借助电转方法将Cas9蛋白质／sgRNA导入小鼠原核受精卵生...
借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体胚胎基因编辑解析：借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。应用方向基因敲除：如果想使某个基因的功能丧失，可以在这个基因上产生DSB，非同源末端连接（NHEJ）修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除（indel），造成移码突变，从而实现基因敲除。特异突变引入：如果想把某个特异的突变引入到基因组上，需要通过同源重组来实现，这时候要提供一个含有特异突变同源模版。正常情况下同源重组效率非常低，而在这个位点产生DSB会极大的提高重组效率，从而实现特异突变的引入。定点转基因：与特异突变引入的原理一样......阅读全文
借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生...
借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体胚胎基因编辑解析：借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着
电转化仪高效转染mRNA进入小鼠受精卵形成稳定突变体
摘要随着小鼠基因组序列测序完成，许多研究都围绕着功能基因参与的生物学过程，特别是发育和疾病研究领域。那么稳定遗传修饰的模型动物对于阐明基因的作用十分重要，然而，传统的方法，包括在胚胎干细胞中的同源重组或是构建小鼠嵌合体，既耗时又耗力。然而新的基因组编辑方法明显的优化这个过程。在有效的基因组编辑方法中
应用优化CRISPR技术建立基因完全敲除的小鼠及猴
6月6日，《细胞研究》在线发表了一项成果，应用改进的“C-CRISPR”技术可以获得单基因或多基因功能完全敲除的小鼠及猴。这项研究由中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心的杨辉研究组、熊志奇研究组以及神经所苏州非人灵长类研究平台孙强团队合作完成。该研究通过将多个
南京大学黄行许：连发CRISPR/Cas9重要研究成果
南京大学模式动物研究所的黄行许（Xingxu Huang）教授，是近年来基因组编辑领域的风云人物之一。其实验室不仅首次在世界上利用CRISPR/Cas9进行了大鼠的条件性基因敲除，还通过原核注射实现了世界上首次猴基因敲除。这些成果在国际上受到广泛的瞩目。 近期黄行许教授课题组接连在CRISPR
基因编辑新进展:－关键酶消除CRISPRCas技术脱靶效应
近来全球兴起的CRISPR-Cas编辑技术是基于细菌和古细菌天然防御机制的一项技术。与真核生物体内的RNA干扰过程极为相似，CRISPR-Cas 技术能够特异性切割核酸片段，不过该技术也有可能发生非特异性切割，引起基因组非靶向位点的突变，这一问题越来越受到科研人员的关注。 CRISPR
BEX电转化仪高效转染mRNA入卵助力CRISPR/Cas9基因编辑
BEX电转化仪高效转染mRNA入卵助力CRISPR/Cas9基因编辑摘要近期，CRISPR/Cas9系统被广泛地应用于突变体小鼠的构建，但是借助于微注射方法很大程度上限制了基因编辑于高通量上的应用。这篇文章中，我们阐述了一个简单，高效，大规模的基因编辑方法：即借助于电转染将RNAs转入卵，而不是通过
27篇SNC论文！他凭这些学术成就获亿元融资
基因修饰动物是研究在发育和疾病中基因功能的重要工具。CRISPR/Cas9系统有效的应用于构建基因敲除和敲入小鼠。而杨辉团队正好专注于该领域。 杨辉，30岁时，就成为中科院上海生科院神经所研究员；2015年，入选国家“青年千人计划”；2019年，杨辉博士获得国家杰出青年基金资助。 由杨辉创办
基因编辑那么热，可是你都会用了吗？
基因编辑是一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，通过改变生物的遗传基因，使其特定的基因功能丧失作用，通过研究对生物体造成的影响，进而推测出该基因的生物学功能。本文为你科普基因编辑三大技术： 基因敲除 进行DNA水平编辑。一般用于构建基因敲除鼠模型。 CRISPR/Cas9：C
CRISPR－实验利器：BTX－电转仪
什么是 CRISPR?CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）, 是细菌中用于与病毒进行斗争的免疫武器。 生命进化历史上，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出 CRISPR 系统，利用这个系统，细菌可以不动
PNAS：首次利用CRISPR实现特殊干细胞成体基因修复
北京生命科学研究所的研究人员首次利用体外成熟的Cas9/sgRNA核糖蛋白复合物在病人特异性的隐性营养不良性大疱性表皮松解症（Recessive dystrophic epidermolysis bullosa, RDEB）小鼠表皮干细胞实现了成体基因修复，从而为RDEB疾病以及其它遗传性皮肤疾
蛋白质的电转
实验概要很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT，DBM)、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的最多的还是硝酸纤维素膜(NC膜)，该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80μg/cm2。与其它膜相比，NC膜具有不要预先活化，对转移物质生物活性影响不大，能应用多种染
如何让基因敲除效率提升3倍，价格降低一半？
CRISPR/Cas9基因编辑技术以它效率高、操作简便、成本低等特点被广泛应用于基因敲除小鼠实验中，但是在将RNAs注入受精卵的环节中，传统的显微注射技术需要借助显微操作系统人工逐个进行受精卵注射，十分耗时。同时，想要提高基因敲除的成功率，需要获得更多受精卵，再加上人工设计基因打靶方案耗时费力，
如何让基因敲除效率提升3倍，价格降低一半？
CRISPR/Cas9基因编辑技术以它效率高、操作简便、成本低等特点被广泛应用于基因敲除小鼠实验中，但是在将RNAs注入受精卵的环节中，传统的显微注射技术需要借助显微操作系统人工逐个进行受精卵注射，十分耗时。同时，想要提高基因敲除的成功率，需要获得更多受精卵，再加上人工设计基因打靶方案耗时费力，
－Cell子刊突破：无需克隆的CRISPR新技术
来自荷兰Hubrecht研究所和乌特勒支医学中心（UMC Utrecht）、麻省理工学院的研究人员称，他们开发出了一种自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技术，可以绕开基因编辑过程中所有的克隆步骤，在数小时内完成CRISPR/Cas9介导基因突变及位点特异性转基因敲入。他们的研究成
蛋白质的电转实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材电转移槽电泳仪实验步骤1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。4. 将3块
蛋白质的电转实验
很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT，DBM）、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的最多的还是硝酸纤维素膜（NC膜），该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80 μg/cm2。实验方法基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒 转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液
蛋白质的电转实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质的电转实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材 电转移槽电泳仪实验步骤 1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。4.
Nature子刊：首次实现蛋白质重要氨基酸个体水平遗传筛选
图片来源于网络 CRISPR/Cas9基因编辑系统利用Cas9核酸内切酶结合sgRNA对靶DNA进行切割，诱发DNA进行非同源末端连接（Non-homologous End Joining，NHEJ)或同源重组（Homology-directed repair，HDR）损伤修复机制，进而实现靶基因
李劲松课题组Cell－Stem－cell用CRISPR构建多重基因修饰小鼠
来自中科院上海生命科学研究院的研究人员报告称，他们找到了一种方法来提高利用小鼠孤雄单倍体胚胎干细胞系(AG-haESCs)生成半克隆小鼠的效率。并证实借助于CRISPR-Cas9技术可构建出多重遗传修饰的半克隆小鼠及实现对其的诱变遗传筛查。这些重要的研究结果发布在7月9日的《细胞干细胞》（Cel
“人造精子”技术实现蛋白质重要氨基酸个体水平遗传筛选
10月1日，国际知名学术期刊Nature Cell Biology 在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所李劲松和陈勇研究组的最新合作研究成果“CRISPR–Cas9-mediated base-editing screening in mice identifies DND1 amin
“人造精子”技术实现蛋白质重要氨基酸个体水平遗传筛选
10月1日，国际学术期刊《自然-细胞生物学》（Nature Cell Biology）在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所李劲松和陈勇研究组的最新合作研究成果“CRISPR–Cas9-mediated base-editing screening in mice identif
显微操作技术在基因编辑中的应用（一）
本文将大致回顾小鼠转基因领域的显微操作技术，包括CRISPR/Cas9技术，旨在对这类客户所用的工作流程和术语进行介绍。此外，还针对有用的显微操作系统配置提供一些建议。显微操作技术概述图1：CRISPR/Cas9、原核注射和胚胎干细胞移植技术的粗略比较。更多详情请参阅下文。小鼠胚胎早期发育阶段 图2
吉林大学：利用CRISPR/Cas9构建转基因猪
来自吉林大学的研究人员报告称，他们利用CRISPR/Cas9系统高效构建出了myostatin (MSTN)基因突变猪。这一研究成果发布在11月13日的《Scientific Reports》杂志上。吉林大学的逄大欣(Daxin Pang)教授及焦虎平（Huping Jiao）是这篇论文的共同通
吉林大学：利用CRISPR/Cas9构建转基因猪
来自吉林大学的研究人员报告称，他们利用CRISPR/Cas9系统高效构建出了myostatin (MSTN)基因突变猪。这一研究成果发布在11月13日的《Scientific Reports》杂志上。吉林大学的逄大欣(Daxin Pang)教授及焦虎平（Huping Jiao）是这篇论
CRISPR大范围“脱靶”？可能还需要进一步验证
来源：Pixbay编者按：CRISPR基因编辑会导致数以百计意想不到的突变？5月30日，《自然-方法》刊登的一篇通信文章显示，来自美国哥伦比亚大学等研究机构的科学家确认通过CRISPR基因编辑技术成功修复了导致两只小鼠失明的基因后，经全基因组测序发现小鼠体内有超过1500个单核苷酸发生突变，并有百个
CRISPR导致突变－从而大范围“脱靶”？
CRISPR基因编辑会导致数以百计意想不到的突变？5月30日，《自然-方法》刊登的一篇通信文章显示，来自美国哥伦比亚大学等研究机构的科学家确认通过CRISPR基因编辑技术成功修复了导致两只小鼠失明的基因后，经全基因组测序发现小鼠体内有超过1500个单核苷酸发生突变，并有百个以上的位点发生发生了大片段
中科院学者连发两篇Cell－Res文章获CRISPR技术重要突破
基因编辑工具的快速发展令整个生物学研究领域疯狂，目前第三代DNA剪刀的主角是CRISPR，这是一种比其前身更快更便宜的工具。近期来自中科院神经科学研究所的杨辉研究组与多个研究组合作，在Cell Research杂志上发表了多篇文章，获得了CRISPR-Cas9技术的重要突破。 研究组成员通过与
上海生科院完整染色体敲除研究获进展
11月25日，中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心杨辉研究组与北京大学胡家志实验室合作完成的研究论文，以《CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除目标染色体》为题，发表在《基因组生物学》上。该研究介绍了CRISPR/Cas9技术的新型应用，即在细胞、胚胎或
显微注射法的方法过程
一、采集受精卵（1）超数排卵：选取6～8周龄的雌性小鼠，先后腹腔注射5U孕马血清促性腺激素（pregnant mare serum gonactotropin，PMSG）和2.5～5.0U人绒毛膜促性腺激素（humar chorionic gonactotropin，HCG），以促进排卵，然后与鼠龄