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DNA测序技术的现状和发展(四)

1.1.3.2 模板制备程序完全的体外大规模模板制备工作是达成高通量、低价格测序技术的前提。已广泛使用的乳液PCR扩增技术就是一种很好的方法。不过,由于很难在热循环测序反应中保证乳液微滴的稳定性,因此最开始实验的模板扩增方法是恒温扩增法(isothermal)。乳液PCR不需要借助细菌的帮助就能扩增模板,虽然这一点非常诱人,但最开始时并没有合适的表面活性剂能帮助乳液在热循环过程中保持稳定。于是出现了恒温扩增法,即滚环扩增反应(RCA)。虽然滚环扩增反应的产量非常高,但这些产物中大部分都不能用来作为测序模板。因此,还需要找到一种不需要细菌扩增,能用于有限稀释的模板扩增新方法。于是,人们又把目光转回了PCR法。在RCA法中,首先将模板克隆有限稀释之后置入光纤玻片上的小孔中,然后用橡胶衬垫把光 纤玻片封闭起来,将玻片放入传统的平顶PCR仪进行扩增。这种方法取得了成功,但是效率不高,因为在玻片中的热质量(thermal mass......阅读全文

DNA重组(DNA recombination)技术:DNA序列测定-1

㈣ DNA聚合酶 如前所述,选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶: 1.大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段) 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题:①Klenow片段的持续合成能力较

关于三代基因测序,你所需要知道的都在这儿!

  一、导读:  在大部分投资者对“二代测序”(NGS)还没有搞清技术细节的情况下,“三代测序”(3GS)又火了。  6月17日,医药板块中基因测序相关标的在“三代测序技术获得重大突破”的新闻影响上出现明显涨幅,我们也接到较多投资者对相关新闻的背景及观点的询问。为此,我们结合各方面资料归纳总结了三代

【回顾】一代、二代、三代测序技术

  第一代测序技术-Sanger链终止法  一代测序技术是20世纪70年代中期由Fred Sanger及其同事首先发明。其基本原理是,聚丙烯酰胺凝胶电泳能够把长度只差一个核苷酸的单链DNA分子区分开来。一代测序实验的起始材料是均一的单链DNA分子。第一步是短寡聚核苷酸在每个分子的相同位置上退火,然后

2013年10大突破性技术产前DNA测序:成长的烦恼

  自香港科学家卢煜明(音译)在1997年发现孕妇血液中存在胎儿DNA这一现象至今,无创产前DNA测序以前所未有的速度从实验室迈向市场。胎儿全基因组测序已经成为基因组革命的下一个前沿领域,随着测序技术的发展,胎儿全基因组测序也不再只是一个技术问题,而成为一个重要的社会问题。   重要性:未来,儿童

测序过程常见问题分析与解答

DNA测序样品用什么溶液溶解比较好?    答:溶解DNA测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应,需要一个最佳的 酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后,在进行了测序反应时,DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件,造成Taq酶的聚合性能

DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤-1

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最

DNA测序原理和方法

DNA测序原理和方法DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实

用DNA藏匿电脑病毒:一次基因测序就劫取机密

  DNA作为储存生物信息的结构,从演化产生以来一直保持着稳定、安全的性能。利用4个碱基的组合,它传递着一代又一代的遗传密码。这种密码组合的优越性如今也被科学家看在眼里,类似计算机中的1和0,他们利用ATCG同样创造了信息储存代码。但是黑客能不能会入侵DNA代码呢?目前来看,答案同样是肯定的。  D

DNA测序仪原理和方法

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种

ABI 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种

DNA测序最大赢家:Illumina公司

  对包括生物科技投资者在内的大多数人而言,人类基因工程是一大失败,未能带来新药物、医学新突破和其他的实际好处。因此,在我开始发表我称为“基因周”的系列博文之时,让我们回顾一下所有医学类股票中表现最佳者,其中不仅涉及生物科技,还涉及医疗设备和药物。生物科技领域里的最大赢家们公司5年总回报5

高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析

  随着人类基因组计划(human genome project )在2003年顺利完成,基因组测序技术取得了长足的进步,这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊,这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以

高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析

  随着人类基因组计划(human genome project )在2003年顺利完成,基因组测序技术取得了长足的进步,这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊,这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以

基因测序“摩尔定律”初现,“三代测序”要革“二代”的命?

  在“二代测序”(NGS)尚未迎来投资热潮的情况下,技术突破捷报连连的“三代测序”(3GS)又进入到了投资人的视野中。1986年,第一台商用基因测序设备正式出现,到第二代测序设备出现,期间间隔了19年时间。而第二代设备问世,到第三代设备的诞生,仅仅用了5年,基因测序设备的更新换代速度正在不断加快。

蛋白上游研究之Sanger测序技术的发展史

DNA测序技术是分子生物学研究中最常用的技术,它的出现极大地推动了生物学的发展。成熟的DNA测序技术始于20世纪70年代中期。1977年Maxam和Gilbert报道了通过化学降解测定DNA序列的方法。同一时期,Sanger发明了双脱氧链终止法。20世纪90年代初出现的荧光自动测序技术将DNA测序带

PCR技术(十六):PCR产物测序

PCR技术代替了为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后,它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与传统的将PCR片段克隆入质 粒或病毒基因组相比,直接序列分析有两个主要的优点:1)由于它是一

PNAS:半导体测序助力胎儿遗传病检测

  日前,来自中国广州医科大学等机构的科研人员报告了一种基于半导体的DNA测序平台可能有助于增加胎儿遗传病检测的速度并减少成本,研究报告被发表在5月5日的PNAS网络先行版上。   什么是基于半导体的DNA测序?   半导体DNA测序平台是使用半导体生物传感器芯片,对DNA复制期间产生的氢离子进

解析基因检测产业的过去、现在和未来

  《时间简史》的作者斯蒂芬•霍金、微软的创立者之一保罗•艾伦、DNA的发现者沃森、苹果的乔帮主,这些人和我们有什么区别?可能有很多差别,但其中一个很有趣的差别是:这些人都知道他们的全基因组序列。  这些人为什么要对自己的基因组测序?通过了解房子的结构,我们能预测它能抵抗几级的大风;通过了解一个国家

DNA序列测定技术(Sanger双脱氧链终止法与Maxam-Gilbert...-3

3.DNA 聚合酶通常用于双脱氧法序列测定的有几种不同的酶,其中包括大肠杆菌DNA 聚合酶I的Klenow片段(Sanger等,1977),反转录酶(见文献,如Mieredorf和Prfeffer,1987)经过修饰消除了 3'→5'外节酶活性的T7噬菌体DNA 聚合酶(

重磅|华大智造首度公开旗下测序仪文库构建核心序列

  2018年9月8日,在华大基因集团19周年庆前夕,华大智造首次向业内公开华大智造测序仪文库构建核心序列,致敬华大基因集团。华大智造成立于2016年,一直致力于研发和生产基因测序设备。如行业内小伙伴们所知,华大智造已拥有四款高通量测序仪——BGISEQ-500、BGISEQ-50、MGISEQ-2

王德强:对科研工作保持一颗平常心

   在单层石墨烯上打出了直径5纳米的孔,意味着什么?  这个问题也许让普通人一头雾水,但对中国科学院重庆绿色智能技术研究院(以下简称中科院重庆研究院)精准医疗单分子诊断技术研究中心的十多名研究人员来说,意义却不一般——它为实现更高效、低廉基因测序技术奠定了基础。  日前,中国科学院重庆绿色智能技术

基因测序市场发展现状分析 下一个万亿市场在哪里?

  一项新技术或产品的问世,给人们带来欣喜的同时,也必然会引起担忧,基因测序技术便是其中之一。基因测序技术被看作自疫苗问世以来疾病预防最重要的科技突破,它不仅可以大大降低遗传相关的疾病发生率,减少出生缺陷,还可以实现对疾病预测、预防、预警以及个体化诊疗;但目前,国内的基因测序市场却并不让人满意,甚至

基因测序科技突飞猛进

  最新一期的美国《福布斯》于2010年12月底正式出刊,本期封面文章标题为“基因测序科技突飞猛进”。文章对基因创业企业家Jonathan Rothberg和他发明的功能强大的基因测序仪器做了介绍。文章认为,这项发明可能会在医药、食品、能源,甚至消费产品上的一场革命,由此形成规模可达100

解开DNA之结:美国化工学家找到解开 DNA 分子扭结方法

  生活常识告诉我们,一切足够长且细的东西往往都有自我打结的“冲动”。DNA 作为自然界经典的多聚长链分子显然也不例外。如今,借助特别的 DNA 分子伸展技术以及对 DNA 扭结进行成像观察,麻省理工学院(MIT)的研究者们首次发现了一种生物机制,能决定 DNA 扭结在核酸链上的移动或静止状态。  

新一代测序技术开辟古基因研究新竞技场

   通过这根在西伯利亚Ust’-Ishim地区发现的距今4.5万年的股骨,研究人员对人类最古老的基因进行了测序。图片来源:ALEXANDER MAKLAKOV  当Kelly Harkins的博士研究——古结核病在2012年陷入僵局之后,她开始向更广泛的学界寻求帮助。

强强联合:在CRISPR/Cas9相关研究中应用高通量测序技术

  摘要:   CRISPR/Cas9基因组编辑技术和新一代测序技术(也称高通量测序技术),是当今对生命科学研究有重大影响的两项技术。二者并非毫不相干。有效地将二者联用,有时可以大大加速科研进程。两者之间有什么样的联系呢?在哪些研究领域或方向上可以联用呢?上海伯豪生物根据在这两个领域的技术服务经验

T7 DNA聚合酶测序技术

一、概述T7 DNA聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及单链和双链3'→5'外切酶活性。当T7 DNA聚合酶用适当方法处理后,可使3'→5'外切酶活力明显下降。改造后的T7 DNA聚合酶又称T7测序酶。使用T7测序酶得到的测序数据具有在每个碱

DNA测序技术的现状和发展(一)

一、我们将如何应对海量的基因信息新一代测序技术带给人们大量遗传信息的同时,却成为限制其广泛应用的一个障碍。1980年,英国生物化学家Frederick Sanger与美国生物化学家Walter Gilbert建立了DNA测序技术并获得诺贝尔化学奖,至今已有近三十年了。在这三十年,DNA测序技

Nature,Science两大顶级杂志聚焦单细胞测序

  去年Nature Methods盘点值得期待的技术中,就有单细胞测序,今年Science盘点更是将这一技术列为2013科研热点的榜首。近期两个研究组分别在Science,Nature Methods杂志上公布了单细胞测序技术的最新进展,分别介绍了这种“Solitary Sequencin

建立随机重叠DNA插入文库实验

下面的方案描述了鸟枪法测序的起始步骤,从靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌体载体构建 DNA 片段文库,也包括断裂靶 DNA 的两种方法--超声法和喷雾法,以及用 DNA 聚合酶修复片段末端的技术要点。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。试剂、