的兔抗 src-相 关 T P K 抗 血 清（U B I 、 Oncogene Science 或 SantaCruz Biotechnology)对 照 血 清（Sigma) : 正 常 的 兔 血 清（如使用多克隆抗血清），或 同 型 IgG (如使用单克隆抗血清）Pansorbin ( 1 0 % 福 尔 马 林 固 定 的 金 色 葡 萄 球 菌 ； Calbiochem) ， 或 蛋 白 A......阅读全文
实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯
实验步骤一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，蛋白
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验 实验步骤
二、用 于 鉴 定 P T M 的富 集 技 术2.1 磷酸化丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的可逆磷酸化也许是研究最为深人的 PT M 。蛋白质磷酸化信号网络介导细胞对与不同的应激因子、生长因子、细胞因子以及细胞间相互作用作出响应。憐酸化还影响多种细胞进程，如增殖、凋亡 、迁移 、转录和蛋白质翻译（W
实验步骤基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗体的制备材料B S A -琼 脂 糖 亲 和 基 质（Sigma) 填 装（如辅助方案 2 ) 于柱床体积IOml的层析柱磷酸化酪氨酸亲和基质层析柱（IOml 柱床体积；见辅助方案3)磷酸肽-B S A 偶联物免疫家兔的粗制血清PB S /叠氮钠.•含有0
三、蛋白质的硝化修饰酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸侧链的硝化与亚硝化作用构成了蛋白质硝化PT M 的主要部分。这些加成反应由发育、氧化应激及衰老过程中产生的活性氮介导。活性氮的增加是由一氧化氮和活性氧的过度反应或调控紊乱造成的（Yeo et al.，2008)。活性氮和活性氧能够靶向于D
三、蛋白质的硝化修饰酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸侧链的硝化与亚硝化作用构成了蛋白质硝化PT M 的主要部分。这些加成反应由发育、氧化应激及衰老过程中产生的活性氮介导。活性氮的增加是由一氧化氮和活性氧的过度反应或调控紊乱造成的（Yeo et al.，2008)。活性氮和活性氧能够靶向于DNA、脂