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DNA合成(DNAsynthesis)技术介绍

蛋白质概念提出:DNA多肽合成(DNA synthesis ):按照预定核苷酸的顺序,将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法,即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸,可自动化操作。)目前,oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,此方法具有高效、快速偶联等优点,已在DNA化学合成中广泛使用。DNA化学合成不同于酶促的DNA合成过程从5’®3’方向延伸,而是由3’端开始。具体的反应步骤如下:一、 保护基 (Deblocking): 用三氯乙酸 (Trichloroacetic Acid,TCA) 脱去连结在CPG (Controlled Pore Glass) 上的核苷酸的保护基团DMT (二甲氧基三苯甲基),获得游离的5’-羟基端,以供下一步缩合反应。二、活化 (Activation): 将亚磷酰胺保护的核苷酸单体与四氮唑活化剂混合并进入合成柱,形成......阅读全文

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

分子生物学常用实验技术(page 3)

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN

细胞周期的间期与分裂期阶段介绍

细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。(一) 间期间期又分为三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。1. G1期(first gap) 从有丝分裂到DNA复制前的一段时期,又称

分子实验方法4:RNA的提取和cDNA合成

第一节 概 述  从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工

Nature新发现重写教科书:DNA复制可发生于细胞分裂期

  12月2日,顶级学术期刊《Nature》发表一篇关于DNA复制时间点的最新研究,证实除了细胞分裂间期S期之外,DNA复制还会出现在细胞分裂期。很明显,这一新发现与教科书内容相悖,有望为癌症治疗提供新的思路。  知识回顾:教科书中的细胞周期  生物课本上对于细胞周期的描述如下:  细胞周期(Cel

DNA合成:你应该知道的秘密

  说起DNA合成,几位前辈师兄师姐们犹会提起上世纪90年代世行贷款买仪器,好些单位甚至医院都赶时髦买了DNA合成仪,买回来才发现自己那点合成需求和费用,委实买得起用不起,那昂贵的设备成了摆设。彼时国外DNA合成虽然质量好纯度高,可寄回来海关不好过,时间上实在伤不起,幸亏国内迅速崛起的几家

分子杂交技术 -1

互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。  杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方

细胞周期-1

以有丝分裂方式增殖的细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程。这一过程周而复始。细胞周期是50年代细胞学上重大发现之一。在这之前认为有丝分裂期是细胞增殖周期中的主要阶段,而把处于分裂间期的细胞视为细胞的静止阶段。1951 年霍华德等用32P-磷酸盐标记了蚕豆根尖细胞,通过放射自显影研究根尖

mRNA提取、分离纯化

从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之

非程序DNA合成检测实验

实验方法原理 非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期,但当处于非S期细胞DNA受损伤时,随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象,即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时,也诱导DN

基因的PCR扩增实验原理、实验材料和操作步骤

实验原理单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用

RNA的提取和cDNA合成原理和实验方法

第一节 概 述   从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了

机械化代替手动,自动化技术在分子生物界大显身手

  未来已来,科幻大片中机器人占领地球?也许不是没可能!   2019在北京举行的世界机器人大会让大家一饱眼福,体会到目前基于机器的自动化产业已应用于衣食住行的各个方面,甚至在生物学和生物医药领域中,自动化与高通量的实验方式也正在成为工业级研究的新趋势。   2019世界机器人大会展览[1]

聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用-1

第一节 概述  聚合酶链反应或多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作

非程序DNA合成检测实验

实验方法原理非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期,但当处于非S期细胞DNA受损伤时,随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象,即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时,也诱导DNA

环介导等温扩增技术的原理与应用

原理与应用环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术是日本学者Notomi T于2000年发明的一种新的DNA扩增技术,该方法能够高效、特异、快速的在等温条件下完成。通过一系列的链置换扩增反应,该方法能够在1h内就可以将靶基因

DNA化学合成的应用

   随着DNA合成技术的发展,特别是自动化合成技术的引入,人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前,DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段,并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。   1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用

DNA化学合成的应用

   随着DNA合成技术的发展,特别是自动化合成技术的引入,人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前,DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段,并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。   1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用

Nature Methods:这个蛋白 能可视化活细胞发育周期的“盲区”

  G1期(first gap):从有丝分裂到DNA复制前的一段时期,又称合成前期,此期主要合成RNA和核糖体。该期特点是物质代谢活跃,迅速合成RNA和蛋白质,细胞体积显著增大。这一期的主要意义在于为下阶段S期的DNA复制作好物质和能量的准备。  S期(synthesis):即DNA合成期,在此期,

Twist与泓迅科技携手

  2017年7月11日(美国西部时间),Twist Bioscience与Synbio Technologies(泓迅科技)签署了合作协议,两家公司利用优势互补,将共同为客户提供长片段基因合成服务,最长可合成70kb基因。合作双方希望通过共同努力加速实现3.0DNA合成(下一代DNA合成)技术平台

这种DNA纠错酶竟然将基因合成产物的错误率降低到0.41/Kb

  DNA的从头合成是合成生物技术的基础平台之一。但是,由于大规模DNA合成过程中难以避免地产生错误,DNA纠错环节的效率和经济性已经成为限制DNA合成质量、通量与成本的关键问题之一。针对此瓶颈,青岛能源所单细胞中心研发出高耐久低成本的DNA合成纠错系统,大幅度提高了DNA纠错环节的效率和经济性。该

研究团队开发出高耐久低成本的DNA合成纠错系统

  DNA的从头合成是合成生物技术的基础平台之一。但是,由于大规模DNA合成过程中难以避免地产生错误,DNA纠错环节的效率和经济性已经成为限制DNA合成质量、通量与成本的关键问题之一。针对此问题,中国科学院青岛生物能源与过程研究所单细胞中心研发出高耐久低成本的DNA合成纠错系统,大幅度提高了DNA纠

DNA化学合成的应用

随着DNA合成技术的发展,特别是自动化合成技术的引入,人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前,DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段,并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用1.1合成基因目

“人造生命”研究在巨大争议中依旧进行

  人类探索自然的本能  很多人谴责文特尔进行生命研究是出于个人利益,是为了聚集金钱,这话似乎不够公正。文特尔说:“我从研究中已经得到了很多钱,我已经是亿万富翁。”他的豪华别墅高居在山腰之上,俯瞰着加勒比海,但这种好生活却使他烦躁不安。  他被迫离开塞莱拉公司后,分到了大量金钱,生活安逸,然而情绪非

DNA序列测定的技术和策略

目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱

引物合成详解

  1. 引物是如何合成的?   目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不

引物合成详解

  1. 引物是如何合成的?   目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不

引物合成相关问题25答

  1. 引物是如何合成的?  目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和

百强药企争夺这100个药品;5.76亿美金!上药收购完成,

  大公司   01 拓展免疫球蛋白潜力 Shire达成合作协议    药明康德:AB Biosciences和全球罕见病领域生物技术领导者Shire近日宣布,双方签署了一项协议,Shire获得全球独家授权进行开发并商业化AB Biosciences的泛受体相互作用分子(PRIM),该产品使用A

DNA新“写法”提振合成生物学

  虽然科学家能以更快的速度阅读DNA序列,但其编写DNA的能力并未跟上。那些想要的用于诸如合成生物学等领域的“定制”DNA,只能勉强对付在缓慢且昂贵的化学过程中被合成的短链。  这种情况似乎即将改变。近日,来自法国一家生物技术初创公司的研究人员在于美国旧金山举行的合成生物学会议上宣布,利用生物体内