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PEI沉淀法分级分离可溶性提取物实验

材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清,见实验 1,P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器(Fisher Scientific 15-338-55)硫酸铵 (AMS)试剂聚乙烯亚胺 (PEI)(10% 储液,pH7.9)缓冲液 A缓冲液 A+0.3mol/LNaCl缓冲液 A+0,9mol/LNaCl二硫苏糖醇 (DTT)(0.1moVL)(配方,见“试剤的配制” PP.I84~189)操作程序1) 将 0.75 ml10%PEI 液加入体积约为 24 ml 的可溶性提取物 (0.2%DOC 上清) 中, 使 PEI 终浓度为 0.3%。混合后,4°C 下静置 15 min。方案补充实验:加 PEI 前,取 6x50ul 的 0.2%DC 上清,用以确定沉淀σ32 和 RNA 聚合酶所需的 PEI 量(见 p.174)。加入 PEI 后......阅读全文

PEI 沉淀法分级分离可溶性提取物实验

材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清,见实验 1,P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器(Fisher Scientific 15-338-55)硫酸铵 (AMS)试剂聚乙烯亚胺 (PEI)(10% 储液,pH7

PEI 沉淀法分级分离可溶性提取物实验

试剂、试剂盒 提取液硫酸铵聚乙烯亚胺 缓冲液 A二硫苏糖醇仪器、耗材 Tissuc-TearorTM 匀浆器实验步骤 材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清,见实验 1,P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器(Fisher Scientific 15-338-5

PEI 沉淀法分级分离可溶性提取物实验

试剂、试剂盒提取液硫酸铵聚乙烯亚胺缓冲液 A二硫苏糖醇仪器、耗材Tissuc-TearorTM 匀浆器实验步骤材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清,见实验 1,P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器(Fisher Scientific 15-338-55)硫酸

Transfection with PEI

实验概要Use PEI (Linear 25 kDa Reagent) to transfect in HEK293T cells.主要试剂PEI is polyethyleimine, a 25 kDa linear from Polysciences Inc. Make up solutio

PEI 转染法

材料:质粒DNA指数生长的真核细胞PEI (聚乙烯亚胺)1×HBS (pH7.4)配方:PEI 储存液(100 μM):称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS (pH7.4)中, 0.2 μm 滤膜过滤,储存于4℃备用。1×HBS (pH7.4): 将8.76 g NaCl 溶解

PEI 转染法

材料: 质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI (聚乙烯亚胺) 1×HBS (pH7.4) 配方: PEI 储存液(100 μM):称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS (pH7.4)中, 0.2 μm 滤膜过滤,储存于4℃备用。 1×HBS (pH7.4): 将8.76 g

PEI转染手册

使用方法1. 接种细胞:用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。转染前 18-24 小时进行细胞的铺板,以便在转染时,贴壁细胞的密度大约在 80%左右。注:培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物1)转染前将所有试剂置于室温 10 分钟。下面,以转染 24

线粒体的分级分离实验

高速离心法实验材料线粒体                                                          仪器、耗材离心机                                                          实验步骤 1.  将装有上清

线粒体的分级分离实验

实验材料 线粒体仪器、耗材 离心机实验步骤 1.  将装有上清液的高速离心管,从装有冰块的烧杯中取出,配平后,以17 000 rpm 离心20分钟,弃上清,留取沉淀物。2.  加入0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙液1 ml,用吸管吹打成悬液,以17 000 rpm 离心20

什么是细胞[组分]分级分离?

中文名称细胞[组分]分级分离英文名称cell fractionation定  义应用不同的离心技术,将细胞匀浆中的各种细胞器或不同组成成分分离纯化的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)