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miRNA的qPCR检测

测序技术的引入促使miRNA研究领域进入快速发展阶段,然而qPCR仍是验证测序数据的重要标准。本文将为您介绍使用qPCR进行miRNA分析的基本要点,希望能帮助新人快速入门。什么是miRNA?miRNA是一类小的非编码RNA,能够与RNA诱导沉默复合物(RISC)结合,通过作用于mRNA,进而介导转录后基因表达。通常情况下,miRNA-RICS复合物能够通过阻断靶标miRNA的翻译或促使其降解,从而起到抑制mRNA表达的作用。多数miRNA长度约为18‒22个核苷酸,在样本中的总RNA量中仅占很小的一部分。通常认为总RNA中miRNA的量大约为0.01%(1)。经过多年研究,一些mRNA与其相应miRNA之间的调控作用已经取得了较多的数据积累。miRNA参与的生物过程包括分化、发育、信号转导和宿主感染应答。此外,多项研究结果表明,miRNA表达失调是癌症等疾病的病因,或是某些疾病的指标。循环miRNA表达与疾病有关,并且血清和血......阅读全文

miRNA qPCR Detection Primer Set(miRNA检测试剂盒)实验说明

一、概述1、介绍microRNA(miRNA)是一类有大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA,其广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式,都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此,对miRNA 的检测方法主要有Northern B

miRNA qPCR Detection Primer Set(miRNA检测试剂盒)实验说明

  一、概述   1、介绍   microRNA(miRNA)是一类有大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA,其广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式,都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此,对miRNA 的检测方法主要有Northe

Nacia数字PCR在基因表达分析中的应用

华盛顿大学医学院儿科和加利福尼亚大学圣地亚哥分校医学院儿科的研究人员建立了一个稳定可靠的基于RNA磁珠提取和数字PCR的方法,可从粪便样本中检测与EE(热带肠病)关联的人mRNA,灵敏度可达20拷贝GAPDH mRNA/200mg粪便样本。已有报道表明病人粪便中存在人mRNA,可作为反应病人消化道病

miRNA与癌症:了解它们之间的关联

  在肿瘤发生的经典模型中,癌症通过慢慢积累突变、放任细胞增长而发生。许多这样的突变影响关键的调控蛋白,如原癌基因和抑癌基因。不过,非编码RNA基因的突变也同样有害,尤其是microRNA。  microRNA(miRNA)是一类22个核苷酸的调控转录本。它们与mRNA靶点相结合,或抑制其翻译,或诱

早期诊断:让微RNA发光,改变液体活检的纳米技术

  在癌症早期诊断领域,通过检测血液或尿液中与肿瘤相关的生物标记物来诊断癌症的液体活检与传统活检相比侵入性更低,更为经济省时,需要专业技能也较少。循环DNA(circulating DNA),微RNA(microRNA, miRNA),和其它非编码RNA都可以成为与疾病相关的生物标记物。日前,美国纪

Nature新成果:ddPCR技术助力定量miRNA

  来自Bio-Rad公司,Fred Hutchinson癌症研究中心等处的研究人员发表了题为“Absolute quantification by droplet digital PCR versus analog real-time PCR”的文章,证明了液滴数字PCR( Droplet D

微RNA检测新方法:纳米技术改变液体活检

  日前,美国研究人员利用单壁碳纳米管的光谱特性研制了一种能直接检测体液中微RNA的纳米传感器。这种传感器弥补了传统微RNA检测方法的缺陷,有望帮助医疗人员对患者进行早期诊断。  在癌症早期诊断领域,通过检测血液或尿液中与肿瘤相关的生物标记物来诊断癌症的液体活检与传统活检相比侵入性更低,更为经济省时

Cell Reports:外泌体miRNA如何影响细胞通讯?

  2013年,美国、德国3位科学家凭借他们所发现的细胞囊泡运输的调节机制,荣获2013年诺贝尔生理学或医学奖。外泌体(exosomes)作为人体内一类重要囊泡,也开始受到越来越多的关注。科学家们已发现,外泌体会参与到免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结等重要的生物过程中,细胞会通过分泌外泌体,

中国农大:鸡MDV诱导型淋巴瘤的miRNA分析

  马立克氏病(Marek’s Disease, MD)是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病灶。MD 是一种世界性疾病,目前是危害养鸡业健康发展的三大主要疫病之一,引起鸡群较高的发病率和死亡率。同时

什么是MOI值?如何进行MOI值摸索?

什么是MOI值?如何进行MOI值摸索? MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指病毒感染细胞的比例。选择合适的MOI值,病毒的感染效率以及目的蛋白的表达量越高,相对细胞的毒性越小。对于分裂活跃的细胞,比如293细胞MOI=1时,95%以上的细胞均可以表达目的

锐赛病毒技术专区:什么是MOI值?如何进行MOI值摸索?

  什么是MOI值?如何进行MOI值摸索?   MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指病毒感染细胞的比例。选择合适的MOI值,病毒的感染效率以及目的蛋白的表达量越高,相对细胞的毒性越小。对于分裂活跃的细胞,比如293细胞MOI=1时,95%以上的细胞均可以表达

Nature Medicine:miRNA有助于对抗抑郁症

  随着生活压力不断增大,越来越多的人群患上了心理疾病,重度抑郁症(Major depressive disorder,MDD)就是一类常见的情绪障碍疾病。目前已经不少药物用于治疗这种疾病,但是不同患者对于药物的反应却不尽相同,个体间的差异会对治疗效果产生很大影响。在6月8日出版的Nature Me

案例分享: Agilent miRNA芯片在各类样本中的应用

  1.新鲜组织样本   新鲜组织一般包括以人类疾病诊断及治疗为目的,经患者或健康人同意后,从患者的机体中切取的未经特殊化学试剂处理的病变组织或相邻健康组织,或者健康人的相同部位的对照组织。这些人类疾病相关的新鲜组织样本的整理、保存、研究对于提高疾病的诊断质量、促进临床工作、探讨及研究疾病的发病机

案例分享: Agilent miRNA芯片在各类样本中的应用

  1.新鲜组织样本   新鲜组织一般包括以人类疾病诊断及治疗为目的,经患者或健康人同意后,从患者的机体中切取的未经特殊化学试剂处理的病变组织或相邻健康组织,或者健康人的相同部位的对照组织。这些人类疾病相关的新鲜组织样本的整理、保存、研究对于提高疾病的诊断质量、促进临床工作、探讨及研究疾病的发病机

植物miRNA及piRNA的逆转录

miRNA在植物的发育、抗病、和应激反应中发挥着重要作用。一般认为,这些小的非编码RNA通过靶向mRNA剪切,在后转录水平调节植物的基因表达。这些基因表达中的靶向变化由数百个成熟miRNA的差异表达所调控,每个成熟miRNA结合在靶mRNA的特定序列上。因此,对植物的成熟miRNA调控和表达进行分析

2020年自然研究热点-外泌体研究

  一、外泌体研究热度持续攀升   外泌体(exosome)是活细胞分泌的30-200nm的囊泡,在电镜下具有非常明显单层膜结构,通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体,

2020年自然研究热点-外泌体研究

  一、外泌体研究热度持续攀升   外泌体(exosome)是活细胞分泌的30-200nm的囊泡,在电镜下具有非常明显单层膜结构,通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体,

空间转录组测序样本准备指南

  一、外泌体研究热度持续攀升   外泌体(exosome)是活细胞分泌的30-200nm的囊泡,在电镜下具有非常明显单层膜结构,通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体,

lncRNA MIR100HG和miR100以及miR125b在CRC抗cetuximab调控作用

  lncRNA MIR100HG-derived miR-100 and miR-125b mediate cetuximab resistance via Wnt/β-catenin signaling   来源于lncRNA MIR100HG的miR-100和miR-125b通过Wnt/

lncRNA MIR100HG和miR100以及miR125b在CRC抗cetuximab的调控作用

  lncRNA MIR100HG-derived miR-100 and miR-125b mediate cetuximab resistance via Wnt/β-catenin signaling   来源于lncRNA MIR100HG的miR-100和miR-125b通过Wnt/

陈润生院士组:miRNA参与调控蜜蜂级型分化

  蜜蜂是典型的社会性昆虫,蜂群通常由两种性别,三种类型的个体组成,即雄蜂、工蜂和蜂王。雄蜂为单倍体,由未受精卵发育而来,而蜂王和工蜂都是二倍体,由受精卵发育而来,均为雌性蜂。作为两种不同的级型,蜂王和工蜂虽具有相同的遗传背景,但二者不仅外部形态有显著不同,在生理和行为上也存在巨大差异。这种级型的决

一文了解外泌体在肺癌中的研究进展

  肺癌是全世界发病率和病死率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌类型的85%以上,死亡率高达80%~90%。由于缺乏有效的早期诊断筛查方法,70%肺癌患者确诊时已是晚期,5年生存率仅为16%~18%。因此,寻找新的生物标志物和靶向治疗的新靶点对肺癌的早期诊断和临床治疗至关重要。

关于外泌体的肿瘤应用研究进展

  外泌体是由多种活细胞通过内吞-融合-外排等一系列生物学机制而形成的,具有脂质双层膜结构的纳米级微小囊泡。其最早是在1983年由Johnstone RM等研究羊成熟网织红细胞过程中囊泡的形成时发现,在生理和病理条件下,都可以被一些细胞以胞吐的方式所释放,如:免疫细胞、干细胞、肿瘤细胞,且广泛分布于

糖尿病血小板来源miRNA参与海绵机制介导动脉损伤修复

  血管平滑肌细胞(VSMC)在健康状态下处于去分化表型,在其受损时,循环系统中的血小板快速激活,通过凝血反应为受伤部位止血,同时对创伤部位释放PDGF、血栓烷等生物活性介质,使VSMC切换为高分化表型,同时细胞处于促增殖状态。血管内膜增生型糖尿病就是由于VSMC分化和去分化状态切换机制失调引起的。

糖尿病血小板来源miRNA参与海绵机制介导动脉损伤修复

  血管平滑肌细胞(VSMC)在健康状态下处于去分化表型,在其受损时,循环系统中的血小板快速激活,通过凝血反应为受伤部位止血,同时对创伤部位释放PDGF、血栓烷等生物活性介质,使VSMC切换为高分化表型,同时细胞处于促增殖状态。血管内膜增生型糖尿病就是由于VSMC分化和去分化状态切换机制失调引起的。

揭示糖尿病血小板来源miRNA参与海绵机制介导动...(一)

揭示糖尿病血小板来源miRNA参与海绵机制介导动脉损伤修复文章导读血管平滑肌细胞(VSMC)在健康状态下处于去分化表型,在其受损时,循环系统中的血小板快速激活,通过凝血反应为受伤部位止血,同时对创伤部位释放PDGF、血栓烷等生物活性介质,使VSMC切换为高分化表型,同时细胞处于促增殖状态。血管内膜增

2018国自然研究热点一:环状RNA研究深度剖析

  1.环状RNA为什么火?它到底是何方神圣?   2013年两篇Nature[1][2]文章的出世,彻底颠覆了我们对RNA的传统认知,同时也迅速引爆了整个生物医学界!经过严格统计汇总后,2017年国家自然科学金获批的项目中环状RNA研究相关的项目总数高达176项,其中有两项杰出青年基金,一项优秀

环状RNA研究深度剖析

  1.环状RNA为什么火?它到底是何方神圣?   2013年两篇Nature[1][2]文章的出世,彻底颠覆了我们对RNA的传统认知,同时也迅速引爆了整个生物医学界!经过严格统计汇总后,2017年国家自然科学金获批的项目中环状RNA研究相关的项目总数高达176项,其中有两项杰出青年基金,一项优秀

基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展(三)

3.2 dPCR在转基因植物检测方面的研究 转基因植物及相关食品的定量分析主要测定转入基因的相对含量。目前常用qPCR作为核酸定量方法。dPCR可以不需要校准物而准确测量低拷贝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米种子的外源检测基因和hmg基因的拷贝数,

NanoString技术检测微创穿刺样品蛋白表达

NanoString技术由于其高灵敏度,高重复性并且检测过程中不需要进行反转录和扩增,一经推出便受到了广泛的关注和认可。现在这项技术广泛的应用在基因表达(mRNA),小RNA(miRNA),拷贝数变异(CNV),长链非编码RNA(lncRNA)等方面的检测,但是这些检测的对象都是核酸,对于细胞蛋白的