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简化抑制消减杂交(SSH)法寻找差异表达基因

无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官,或者是从正常的组织突变为肿瘤组织,都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因,因而也就成为一项热门的技术。 寻找差异表达的基因有不少方法,抑制消减杂交(SSH)是比较有效的一种方法。以Clontech的PCR-Select cDNA Subtraction Kit为例:将样品(tester)和对照(driver)的mRNA分别反转录并合成为双链cDNA后进行酶消化;样品(tester)分为两组,分别加上不同的adaptor1/2;再将两组样品(tester)分别与过量的对照(driver)杂交,两份杂交结果混合,加入过量的对照再进行第二轮杂交;补齐adaptor然后用PCR选择性扩增。由于过量的对照封闭了在样品中共同表达的基因,而在样品中特异表达的基因会被选择性地扩增出来,......阅读全文

简化抑制消减杂交(SSH)法--寻找差异表达基因

  无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官,或者是从正常的组织突变为肿瘤组织,都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因,因而也就成为一项热门的技术。    寻找差异表达的基因有不少方法,抑制消减杂交(SSH)是比较有效的一种方法。

寻找差异表达基因方法——简化SSH法

 无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官,或者是从正常的组织突变为肿瘤组织,都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因,因而也就成为一项热门的技术。    寻找差异表达的基因有不少方法,抑制消减杂交(SSH)是比较有效的一种方法

SSH抑制性消减杂交文库构建方法介绍

SSH是一项可以快速获取两个不同生物材料中差异表达基因的分子生物学技术,是快速筛选差异表达基因的有效方法,也是寻找新基因的重要手段。该技术尤其适合以genome尚不完全清晰的物种或者以特殊材料为研究对象的科研工作者。是基因芯片技术的有效补充。基本流程:通过差减文库构建,文库验证和筛选(逆向斑点杂交)

如何筛选和鉴定生物标本中差异表达的蛋白分子

目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法 (differentialdisplayRT PCR ,DDRT PCR)、消减杂交法 (subtractivehybridization ,SH )、基因芯片技术 (DNAchiptechnique)和基因表达的系统分析 (serialanaly

抑制性扣除杂交(SSH)-DNA实验基础

如果两处理间存在较大差异,以及某些基因在Tester中存在上调表达(up-regulated expression)时,用RAD方法则达不到预期目的。于是,Diatchenko. L等于1996年提出了一种可以有效克服基因上调表达所造成不利后果的克隆基因的新方法——抑制性扣除杂交(SSH)。

抑制消减杂交的概念和意义

抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH) 是建立在抑制PCR 与消运用杂交二级动力学原理,减杂交技术相结合的基础上的更简单快速的分离差异基因的方法。即丰度高的单链DNA 在退火时产生同源杂交的速度快于丰度低的单链DNA,使原来在丰度上有差别的

基因组印记

这是根据我写的一个PPT摘录的,希望能有朋友讨论这方面的问题。并拓宽这个领域,讨论epigenetics更广泛的问题。毕竟epigenetics是现在动物功能基因组研究的主流和一个重要方向。1. 印迹基因的概念及重要意义概念:基因组印迹是特指来源于亲本的等位基因进行不对称后成修饰后而导致的单等位基因

基因表达轮廓(gene expressed profile)技术-2

经过这轮RDA过程,Tester中的目的DNA将得到第一次富集。将第一轮产物更换新接头,进行第二轮RDA过程,目的DNA可得到进一步的富集。该技术假阳性很低。但仍不能解决个体mRNA在丰度上存在巨大差异的问题,当靶序列浓度较低时,其富集受抑制。3:抑制消减杂交(suppression subtrac

阻抑消减杂交的方法和应用介绍

中文名称阻抑消减杂交英文名称suppressive subtraction hybridization;SSH定  义将阻抑性聚合酶链反应与消减杂交相结合的实验方法,能有效地扩增低丰度的差异基因表达序列。一般是将目标互补DNA(cDNA)5′端分别加上两种人工接头,用过量的驱动DNA进行两次杂交,得

消减杂交实验

试剂、试剂盒 稀释缓冲液杂交缓冲储存液基三乙基溴化铵矿物油核酸和寡核苷酸 仪器、耗材 热循环仪 实验步骤 一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 稀释缓冲液(20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3,50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L ED