间接染色步骤(细胞表面染色)

实验概要间接标记需要两个孵育步骤,先与一抗再与合适的第二抗体孵育,二抗(不是一抗)结合了荧光染料(FITC、PE、Cy5 等)。请注意这是一个普遍的程序,您可以根据自己的使用情况进行调整。实验步骤1. 收集并洗涤细胞,然后确定细胞总数。细胞通常在聚苯乙烯的圆底 12 x 75 mm2 Falcon 管中染色。其实,细胞可以在任何适合离心机用的容器中染色,例如试管、EP 管、96 孔圆底酶标板。一般来说,细胞应该充分离心,以便去除上清时减少细胞损失;但也不能太剧烈,不然细胞会很难重悬。离心后通常要检查细胞活性,应该在 95% 左右,不能小于 90%。2. 用冰冷 PBS(10% 胎牛血清和 1% 叠氮化钠)将细胞重悬成约 1-5 × 106 个细胞/ml。3. 每管中加入 100 μl 的细胞悬液。4. 加入 0.1-10 μg/ml 的第一抗体,如有必要可用 3% BSA/PBS 稀释。5......阅读全文

间接染色步骤(细胞表面染色)

实验概要间接标记需要两个孵育步骤,先与一抗再与合适的第二抗体孵育,二抗(不是一抗)结合了荧光染料(FITC、PE、Cy5 等)。请注意这是一个普遍的程序,您可以根据自己的使用情况进行调整。实验步骤1. 收集并洗涤细胞,然后确定细胞总数。细胞通常在聚苯乙烯的圆底 12 x 75 mm2 Falcon

免疫荧光染色(间接法)

1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体(如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色30min,37℃,缓冲盐水

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:间接法

一、原理与意义 免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——间接法,是一种荧光抗体染色法。该方法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原,敏感性较高,操作方法较易掌握,而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体(如麻疹)等的研究和检查,所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。 二、操作流程 (一)双层法

免疫荧光技术荧光抗体染色方法介绍间接法

间接法是根据抗球蛋白试验的原理,用荧光素标记抗球蛋白抗体(简称标记抗抗体)的方法(图)。间接法的检测过程分为两步:第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中在37℃下保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体;第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、

免疫金组织化学染色实验——IGS-间接法

实验方法原理免疫金染色(immunogold staining,IGS)法是由 Geoghegan 等(1978)首次应用金标探针检测 B 淋巴细胞表面抗原,将胶体金颗粒(大于 20 nm)标记在第二抗体或 SPA 分子上,制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后,用金标二抗或金标 SPA

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:直接免疫荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗,增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出,

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:直接免疫荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗,增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出,

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:直接免疫荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗,增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出,

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:直接免疫荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗,增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出,

间接免疫荧光和直接免疫荧光染色方法的异同

免疫荧光细胞化学方法的原理是根据抗原抗体反应的规律,把已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗原或抗体,然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。方法具体种类有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下,根据其形成复合物所发的荧光,来确定判断检测物的来源、性质和部位。 1、直接法:这是最早

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备

实验步骤 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm专用塑料试管中。2. 加入50μl特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育30min。3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。4. 离心(800~1000rpm,5min)弃上清液,用PBS洗涤细胞2次。5. 加入

间接凝集反应实验——间接血球凝集

实验方法原理间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面,此时红血球即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血球具有细菌的抗原性,与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的多糖物质浸出,去除类脂以免干扰红血球的吸附

间接凝集反应实验——间接凝集抑制

实验方法原理若使可溶性抗原与相应抗体先混合,充分作用后再加入有关的免疫微球,因抗体已被可溶性抗原结合,不再出现免疫微球的被动凝集现象,叫间接凝集抑制试验,临床化验检查中常用的免疫妊娠试验就是一种间接凝集抑制试验。实验材料孕妇尿试剂、试剂盒胶乳抗原仪器、耗材滴管实验步骤1.  用清洁滴管在反应板上滴加

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验             实验步骤 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置1

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验

实验步骤 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm专用塑料试管中。2. 加入50μl特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育30min。3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。4. 离心(800~1000r

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验

实验步骤1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm专用塑料试管中。2. 加入50μl特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育30min。3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。4. 离心(800~1000rpm,5min)弃上清液,用PBS洗涤细胞2次。5. 加入5

间接血凝试验

实验概要本文以鼻疽为例介绍了间接血凝试验。实验原理若将可溶性的鼻疽抗原吸附在比其体积大千万倍的红细胞表面上,使红细胞产生一种新的血清学性质,制成所谓的致敏红细胞,即可用以诊断鼻疽。只要与少量相应抗体相遇,红细胞通过抗原抗体反应,即可被动地结合在一起,呈现肉眼可见的凝集现象,阴性者红细胞由于自然沉积于

间接-ELISA法

实验概要Enzyme  linked immunosorbent  assay,ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上,进行免疫反应的定性和定量方法。1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van  Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测

间接-ELISA法

实验概要Enzyme  linked immunosorbent  assay,ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上,进行免疫反应的定性和定量方法。1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van  Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测

间接血凝试验

实验原理若将可溶性的鼻疽抗原吸附在比其体积大千万倍的红细胞表面上,使红细胞产生一种新的血清学性质,制成所谓的致敏红细胞,即可用以诊断鼻疽。只要与少量相应抗体相遇,红细胞通过抗原抗体反应,即可被动地结合在一起,呈现肉眼可见的凝集现象,阴性者红细胞由于自然沉积于孔底,则呈圆点状。这样可以明显地提高反应的

间接ELISA实验

实验概要需要偶联二抗的 ELISA 测定的一般程序。实验步骤1. 将抗原包被到微孔板    1) 将抗原在 PBS 或其它碳酸盐缓冲液中稀释至 20 μg/ml 的最终浓度。移取 50 μl 抗原稀释液到 PVC 微量滴定板的第一排微孔中,使该微量滴定板的微孔上包被抗原。按需要在微量滴定板上进行梯度

间接血凝试验

实验原理若将可溶性的鼻疽抗原吸附在比其体积大千万倍的红细胞表面上,使红细胞产生一种新的血清学性质,制成所谓的致敏红细胞,即可用以诊断鼻疽。只要与少量相应抗体相遇,红细胞通过抗原抗体反应,即可被动地结合在一起,呈现肉眼可见的凝集现象,阴性者红细胞由于自然沉积于孔底,则呈圆点状。这样可以明显地提高反应的

间接ELISA与间接竞争ELISA有什么区别

一般间接Elisa法用于检测抗体(比如免疫血清的效价)而间接竞争Elisa法用于检测小分子抗原

间接ELISA与间接竞争ELISA有什么区别

一般间接Elisa法用于检测抗体(比如免疫血清的效价)而间接竞争Elisa法用于检测小分子抗原

间接炭凝集试验

实验概要本文以马副伤寒性流产为例介绍了间接炭凝集试验(indirect carbonal agglutination test)的原理及操作流程。实验原理该血清反应是以炭粉颗粒为载体,将已知的马副伤寒性流产血清吸附在该载体表面上,形成抗体炭粉结合物,即为诊断马副伤寒性流产用的炭粉致敏血清。炭粉致敏血

间接胆红素的简介

  间接胆红素又称非结合胆红素,即不与葡萄糖醛酸结合的胆红素。由间接胆红素和直接胆红素组成总胆红素。血清间接胆红素升高,主要与各种溶血疾病有关。大量的红细胞破坏后,大量血红蛋白被转变成间接胆红素,超过了肝脏的处理能力,不能将其全部转变成直接胆红素,使血液中的间接胆红素升高。其浓度反映肝细胞的转化功能

间接免疫荧光

实验方法原理固定细胞,顺序加入一抗和二抗,通过 UV 光观察。实验材料细胞培养在盖玻片产生一抗种属的二抗猪血清或其他封闭剂D-PBSA试剂、试剂盒新鲜制备的固定剂用含10%的FBS培养液封固剂实验步骤1. 用 D-PBSA 洗涤长有细胞的盖玻片,置于合适的培养皿中。如 13 mm 盖玻片可用24 孔

间接免疫荧光

实验方法原理固定细胞,顺序加入一抗和二抗,通过 UV 光观察。实验材料细胞培养在盖玻片                                                                  产生一抗种属的二抗                                

间接炭凝集试验

实验概要本文以马副伤寒性流产为例介绍了间接炭凝集试验(indirect carbonal agglutination test)的原理及操作流程。实验原理该血清反应是以炭粉颗粒为载体,将已知的马副伤寒性流产血清吸附在该载体表面上,形成抗体炭粉结合物,即为诊断马副伤寒性流产用的炭粉致敏血清。炭粉致敏血

间接免疫荧光

中文名称间接免疫荧光英文名称indirect immunofluorescence定  义直接免疫荧光技术的改进。待检细胞首先用未标记的抗体处理,使之与特异的抗原形成复合物,然后再用抗抗体的荧光标记抗体着色,即可检测出特异抗原在细胞中的存在部位,具有荧光增强效应。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞