用于PCR的模板DNA制备实验
实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打开 Eppendorf 管盖子，将其置于 37℃ 烤箱中干燥 1～2 h。5. 加裂解液 100μl，混匀后加 20 mg/ml 蛋白酶 K 15～20 μl，终浓度 10 μg/ml 间隔振荡，55℃ 烤箱中过夜。裂解液配制：1 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）2 μl，0.5 mol/L（pH 8.0）EDTA 4 μl，10％ SDS（pH 7.2）20 μl，加水至 100 μl。6. 观察裂解液是否清亮，如不清亮，根据组织量补加蛋白酶 K 3～5 μl，继续消化至裂解液清亮。7. 加 500 μl Tris 饱和酚，混合至乳状。8.......阅读全文
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验
酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA 改进的石蜡切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰冻片 含血标本 胸腹水或尿液
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验
实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打开 Eppendor
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验——冰冻片
实验步骤1. 将 10 μl 冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。3. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μ
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验——含血标本
实验步骤1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的无菌离心管（15 ml 管）中。2. 2000 r/min 离心 10 min。吸去血浆，用指弹匀剩余的有核细胞和红细胞，加入红细胞溶解液 10 ml 并混匀，常温下放置 30 min。红细胞溶解液配
用于PCR的模板DNA制备实验——直接法（DNA 免提法）
实验步骤1. 标本太少时，可将一张石蜡切片经脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 加入 20～80 μl 直接裂解液中，加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2～1 μl，放置 55℃ 裂解 3 h 以上；100℃10 min 灭活蛋白酶 K；10000 r/min 离心 10
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验——胸腹水或尿液
实验步骤1. 标本 10 ml 以上，2000 r/min 离心 10 分钟，倒去上清液。用指弹匀沉淀物，加入适量组织裂解液，37℃ 下放置半小时以上。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55
用于PCR的模板DNA制备实验——改进的石蜡切片 DNA 提取方法
实验步骤1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上，常规烘片，脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
用于PCR的模板DNA制备实验——酚-氯仿法提取石蜡组织中DNA
模板 DNA 质量直接影响 PCR 结果，是 PCR 成功的关键之一。根据其检测对象（组织细胞材料）的不同，有不同的制备方法，常用的材料有石蜡切片、冰冻切片、血细胞、胸腹水等。实验步骤1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA，以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株