RIP技术(RNA结合蛋白免疫沉淀)
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)。RIP技术下游结合microarray技术被称为RIP-Chip,帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变化。RIP 实验基本原理:1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的R......阅读全文
RIP技术(RNA结合蛋白免疫沉淀)
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
RNA蛋白免疫沉淀技术简介
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
免疫沉淀法的类型
个别免疫沉淀法(IP):用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫沉淀法免疫共沉淀法(Co-IP):研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP):用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术(RNA Bin
免疫沉淀法的主要类型
个别免疫沉淀法(IP):用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫共沉淀法(Co-IP):研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP):用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术(RNA Binding
RIP-技术——研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具-二
但是miRNA具有成百上千个靶标,所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异性反应与肿瘤发生之间的联系,是一项非常具有挑战性的工作,尤其是在癌症研究中鉴别出miRNA的准确靶点仍然是一大难题。现已知道miRNA的调节功能是通过结合不同的蛋白质或RNA来实现的,因此研究miRNA与蛋白的结合情况对于揭示
RIP技术简介
由于miRNA被发现在癌症机理中起重要的作用,尤其是与肿瘤转移相关联,因此对于miRNA的研究来说,最让人兴奋的是有希望应有于癌症治疗中的RNA 抑制疗法或模拟miRNA表达疗法,尤其是对于出现肿瘤转移的癌症病人的治疗。但是miRNA具有成百上千个靶标,所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异性反应
探索RNA与蛋白的相互作用,你需要这两种检测
从DNA到蛋白质,这是一个相当复杂的过程。转录DNA的代码,这只是万里长征的第一步。随后,大量蛋白质编辑RNA,带领它从细胞核到细胞质,控制其稳定性,并指导其翻译。 据印第安纳大学的副教授Sarath Chandra Janga介绍,数百个RNA结合蛋白(RBP)参与了这个过程。Janga正在
RIP测序解析RNA结合蛋白SORBS2在卵巢癌细胞转移中的作用...
RIP测序解析RNA结合蛋白SORBS2在卵巢癌细胞转移中的作用机制作为环状RNA和RNA甲基化领域的领跑者,云序生物最近一个月捷报频传。RNA甲基化领域,云序m6ARNA甲基化测序服务协助上海交大余健秀组发表18年国内首篇10分以上RNA甲基化文章(“Nucleic Acid Research”,
RIP测序解析RNA结合蛋白SORBS2在卵巢癌细胞转移作用机制
作为环状RNA和RNA甲基化领域的领跑者,云序生物最近一个月捷报频传。RNA甲基化领域,云序m6ARNA甲基化测序服务协助上海交大余健秀组发表18年国内首篇10分以上RNA甲基化文章(“Nucleic Acid Research”,IF:10.162);环状RNA领域,云序环状RNA测序服务助力
RIP测序解析RNA结合蛋白SORBS2在卵巢癌细胞转移中作用机制
环状RNA作为研究持续火热的明星分子,不同于对其丰富的表达谱研究,环状RNA功能机制研究还仅仅处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制,部分circRNA可竞争性结合miRNA,解除miRNA对靶基因的抑制作用,上调靶基因的表达。其实,环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白,分别在转
环状RNA结合功能蛋白
环状RNA作为研究持续火热的明星分子,不同于对其丰富的表达谱研究,环状RNA功能机制研究还仅仅处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制,部分circRNA可竞争性结合miRNA,解除miRNA对靶基因的抑制作用,上调靶基因的表达。其实,环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白,分别在转录前
免疫沉淀法的基本原理
RIP 实验基本原理:1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验 实验方法原理 噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验
实验方法原理噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂TEN
基于磁珠的RIP实验流程
RIP 实验基本原理:• 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。• 防止非特异性的RNA的结合。• 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。• 结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或 高通量测序(RIP-Seq)方法来
基于磁珠的RIP实验流程
RIP 实验基本原理:• 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。• 防止非特异性的RNA的结合。• 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。• 结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或 高通量测序(RIP-Seq)方法来
基于磁珠的RIP实验流程
RIP 实验基本原理:• 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。• 防止非特异性的RNA的结合。• 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。• 结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或 高通量测序(RIP-Seq)方法来
RIP-实验基本原理
(1)用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。(2)防止非特异性的RNA的结合。(3)免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。(4)结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
免疫沉淀法的基本原理
1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
RIP-技术研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具
microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。 miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA
RIP-技术研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具
microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。 miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA
诱骗RNA结合蛋白不与癌细胞中的天然RNA分子结合
科学家也开始变得“狡猾”,开始用欺骗来对抗癌症。希伯莱大学的研究人员发明了一种诱饵,可以阻止癌症用于转移的RNA结合蛋白。 近年来,RNA结合蛋白在肿瘤生长中起着重要作用已经成为不争的事实。这些蛋白在所有细胞中都很活跃,尤其是在癌细胞中,它们与RNA分子结合,加速癌细胞的生长。不幸的是,目前还
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。 实验材料 N-表达质粒 E.coi
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒储
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料 N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒 储存液缓冲液仪器、耗材 蛋白胨培养基蛋白胨平板N-表达质粒组合文库培养板实验步骤 ―、材料与设备1. 通过比较 β-半乳糖苷酶表达
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验(三)
4. 免疫印迹检测外源蛋白的展示情况pDTSPLAY-B 空载体生成的噬菌体表面不含外源基因,仅有带有 6 个组氨酸标签和 Myc 标签的锚定蛋白(基因 Ⅲ 编码),此蛋白 SDS-PAGE 中的条带在 65 kDa 的位置(实际 Mr 为 45 kDa)。pDISPLAY-B 载体中插入外
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验(一)
实验方法原理 噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料 载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒 抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂
RIP技术研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具
microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA结合到核糖核
推动癌症发展的RNA结合蛋白
最近,一项关于白血病细胞基因表达的研究,发现了一种RNA结合蛋白,在推动癌症的发展过程中起着重要的作用。该蛋白通常活跃在胎儿组织,在成年人体内是关闭的,但它在一些癌细胞中被再度活化。这种表达模式使它成为抗癌药物的一个有吸引力的靶标,因为阻断它的活动,不太可能造成严重的副作用。 这项新的研究,发
中科院广州生物院开发RICK技术首次分离RNA结合蛋白
科学网广州2月13日讯 记者从中国科学院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员米格尔•埃斯特班、张必良和副研究员鲍习琛领衔的科研团队开发RICK技术首次分离RNA结合蛋白。该技术是全面分析细胞内的RNA-蛋白相互作用的重要工具,有助于揭开基因组中的“暗物质”-非编码RNA的未知功能。相关研究2