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蛋白质免疫印迹实验

蛋白质免疫印迹实验 实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。 (2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in,将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。 (3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上,然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上,如果是米用半干转的方式进行蛋白质转印,那么宜用三张滤纸。将玻璃板翻转 ,并且将其放置在海绵垫上,用一个小的刮铲,轻轻地将凝胶和滤纸从玻璃板上分开。然后将转印膜放置在凝胶之上,用一个圆筒状的物品,如铅笔或者玻璃棒放在膜上,轻轻地去除所有的气泡......阅读全文

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

免疫印迹与免疫检测实验——半干转移系统转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材半干燥转移装置滤纸实验步骤1.  制备样品,并在小型或标准尺寸的单向或双向凝胶上分离蛋白质。 2.  准备转印膜3.  拆卸凝胶夹层,除去积层胶。4.  组装转印夹层:Mylar聚酯薄膜屏蔽物3张以转移缓冲液饱和的滤纸已平衡的转印膜凝胶3张以转移缓冲液饱

蛋白质免疫印迹实验

蛋白质免疫印迹实验             实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张

蛋白质免疫印迹实验

实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in,将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上,然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上,如

蛋白质免疫印迹技术

实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置,在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定,常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF(聚偏乙烯氟化物)。膜是凝胶蛋白质的复制品,然后可以与抗体结合后进行染色。实验步骤1.   样品准备1)   抽

蛋白质免疫印迹实验

这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程,小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法,我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白:哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需

印迹转移电泳

生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southren创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southren印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为North

蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )——Western印迹法

实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSG 250考马斯亮蓝溶液NaClSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液封闭液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液显影液定影液抗体化学发光试剂仪器、耗材高压锅玻璃匀浆器高速离心机分光光度仪-20℃低温冰箱垂直板电泳转移装置恒温水浴摇床多用脱色摇床实验步骤一、操

蛋白质印迹实验——从SDS凝胶上转移蛋白质

蛋白质印迹(protein blotting ) 也称为电泳转移(electropheretic transfer),即把从电泳或层析分离的蛋白转移到固定基质上的过程。固定基质通常是一些纸或膜。最通常的蛋白质印迹是将从聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离的蛋白质分子转移到硝化纤维素膜上。本实验来源「蛋白质电泳实