植物组织中几种酶的组化定位鉴定

原理 在植物生理学的研究中,可利用组织化学的方法,来说明植物体内的生理活动问题。例如,当需要检定某种物质性质和在植物体内分布时,用组织化学的方法,可以达到定位和定性的目的,而且有时比用剥离的官或组织,作生化测定更能说明问题。植物组织中酶的组化鉴定的基本原理,是以某物质为底物在专一酶作用下,产生一种有颜色的化合物来表明有某种酶的存在。 过氧化物酶:在过氧化氢存在下,联苯胺经酶作用脱氢而生成蓝色的络合物,反应式如下:多酚氧化酶:邻苯二酚或邻苯三酚在多酚氧化酶的作用下,产生茶褐色化合物或棕色络合物,反应式如下: 三磷酸腺苷酶:三磷酸腺苷(ATP)经酶作用分解为二磷酸腺苷(ADP),并释放出无机磷酸,与铅离子结合产生磷酸铅,遇硫则生成硫化铅黑色沉淀,可用下列简式表示: 脱氢酶:在脱氢酶作用下,氯化三苯基四氮唑(TTC)被还原为三苯基甲(TTF),溶液从无色变成红色,反应式如下: 本实验学......阅读全文

植物组织中几种酶的组化定位鉴定

原理   在植物生理学的研究中,可利用组织化学的方法,来说明植物体内的生理活动问题。例如,当需要检定某种物质性质和在植物体内分布时,用组织化学的方法,可以达到定位和定性的目的,而且有时比用剥离的官或组织,作生化测定更能说明问题。植物组织中酶的组化鉴定的基本原理,是以某物质为底物在专一酶作

植物组织和细胞显微化学染色_植物组织中酶检测方法

实验步骤植物组织中酶的组织化学鉴定,其基本原理是以某些物质为基屈,在专一酶的作用下,产生 种有颜色的化合物来表示某种酶的存在。为保持酶的活性,通常要采用冰冻切片法来得到切片,有时也可用徒手切片法。(1)细胞色素氧化酶:将切片放人磷酸缓冲液 (pH 值 5.8) 中,室温下放置 5-10min, 然后

尿液沉渣组化定位的进展

 经常在泌尿系统疾病中见到的沉渣有各种管型、粘液丝、红细胞等,确定其来源,明确病变部位对诊断和治疗都有重要意义,目前临床常用的相差显微镜法和光镜染色法,人为因素影响较大,最终难于明确诊断,近年国内外多人报道应用免疫细胞化学染色法判断尿沉渣成分,较为科学的确定其是肾性还是非肾性沉渣。  一、尿红细胞免

植物组织中脂肪氧化酶活力的测定方法

脂肪氧化酶(LOX)是一种含非血红素铁的蛋白质,专一催化具有顺、顺-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸加氧反应,氧化生成具有共轭双键的过氧化氢物。它广泛存在于高等植物  体内,与植物的生长发育、植物的衰老、脂质过氧化作用和光合作用、伤反应及其他胁迫反应等有关。 【原理】 根据基质浓度一

植物酯酶同工酶基因的染色体定位

一、原理酶和蛋白质是基因表达的产物,基因位于染色体上。当某一对同源染色体缺失时,位于这对染色体上的基因和它们所编码的酶或蛋白质也就随之丢失。以正常小麦及其缺体系为材料,通过蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和同工酶分析,即可确定编码这些酶或蛋白质的基因在基因组中的定位(位于哪对染色体上)。酯酶是催化酯类化合物

植物组织中超氧物歧化酶活力的测定

实验概要 超氧物歧化酶(SOD)普遍存在于动、植物体内,是一种清除超氧阴离子自由基(O2- )的酶,它催化下列反应:                 反应产物H2O2可被过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。因此SOD有保护生物体免受活性氧伤害的能力。已知此酶活力与植物抗逆性及衰老有密切关系,故成

植物组织ATP酶活性测定

一、原理 ATP酶(adenosinetriphosphatase)可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应,这一反应放出大量能量,以供生物体进行各需能生命过程。它存在于生物细胞的多个部位,比如细胞质膜上,叶绿体  类囊体膜上,对整个生命的维持有着重要的作用。在生物学研究中,常通过测定酶促反应

植物氧化酶的简易鉴定实验

实验方法原理氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。实验材料马铃薯块茎豌豆叶洋葱甘薯黄瓜刻度试管试剂、试剂盒邻苯二酚酒精溶液仪器、耗材电炉实验步骤一、材料与设备材料:马铃薯块茎、豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜等,20ml刻度试管2支、电炉

植物去氢酶的简易鉴定实验

实验方法原理 去氢酶是呼吸链中参加电子和氢传递的重要酶之一,包括烟酰胺脱氢酶和黄素脱氢酶。还原型的黄素脱氢酶可被某些试剂氧化,例如甲烯兰与黄素酶作用可发生下列变化:实验材料 马铃薯块茎仪器、耗材 温箱试管刀片刻度试管电炉实验步骤 一、材料与设备材料:马铃薯块茎设备:温箱、试管、刀片、20ml刻度试管

植物去氢酶的简易鉴定实验

实验方法原理:去氢酶是呼吸链中参加电子和氢传递的重要酶之一,包括烟酰胺脱氢酶和黄素脱氢酶。还原型的黄素脱氢酶可被某些试剂氧化,例如甲烯兰与黄素酶作用可发生下列变化: 实验材料马铃薯块茎                                                          

植物氧化酶的简易鉴定实验

实验方法原理:氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。                          实验材料马铃薯块茎                                                      

植物氧化酶的简易鉴定实验

实验方法原理 氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。实验材料 马铃薯块茎豌豆叶洋葱甘薯黄瓜刻度试管试剂、试剂盒 邻苯二酚酒精溶液仪器、耗材 电炉实验步骤 一、材料与设备材料:马铃薯块茎、豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜等,20ml刻度试管

植物去氢酶的简易鉴定实验

实验方法原理去氢酶是呼吸链中参加电子和氢传递的重要酶之一,包括烟酰胺脱氢酶和黄素脱氢酶。还原型的黄素脱氢酶可被某些试剂氧化,例如甲烯兰与黄素酶作用可发生下列变化:实验材料马铃薯块茎仪器、耗材温箱试管刀片刻度试管电炉实验步骤一、材料与设备材料:马铃薯块茎设备:温箱、试管、刀片、20ml刻度试管2支、电

在基因组范围定位DNA甲基化

  DNA甲基化在哺乳动物基因表达中扮演了重要角色。尽管通过线粒体遗传且随时间稳定,但是细胞分化、疾病或环境影响都会改变DNA甲基化的模式。近年来,科学家们开发出多种新方法,试图在基因组范围定位DNA甲基化。   尽管从理论上来说,全基因组亚硫酸氢盐测序能让研究人员全面观察甲基化组,但它还是面临技

细胞组织消化常用的几种酶的选择

直接从生物体获取的组织,一般需要将其消化成单个细胞才能进行体外培养。这种直接从离体组织获得的细胞,更接近于生物体内的生活状态,且生物性状尚未发生很大改变,因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。但组织消化过程中常遇到多种问题,例如消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题

植物组织制备基因组DNA实验

氯化铯法 CTAB法             实验方法原理 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则

植物组织制备基因组DNA实验

实验方法原理 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。实验材料 植物组织试剂、试剂盒 抽提缓冲液十二烷基肌氨酸钠TE异丙醇溴化乙锭氯化铯仪器、耗材 离心机实验步骤   收取1

植物组织中淀粉含量的测定

【原理】 淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖,然后在浓硫酸的作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应,即可进行比色测定。 【 仪器 与用具】 电子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小

细胞爬片的免疫组化染色鉴定

实验概要本实验介绍了细胞爬片的免疫组化染色鉴定操作流程及注意事项。主要试剂PBS,0.5%Triton X-100(DPBS配),3%H2O2,封闭血清 (5%正常二抗血清DPBS液),一抗(PBS配,滴度1:200,湿盒),二抗工作液(湿盒),C液(湿盒),DAB显色液,苏木素,树胶主要设备20m

细胞爬片的免疫组化染色鉴定

实验概要本实验介绍了细胞爬片的免疫组化染色鉴定操作流程及注意事项。主要试剂PBS,0.5%Triton X-100(DPBS配),3%H2O2,封闭血清 (5%正常二抗血清DPBS液),一抗(PBS配,滴度1:200,湿盒),二抗工作液(湿盒),C液(湿盒),DAB显色液,苏木素,树胶主要设备20m

植物组织中DNA的提取与测定

一、原理 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。D

植物组织中蔗糖酶活力的测定

一、目的 了解植物  组织中提取蔗糖酶的方法,掌握蔗糖酶活力测定的原理。二、原理 本实验以Nelson 方法测定酶活力,其原理是:蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖,而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基,在碱性溶液中将Cu 2+ 还原,还原糖本身被氧化成羟酸;砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物(

植物组织培养中的无菌技术

一、目的要求  通过实验掌握植物组织培养中的无菌操作技术。学习培养基的配制及灭菌,掌握植物外植体表面消毒的常规方法。 二、基本原理近年来,植物组织培养作为一种研究技术已被广泛。植物组织培养是应用无菌操作方法培养植物器官或组织地任何一部分,甚至单个细胞的观察。植物组织培养中的无菌

掀开空间转录组学的面纱:可视化观察组织中的基因表达

  在一项新的研究中,来自瑞典卡罗琳斯卡研究所和皇家理工学院等机构的研究人员开发出一种新的被称作空间转录组学(spatial transcriptomics)的高分辨率方法研究一种组织中哪些基因是有活性的。这种方法能够被用于所有类型的组织中,而且在临床前研究和癌症诊断中是有价值的。相关研究结果发表在

植物组织培养苗之污染来源与污染鉴定

一、在组织培养中污染来源 1. 植物  本身具有: (1)植物  病原菌 有些作物的病害已被透彻研究,因此在大量繁殖时,可立即检查出来,但有些则否,造成若有污染时,不知来源为何。 (2)和植物  有关的菌类 有修植物本身便会和一些菌种共生,或是寄生于植物内部。 2. 植物  所带

小鼠组织切片免疫组化实验步骤

实验概要免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学

小鼠组织切片免疫组化实验步骤

材料二甲苯  酒精(100%,95%)  EDTA抗原修复工作液(pH8.0,稀释50倍使用)  0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4(稀释10倍使用)  DAB显色液(临用前配制:试剂盒A、B、C各50ul,于1ml水中混匀)。方法1.  石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜  2. 

小鼠组织切片免疫组化实验步骤

实验概要免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学

不同植物组织中多糖的提取中AIR的制备

实验概要本人总结的多糖提取前AIR制备过程实验步骤AIR (alcohol insoluble residue)提取1)新鲜收取的植物在蒸馏水中清洗以除去培养基等物质,后冻干。2)将冻干的样品在液氮中研磨成粉末。3)AIR (alcohol insoluble residue)制备浮萍、拟南芥叶及根

基因定位方法介绍单元化定位法

在构窠曲霉这一类真菌的准性生殖过程中,杂合二倍体细胞在有丝分裂时常随机地丢失它的染色体。染色体在多次有丝分裂过程中逐条丢失而使二倍体细胞终于转变为单倍体细胞的过程称为单元化。如果一对染色体中带有显性的野生型基因的染色体丢失了,那么同源染色体上隐性基因的性状便得以表现。此外,通过体细胞交换也可以从杂合