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生物大分子的离心分离实验(三)

例(6)用Cs2SO4 及尿素作梯度材料分离生物大分子样品:初步离心后的蛋白-核酸混合液梯度液:3.00g Cs2SO4 2.5ml 8M 尿素(经过混合床去离子处理的)50μl 1.0M Tris-HCl(PH7.4)25μl 0.2M EDTA(PH7.4)1.25ml 样品的水溶液以上各项充分混合后注入5ml PA 快速密封管固定角式转头 130,000xg,5℃ 离心64 小时,慢减速或600,000xg,5℃ 离心14 小时,慢减速甩平转头 400,000xg,5℃ 离心22 小时·结果分析:其中蛋白用35S 同位素标记RNA,DNA 用32P 同位素标记离心后样品分布收集成30 管,在液闪仪上测定,绘出从离心管表面—>管底的容量为横坐标,同位素32P, 35S 计数为纵坐标的曲线图,很明显可以找到蛋白,DNA,RNA 的峰位置。例(7)用RbCl 梯度分离不同密度......阅读全文

生物大分子的离心分离实验(一)

一、引言在八十年代以前,生物大分子(特别是核酸、蛋白)用离心方法分离纯化占有很重要的地位。用分析超离心方法测定生物大分子的分子量、沉降系数、扩散系数、微分比容等在生物化学实验中也占有一席之地。八十年代以后,由于离心技术的快速发展(微处理器的引入,变频驱动的完善、转速的提高等等),先进的制备用超速离心

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

蛋白质提取与制备

1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

蛋白质浓缩和溶质的去除实验             实验步骤 一、层

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法,包括冻干、反向萃取、溶质析出,precipitation、透析(溶剂交换) 、超滤和层析技术。值得注意的是,在众多微和设备发展的支持下,小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大

用 CsCl,Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度离心 一

用 CsCl,Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度离心一)概述:近年来用重金属盐(主要是 CsCl)分离生物大分子的平衡等密度离心;用 Percoll(由瑞典 pharmacia-Biosystems AB开发的胶体硅材料,即在硅颗粒外包覆 PVP塑料

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

生物大分子样品的保存

生物大分子制成品的正确保存极为重要,一旦保存不当,辛辛苦苦制成的样品失活、变性、变质,使前面的全部制备工作化为乌有,损失惨重,全功尽弃。影响生物大分子样品保存的主要因素有:⑴空气:空气的影响主要是潮解、微生物污染和自动氧化。空气中微生物的污染可使样品腐败变质,样品吸湿后会引起潮解变性,同时也为微生物

实验离心技术进展(一)

引言实用离心技术可分为二大类:一类是用于化工、制药、食品、污水处理、油品处理。工业的大型制备用离心分离技术,所使用的离心机及其附件属于大中型工业生产设备。其中管式离心机转速较高,小型可达50,000rpm,较大型(每小时处理量在1.5 吨以 上)也可达15,000rpm(国外典型机如Sharples

实验离心技术新进展(三)

实验离心机技术新进展:设备:近二十年离心机的转速、离心力加速度、容量、使用寿命,都有了很大提高,在驱动器、转头、电子、电器空控制、制冷系统、整机配置及附件等各方面都有了长足进步。至今,我们可以说,对于已知或未知的生物体组份,用实验离心设备进行分离纯化已经没有太多困难。现代离心设备除了直接按照使用者要

关于密度梯度离心有关问题的补充说明(二)

(四)转头、离心管的选择l  转头选择:速率一区带(Rate-Zonal)沉降密度梯度离心:选择甩平转头及垂直管转头,大容量选择区带转头。 l  速率-区带上浮密度梯度离心,小容量以甩平转头为主,大容量用区带离心转头;其他各种型式转头(固定角,垂直管,小角度)也可以试用

多位专家指导:如何提取和研究血液DNA,RNA与蛋白

  血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。  产前基因筛查是血液检测的一个重要应用,通过分析孕妇血液中的胎儿DNA来鉴定染色体异常(比如唐氏综合症)。此外,越来越多的研究者开始关注血液

离心机的结构和工作原理

离心机可分为工业用离心机和实验离心机。实验用离心机又分为制备性离心机和分析性离心机,制备性离心机主要用于分离各种生物材料,每次分离的样品容量比较大,分析性离心机一般都带有光学系统,主要用于研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质,依据待测物质在离心场中的行为(用离心机中的光学系统连续监测),能推断物质的纯

电动离心机的原理及操作使用

离心机可分为工业用离心机和实验用离心机。实验用离心机又分为制备性离心机和分析性离心机,制备性离心机主要用于分离各种生物材料,每次分离的样品容量比较大,分析性离心机一般都带有光学系统,主要用于研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质,依据待测物质在离心场中的行为(用离心机中的光学系统连续监测),能推断物质的

实验室设备:离心机的主要构造和类型

  离心机可分为工业用离心机和实验用离心机。实验用离心机又分为制备性离心机和分析性离心机,制备性离心机主要用于分离各种生物材料,每次分离的样品容量比较大,分析性离心机一般都带有光学系统,主要用于研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质,依据待测物质在离心场中的行为(用离心机中的光学系统连续监测)

离心机的主要构造和类型

离心机可分为工业用离心机和实验用离心机。实验用离心机又分为制备性离心机和分析性离心机,制备性离心机主要用于分离各种生物材料,每次分离的样品容量比较大,分析性离心机一般都带有光学系统,主要用于研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质,依据待测物质在离心场中的行为(用离心机中的光学系统连续监测),能推断物质的

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析-3

 (四)磁性分离法  1975年,Hersh报道了用磁化分离技术分离血清狄高辛放免测定的B、F后,受到了广泛的重视。近年来国内外许多学者对磁化颗粒的制备进行了系统地研究,应用于B与F的分离,并取得了引人注目的进展,使放免的B、F分离不再使用离心,缩短了放免操作时间,便于放免自动化测量。磁性分离的具体

离心技术的类型

离心技术的类型最大速度方法 (1)移动界面超速离心法 含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时,每种颗粒都达到其最大沉降速度,这时样品开始分离。离心管的上层逐渐形成透明的上清液,并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面,界面的移动相对于每种组分来说是特征的。虽然利用这种方法不一定能实现组分的纯化分离,

离心机的首要结构介绍

摘要:【摘要】离心机可分为工业用离心机和实验用离心机。实验用离心机又分为制备性离心机和分析性离心机,制备性离心机主要用于分离各种生物材料,每次分离的样品容量比较大,分析性离心机...... 离心机可分为工业用离心机和实验用离心机。实验用离心机又分为制备【择要】离心机可分为家产用离心机和尝试用离心机。

质谱沙龙第十七期活动报道

      色谱质谱界著名专家为您揭示:我们还需做出什么努力,来迎接痕量分析的挑战?AB总部Qtrap产品线经理现场介绍5500新看点……       2009年3月28日下午,质谱沙龙第十七期活动

分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作

  【实验目的】   (1)了解实验的常规仪器、设备、耗材。   (2)掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。   【实验内容】   一、验室的常规仪器、设备   (一) 温度控制系统:   1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的

电泳的原理、分类和应用

  【概述】带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。  1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早发现。 

抗体纯化方法介绍

抗体制备制备出效价高,特异性强,稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础,抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败,不同的免疫学实验方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE, WB等)对抗体的效价,浓度和纯度有不同的要求。我们知道,一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体

离心技术原理与类型(二)

等密度方法等密度离心法也叫沉降平衡法。所谓等密度是指样品密度与介质的密度相等,实际上是在梯度密度介质中进行的。该技术的特点是沉降分离与样品物质的大小和形状无关,而取决于样品物质的密度。这种方法非常类似于电泳中的PH 梯度等电聚焦方法,在离心时,颗粒依其密度的不同沉降或向上漂浮,直到移动到与自

盘点丨问鼎诺贝尔奖的10大检测技术

  诺贝尔奖是以瑞典著名的化学家 阿尔弗雷德·贝恩哈德·诺贝尔的部分遗产(3100万瑞典克朗)作为基金在1900年创立的。该奖项授予世界上在物理、化学、生理学或医学、文学、和平和经济学六个领域对人类做出重大贡献的人,于1901年首次颁发,截止2016年共授予了881位个人和23个团体。今天我们将盘点

蛋白质分离纯化的新技术及技术要点

浅述蛋白质分离纯化的新技术摘 要: 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术,综和近年来国内外的一些研究结果,结合实际应用的例子,分析了各种分离纯化方法的优点,同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。&nbs

高速离心机技术在生物学上的应用(一)

离心技术在生物科学,特别是在生物化学和分子生物学研究领域,已得到十分广泛的应用,每个生物化学和分子生物学实验室都要装备多种型式的离心机。离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备,生物样品悬浮液在高速旋转下,由于巨大的离心力作用,使悬浮的微小颗粒(细胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降,从而与溶

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(一)

  通过生物化学实验应该做到:    ⑴ 学习设计一个实验的基本思路,掌握各个实验的基本原理,学会严密地组织自己的实验,合理地安排实验步骤和时间。    ⑵ 训练实验的动手能力,学会熟练地使用各种生物化学实验仪器,包括各种天平、各

实验离心技术进展(三)

转头:突出的改进表现在经计算机计算优化后的轻型转头;碳纤维材料制造的超速和大容量超轻转头;适用于生物大分子(DNA,RNA,蛋白等)离心分离用的小倾角转头(固定倾角 7°~10°);超高速,特大离心力转头等等。 铝合金制造的轻型大容量转头:以往的6×500ml 角转头自重24kg 以上,经