借助电转方法将Cas9蛋白质／sgRNA导入小鼠原核受精卵生...
借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体胚胎基因编辑解析：借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。应用方向基因敲除：如果想使某个基因的功能丧失，可以在这个基因上产生DSB，非同源末端连接（NHEJ）修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除（indel），造成移码突变，从而实现基因敲除。特异突变引入：如果想把某个特异的突变引入到基因组上，需要通过同源重组来实现，这时候要提供一个含有特异突变同源模版。正常情况下同源重组效率非常低，而在这个位点产生DSB会极大的提高重组效率，从而实现特异突变的引入。定点转基因：与特异突变引入的原理一样......阅读全文
显微注射法的方法过程
一、采集受精卵（1）超数排卵：选取6～8周龄的雌性小鼠，先后腹腔注射5U孕马血清促性腺激素（pregnant mare serum gonactotropin，PMSG）和2.5～5.0U人绒毛膜促性腺激素（humar chorionic gonactotropin，HCG），以促进排卵，然后与鼠龄
CRISPRCas9技术及其在肿瘤研究中的应用
CRISPR的前世今生1987年，日本科学家在研究大肠杆菌的时候发现其基因组上存在一些看起来“奇怪”的重复结构：有一段29碱基的序列反复出现了5次，且两两之间被32个碱基形成的序列隔开了！但这个发现在当时并没有引起科学界的很大关注，毕竟在自然界的生物体内，各种奇奇怪怪的发现实在太多。然后仅仅几年后，
如何正确选择的CRISPR文库？
确认基因型和表型之间的关系是功能基因组学的最终目标。如今，功能基因组学有了一种强大的新工具，那就是CRISPR-Cas9文库。这种方法利用慢病毒载体大规模导入全基因组sgRNA文库，能够同时靶向数千个基因，实现高通量的功能基因筛选。 大家最常用的Cas9靶定5’-NGG PAM位点，这种位点在
转甲状腺素蛋白淀粉样变性CRISPR疗法有望进入临床
开发CRISPR/Cas9基因编辑疗法的生物医药公司Intellia Therapeutics宣布，一项临床前研究结果于近日发表在《Cell Reports》期刊上。?在这项临床前试验中取得的出色结果，也有望助力CRISPR/Cas9技术进入人体临床试验。研究显示，脂质纳米粒子递送Cas9 mR
关于肝损伤修复及其分子调控机制
利用 CRISPR/Cas9 技术，针对靶基因序列设计 sgRNA， 指导 Cas9 蛋白在特定基因位点引起 DNA 双链断裂，在非同源性末端接合修复断裂 DNA 的过程中，靶基因碱基突变或缺失被引入到斑马鱼基因组中，最终导致靶基因无法正常转录翻译，达到基因敲除的目的。目前我们利用 CRISPR
斑马鱼的基因敲除定制（Cas9KO）法介绍
利用 CRISPR/Cas9 技术，针对靶基因序列设计 sgRNA， 指导 Cas9 蛋白在特定基因位点引起 DNA 双链断裂，在非同源性末端接合修复断裂 DNA 的过程中，靶基因碱基突变或缺失被引入到斑马鱼基因组中，最终导致靶基因无法正常转录翻译，达到基因敲除的目的。目前我们利用 CRISPR
斑马鱼的基因敲除定制（Cas9KO）法介绍
利用 CRISPR/Cas9 技术，针对靶基因序列设计 sgRNA， 指导 Cas9 蛋白在特定基因位点引起 DNA 双链断裂，在非同源性末端接合修复断裂 DNA 的过程中，靶基因碱基突变或缺失被引入到斑马鱼基因组中，最终导致靶基因无法正常转录翻译，达到基因敲除的目的。目前我们利用 CRIS
同济大学揭示Dux调控对胚胎发育是至关重要的但不必须
受精后的合子基因组激活（ZGA）是通过称为母体到合子的过程完成的，在此过程中母体RNA和蛋白质被降解，合子基因组被转录激活。在小鼠中，次要ZGA发生在小鼠的S期。 两细胞（2C）胚胎的G1期受精卵，而主要的ZGA发生在2C中后期，全能裂解阶段特异基因和反转录转座子的转录爆发。Dux最近被发现并被
最新RNAi技术可媲美转基因小鼠模型
基因编辑技术一直都是生命科学的热门研究领域，近来编辑领域出现了可与转基因小鼠技术相媲美的新RNAi干扰技术，该技术由洛克菲勒大学的研究人员研制出，在全基因组水平上首次对小鼠进行RNAi筛查研究，并在数月内发现了导致表皮肿瘤生长的基因，研究成果发表在《自然》期刊上。 RNAi技术筛查致病基因
CRRSPR/Cas9基因敲除系统之sgRNA设计
sgRNA设计网站介绍sgRNA的在线设计网站有：1、http://crispr.mit.edu/ ；2、http://www.e-crisp.org/E-CRISP/；等网站。这些网站虽然一定程度上满足了部分研究 者的需要，但仍然存在很多不足和缺陷。例如：1、数据分析周期长；2、无具体的脱靶数据；
crispr/cas9的技术优缺点
CRISPR （Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats）是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞（包括iPS）的特定的基因组位点上进行切割，修饰。 Rudol
crispr/cas9的技术优缺点
CRISPR （Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats）是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞（包括iPS）的特定的基因组位点上进行切割，修饰。 Rudol
crispr/cas9的技术优缺点
CRISPR （Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats）是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞（包括iPS）的特定的基因组位点上进行切割，修饰。 Rudol
PNAS：CRISPRCas9系统构建心脏衰竭小鼠模型
突变体小鼠模型为我们研究个别基因对发育、生理以及疾病发生等科学问题提供了极大的便利。然而，传统的小鼠突变体模型构建是一项十分耗时耗力的工程。最近的CRISPR-Cas9系统对于动物体的遗传修饰是一项革命性的突破。 CRISPR系统首先被发现于细菌抗病毒侵染的免疫系统，通过一类sgRNA的介导，
CRISPRCas9基因编辑的两种不同编辑实验流程的应用（二）
【方法二】1、（用IDT工具）设计sgRNA，使其Spacer与DNA靶序列互补，提交给IDT定制合成sgRNA；2、将sgRNA与Cas9蛋白混匀，形成RNP；3、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核；4、通过sgRNA的Spacer识别DNA靶序列，通过Cas9蛋白识别PAM序列，对DNA进行剪
国家纳米中心：新型非病毒纳米载体将有效抑制肿瘤生长
近日，中国科学院国家纳米科学中心研究员蒋兴宇、郑文富带领的课题组发表了非病毒纳米载体递送的研究成果。他们开发了一系列非病毒的纳米载体，这些非病毒纳米载体可以高效递送CRISPR/Cas9系统到体内，为拓展这一强大基因编辑技术在生命科学和临床应用领域的应用提供了新途径。相关研究成果Thermo-t
国家纳米中心在CRISPR纳米递送研究中取得进展
近日，中国科学院国家纳米科学中心研究员蒋兴宇、郑文富带领的课题组发表了非病毒纳米载体递送的研究成果。他们开发了一系列非病毒的纳米载体，这些非病毒纳米载体可以高效递送CRISPR/Cas9系统到体内，为拓展这一强大基因编辑技术在生命科学和临床应用领域的应用提供了新途径。相关研究成果Thermo-t
新研究实现转基因小鼠脑内多基因的同时激活
1月15日，《自然-神经科学》（Nature Neuroscience）发表了题为《利用CRISPR/dCas9转基因小鼠在脑内进行多基因的同时激活》的研究论文，该研究由中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心、神经科学国家重点实验室杨辉研究组与上海科技大学黄鹏羽
天生一对：CRISPR/Cas9与AAV
CRISPR/Cas9已经成为体外基因组编辑的最流行系统，但体内的基因编辑方法仍然受到Cas9导入问题的限制。腺相关病毒载体（AAV）因免疫原性低而常常用于基因的体内导入。不过，化脓链球菌（spCas9）和嵌合sgRNA（总共~4.2 kb）要包装到AAV载体中还蛮有挑战性的，因为AAV只能容
显微注射技术:跨越百年的不老传奇
江湖寒，刀锋冷，人断肠。问世间江湖，几许清醒，几许梦寒？狂歌以后，路遥遥，风沙厉! ——古龙 时光荏苒，岁月穿梭，现已是公元2019年，回望2018，请允许小编以这古龙先生之词怀金庸先生之作。2018，注定是不平凡的一年，生命科学领域可谓是悲喜交加，前有科学家利用单细胞分离与单细胞
德国应用化学：蒋兴宇组用非病毒纳米载体传送CRISPR
导读：近日，中国科学院国家纳米科学中心研究员蒋兴宇、郑文富带领的课题组发表了非病毒纳米载体递送的研究成果。他们开发了一系列非病毒的纳米载体，这些非病毒纳米载体可以高效递送CRISPR/Cas9系统到体内，为拓展这一强大基因编辑技术在生命科学和临床应用领域的应用提供了新途径。 近日，中国科学院国
显微注射技术介绍
时光荏苒，岁月穿梭，现已是公元2019年，回望2018，请允许小编以这古龙先生之词怀金庸先生之作。2018，注定是不平凡的一年，生命科学领域可谓是悲喜交加，前有科学家利用单细胞分离与单细胞测序技术揭示胚胎发育过程助力生命医学研究，后有饱受争议的世界首例基因编辑婴儿的诞生[1]，科学的脚步以超乎人类想
PNAS：在小鼠细胞中利用CRISPRCas9技术高效进行基因组编辑
为了利用CRISPR-Cas9基因编辑系统切割基因，人们必需设计一种与靶基因的DNA相匹配的RNA序列。大多数基因具有上百个这样的在基因组中的活性和独特性上存在差异的序列。因此，寻找最佳的序列很难通过手工实现。一种新的“CrispRGold”程序有助科学家们鉴定出最为高效的和最为特异性的RNA序
CRISPRCas9基因编辑的两种不同编辑实验流程的应用（三）
Alt-R® CRISPR-Cas9实例分析1、特别优化的crRNA/tracrRNA/sgRNA长度，提高编辑性能以HPRT基因中的12个位点为靶点，分别使用Alt-R® crRNA:tracrRNA、Alt-R® crRNA XT:tracrRNA、Alt-R® sgRNA，与Alt-R®
显微注射技术:跨越百年的不老传奇
江湖寒，刀锋冷，人断肠。问世间江湖，几许清醒，几许梦寒？狂歌以后，路遥遥，风沙厉! ——古龙 时光荏苒，岁月穿梭，现已是公元2019年，回望2018，请允许小编以这古龙先生之词怀金庸先生之作。2018，注定是不平凡的一年，生命科学领域可谓是悲喜交加，前有科学家利用单细胞分离与单细胞
华人先锋《Nature－Methods》利用CRISPRi绘制遗传互作图谱
斯坦福大学亓磊（Lei Stanley Qi）教授早年毕业于清华大学，现任斯坦福大学生物工程学、化学和系统生物学系的助理教授，近年来他在CRISPR研究领域取得了一系列突破性进展，比如第一次采用CRISPR-Cas9系统的变种技术，改变了读取诱导多能干细胞(iPSCs)基因组的方式（由此入选了生
首次通过Cas9对Rpe65基因的治疗性修正
先天性黑蒙症(Leber’s congenital amaurosis, LCA)，是发生最早、最严重的遗传性视网膜病变, 出生时或出生后一年内双眼锥杆细胞功能完全丧失，导致婴幼儿先天性盲。先天性黑蒙症占遗传性视网膜病变的5%以上，是导致儿童先天性盲的主要疾病（占10%-20%），多呈常染色体隐
NEPA21电转在工业微藻中高效无转基因靶向诱变的应用
Highly efficient transgene-free targeted mutagenesis and single-stranded oligodeoxynucleotide-mediated precise knock-in in the industrial microalg
精子导入法的方法过程
利用精子作为外源基因载体，借助受精作用把外源基因导入受精卵，整合到受精卵的基因组中，称之为精子载体导入法，是构建转基因动物的一种新尝试。该法简单、方便，依靠生理受带过程，免去了对原核的损伤。但在实践中成功率较低，对于精子是否可作为外源DNA载体也存在争论。这项技术尚处在探索阶段。该法可以将人工授精、
转基因小鼠模型的建立(SOP)1
名称：转基因小鼠模型的建立(SOP)关键词：转基因小鼠目的：在动物体研究转化基因原理：转基因动物是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。整合到动物染色体基因组的外源基因称为转基因。转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的构建、载体和受体的筛选、基因导人技术、供