亚细胞（细胞器）构造的组成与功能（二）
二种内质网可互相连接，一定条件下可转换，但构成成分及酶系差别很大。 △ 高尔基复合体：一般位于核附近 组成：扁平囊泡、大囊泡（又称分泌泡或浓缩泡）、小囊泡 △ 线粒体： 结构： 线粒体外膜。外室、基粒（可溶性ATP）、核糖体、内膜、脊。又分为板状脊与管状脊二种结构形式。 △ 核糖体：又称核蛋白体或核糖核蛋白体、由核糖核酸与蛋白质组成、由大亚基单位及小亚基单位组成。 ●核糖体 真核细胞核糖体80S, M＝500万大亚单位：60S，M＜300万，占60％--70％ 由35S RNA及40......阅读全文
LSCM细胞亚微结构
细胞亚微结构(细胞器探针)一般的光学显微镜由于分辨率有限，在观察细胞器结构时受到一定的限制，而共聚焦激光扫描显微镜可获得较一般普通光学显微镜分辨率高的细胞内线粒体、高尔基复合体、内质网、溶酶体等细胞器图像，同时还可动态观察活细胞状态下细胞器的形态学变化情况，此外还可通过光学切片即断层扫描技术进行三维
细胞亚株的概念
中文名称细胞亚株英文名称cell substrain定 义由原细胞株再次克隆形成的与原株性状有部分不同的细胞群。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞培养与细胞工程（二级学科）
怎么亚细胞定位分析
用报告基因技术呀 比如说最常用的绿色荧光蛋白GFP或者改造过的EGFP等。和目的基因构建成为融合蛋白，转入细胞中以后，用激光扫描共聚焦显微镜就可以观察到基因的亚细胞定位
亚细胞的成分介绍
细胞是生物体的构造和生理的基本单位，却不能因此认为所有的生物细胞都相同，即使在同一个个体内，也有因为分化而产生各式各样外观与功能不同的细胞，即使相同种类的细胞，也可能正在执行的生理工作也有差异，但是基本上彼此都有共同的基本构造。细胞膜细胞膜为细胞与环境之间以及细胞器与细胞质之间的分界，能够调节物质的
肝亚细胞部分的制备
离心法 钙沉淀法 实验材料 肝线粒体 试剂、试剂盒 蔗糖
肝亚细胞部分的制备
肝是代谢药物的主要场所，而在代谢药物中起关键作用的酶是位于线粒体的细胞色素P-450系统．常称药酶或混合功能氧化酶，或单加氧酶。一般说来，许多药物经肝药酶代谢后生成低毒或无毒分子随尿和胆汁排出，但亦有一些药物及其他化合物经肝药酶代谢激活成毒性更大的中间产物，引起毒性。因此，肝药酶代谢药物的分子机制及
细胞化学词汇亚致死基因
中文名称：亚致死基因英文名称：sublethal gene定 义：其存在可以妨碍或减弱生物体正常功能发挥的一种基因。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
什么是亚细胞器
显微结构：细胞核、线粒体、叶绿体（线粒体光镜下能看见的！）亚显微结构：内质网、细胞膜、核糖体，以及细胞器的精细结构。
亚细胞结构分离的技术
分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆（Homogenization）是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆介质（即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液）研磨，使细胞被机械地研碎成为各种亚细胞组分和包含物的混合物。分离亚细胞组分的第一步是分级分离。它通过
亚细胞器有哪些
亚细胞器就是指要用电子显微镜才能观察到的细胞器,因而电子显微镜观察到的的细胞结构也称之为亚显微结构.具体的亚细胞器有：核糖体,中心体
关于亚细胞定位的基本介绍
亚细胞定位是查找生物大分子在细胞内的具体存在的位置，如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。常见的亚细胞定位方法有生物信息学预测法、免疫荧光法、GFP融合蛋白表达法。 不同的细胞器往往具有不同的理化环境，它根据蛋白质的结构及表面理化特征，选择性容纳蛋白。 蛋白质表面直接暴露于细胞器环境中，它由序列
细胞和亚细胞提取物的制备实验
从组织和细胞中提取蛋白可能是蛋白质组研究中最关键的一步，因为这一步影响了蛋白的产率、生物活性和特定目的蛋白结构的完整性。因此，我们要注意蛋白提取条件的选择。主要目标是在破坏力最小、保持蛋白结构完整性的前提下，可重复地使细胞最大程度地裂解。方案1 哺乳动物组织的匀浆实验实验方法原理对于细胞内蛋白的纯化
细胞和亚细胞提取物的制备实验
方案1 哺乳动物组织的匀浆实验 方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验 方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验 方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验 方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验 方案6 细菌中重组蛋白的
细胞和亚细胞提取物的制备实验
实验方法原理 对于细胞内蛋白的纯化和特性分析，重要的是选择一种有效的方法来破碎细胞或组织，使蛋白迅速地从胞内相对隔离的空间中释放到缓冲液中，而该缓冲液应对所研究的蛋白的生物活性没有影响。广泛使用的破碎软组织的方法之一是勻浆。在本方案中，讨论了使用机械力匀浆组织：在 Potter-Elvehjem
亚细胞（细胞器）构造的组成与功能
分离与纯化对象之一：“亚细胞（细胞器）”的构造与功能 上世纪20年代以Svedberg为首的欧洲科学家艰难研制的超速离心机原型主要目的是想分离和纯化病毒、细胞和亚细胞构造（细胞器），然而50年代中期开始生产的*代及以后的各代超速离心机，在很长一段时期内（50年代—80年代）主要用于分离和纯化
肝亚细胞部分的制备——离心法
实验材料肝线粒体试剂、试剂盒蔗糖氯化钾生理盐水仪器、耗材离心机离心管移液枪枪头肝是代谢药物的主要场所，而在代谢药物中起关键作用的酶是位于线粒体的细胞色素P-450系统．常称药酶或混合功能氧化酶，或单加氧酶。一般说来，许多药物经肝药酶代谢后生成低毒或无毒分子随尿和胆汁排出，但亦有一些药物及其他化合物经
亚精胺引发细胞吞噬的介绍
天然物质亚精胺（spermidine）或可阻止与年龄有关的记忆能力下降，这是德国和奥地利的科学家合作研究的结果。2013年9月1日，该成果发表在《自然·神经科学》网络版上。 德国柏林自由大学的斯蒂芬·西格瑞斯特教授和奥地利卡尔·弗朗岑斯大学的弗兰克·马德欧教授合作团队研究的结果表明，亚精胺可
物质代谢检查方法使用亚细胞成分
使用亚细胞成分运用超离心、差速离心或密度梯度离心等离心技术将细胞内的各种细胞器，如细胞核、核糖体、微粒体、线粒体等进行分离，再使用其他方法来研究亚细胞成分的代谢特点与各种代谢过程在细胞内进行的部位。比如，利用该方法我们得知脂类物质的分解代谢是在线粒体中进行，脂肪酸的合成是在胞浆中进行，核糖体是合成蛋
亚细胞构造的离心分离概论
现代生物学研究常常需要提取和纯化细胞及组织中的亚细胞构造（细胞核、质膜、内笪纲、高尔基体、线粒体、溶酶体、微粒体等等）。在经过选择的最合适的生物体匀浆制备后，用离心法提取和纯化亚细胞构造是最常用、也是最有效的实验手段。 （一）匀浆制备： 将生物体组织剪切成2~3毫米小块或小片，以每100毫升加湿重
如何做蛋白亚细胞定位实验？
生物功能的区域化是生命的一种基本现象，这种区域化是通过不同层次的系统组成，从器官到特异细胞，再到细胞内部的亚细胞结构，最后到大分子复合物。在细胞水平，蛋白在特定的时间和空间发挥作用，这种区域化的定位为蛋白发挥作用提供特定的化学环境以及所需的互作因子等。蛋白的错误定位容易导致细胞活动的紊乱。因此，了解
亚细胞结构的分离与鉴定2
第三节 微粒体的分离细胞通过匀浆破碎时，细胞质膜碎成片段，这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器（细胞核、线粒体、质膜、内质网等）的小泡有不同的特性，所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体，称微粒体（microsome）。分离
亚细胞结构的分离与鉴定1
细胞由各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一目标的基本手段。一般认为，转速为10～25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/mi
细胞和亚细胞提取物的制备实验3
方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验实验方法原理去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象，并对还原环境敏感，那么在裂解缓冲液
细胞和亚细胞提取物的制备实验8
方案8 酵母提取物的制备实验实验方法原理由于酵母的经典遗传分析和分子遗传分析都已经研究得非常透彻，因而对于纯化重组动物蛋白来说，酵母是一个很有吸引力的表达体系。关于培养和收集酵母细胞的讨论，尤其是芽殖酵母，参见 Jazwinski(1990)。酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如 Fr
细胞和亚细胞提取物的制备实验7
方案7 从包含体中溶解大肠杆菌重组蛋白实验实验方法原理由于分子克隆技术能够使细菌高水平表达蛋白，因此原核表达是一个非常便利的获得重组蛋白的系统。遗憾的是这些蛋白在细菌中易于聚合和沉淀，形成难溶解的包含体，因而很难纯化。非细菌蛋白的包含体尤其普遍。虽然没有一种可用于所有蛋白的普适方法，还是有许多策略适
细胞和亚细胞提取物的制备实验6
方案6 细菌中重组蛋白的大量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。适用于细菌细胞蛋白提取的方法包括超声波处理、玻璃珠研磨、钒土或石英砂研磨、French 加压罐高压剪切细胞和溶’菌酶处理。这些方法适用于从各种革兰阴性菌和革兰阳性菌中制备蛋白提取物。通常是使用酶的方法破坏细胞
细胞和亚细胞提取物的制备实验5
方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。为了检测诱导和重组蛋白的表达水平，评估方法的快速简单是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解细胞，小量制备细菌提取物。实验材料表达目标重组蛋白的细菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇（DTT)样
细胞和亚细胞提取物的制备实验4
方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法，能释放完整的细胞器和制备细胞膜（Hunter and Commerford，1961)。该方法的原理很简单：细胞放在一个压力舱中，在高压下（约5500kPa，相当于800ps
细胞和亚细胞提取物的制备实验2
方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验实验方法原理培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如 l%NP-40 或 l%Triton X-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比方案 1 中所讨论的匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表
细胞和亚细胞提取物的制备实验9
实验方法原理差异去垢剂分离法（differential detergent fractionation, DDF) 包括使用一系列含不同去垢剂的 PIPES 缓冲液对细胞进行连续抽提，首先是毛地黄皂苷，其次是 Triton, 最后是 Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生 4 种在生化和电泳上相异的组